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植物病原真菌是导致作物产量损失和品质下降的重要因素之一，因此，开发低毒高效的抑菌剂一直是研究的热点。本研究从百里香植株茎中分离得到1株内生真菌2-63菌株，通过形态学结合分子生物学鉴定其为塞缪尔斯木霉Trichoderma samuelsii。平板拮抗活性表明：T. samuelsii 2-63菌株对8种植物病原真MRTX1133小鼠菌的拮抗活性均达70.0%以上，其中对枸杞黑霉病菌AltGDC-0973供应商ernaia alternata拮抗活性最高可达87.1%；平板共培养试验表明：T. samuelsii 2-63菌株挥发性有机化合物(VOCs)也表现出对病原菌不同程度的抑制活性，抑制率在31.0%～68.5%；但T. samuelsii 2-63菌株液体发酵液和粗提物的抑菌活性较低。抑菌活性结果结合气相色谱-质谱联用(GC-MS)分析试验结果表明：T. samuelsii 2-63菌株抑菌活性的关键成分为VOCs，其主要组分为6-戊基-2H-吡喃-2-酮(6-PP)。探索性试验表明：固体发酵条件下，大米培养基比大麦培养基更利于6-PP的产生，最大产量为38.6 mg/mL；浅层液体培养条件下，6-PP随着培养时间的增加出现先上升后下降的趋势，在培养第15天时产量最大，为0.1 mg/mL。该研究Genomic and biochemical potential结果为基于木霉菌的微生物菌剂和农药的开发提供了一定的理论依据和试验基础。

抑郁症是一种常见的精神疾病,由于压力、应激等多种复杂因素导致抑郁症的患病率、CDK抑制剂发病率逐年递增。但其发病机制仍尚未完全阐明,缺乏客观的诊断和治疗方法 ,加之其早期发病较为隐匿,相当一部分患者并未获得及时有效的治疗。抑郁症的发病风险由基因和环境共同决定,研究表明表观遗传机制可调节暴露于不良应激后抑郁风险的持续增加,并提供了一个能medical management够将遗传和环境因素整合在一起的机制框架。表观遗传学是指影响基因表达和翻译的过程,不涉及DNA序列的变化,主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑及非编码RNA调控等。本综述从表观遗传学角度总结DNA甲基化、组蛋白修饰、泛素化和非编码RNA在抑郁症发生中的作用机制、抗抑郁治疗机制及最新研究进展,以期为探究抑郁症新的致病机制、寻找新的治疗策略和药物靶标提供新GNE-140的思路。

目的 观察伴非自杀性自伤（Non-suicidal Self-injury,NSSI）抑郁症女性青少年的情绪行为、自杀态度、社会支持情况及其之间的相关性。方法 研究组（伴NSSI）和对照组（不伴NSSI），在入组后3日内药物治疗前进行抑郁自评量表（Self-Rating Depression Scale,SDS）、汉密尔顿抑郁量表（Hamilton Depression Scale-17,HAMD-17）、儿童行为量表（Child Behavior Checklist,CBCL）、自杀态度调查问卷（Suicide Attitude Questionnaire,QSA）、https://www.selleck.cn/products/MK-2206.html社会支持评定量表（Social Support Rate Scale,SSRS）评定。结果 两组之间HAMD、SDS评分差异无统计学意义（P>0.05）;CBCL评分显示研究组活动能力、社交能力评分均低于对照组（P<0.05），焦虑强迫、抑郁退缩及攻hepatic cirrhosis击性因子评分均大于对照组（P<0.05）;QSA量表显示研究组对自杀行为性质的认识、对自杀者的态度，对安乐死的态度及总分低于对照组（P<0.05）;SSRS量表显示研究组客观与主观支持评分均低于对照组（P<0.01）；研究组SDS、HAMD与QSA、SSRS评分总分呈负相关（P<0.05）。结论 对伴NSSI的抑郁症患者不能只关注NSSI行为，更需要关注可能较NSSI行为出现更早，持续时间更长的其他相关行为；个MLN4924供应商体对自杀态度的评价可能是一项更加有效的预测未来是否发生自杀行为的指标；增加家庭亲子之间、学校师生及同学之间社会支持，使伴NSSI的抑郁症患者具有更好的社会支持感知能力，能够有效的减少NSSI行为发生率。

目的:中药活性成分研究是先导化合物发现和新药研究的重要源泉。中药当中包含许多成药的明星分子,羟基酸是生物活性分子、小分子药物及天然产物中非常重要的一类结构单元,其中手性羟基引入方法是合成此类化合物急需解决的问题。而合成生物学作为一个新兴学科,是当前科学研究的热门,通过利用Protein-based biorefinery分子生物学和基因编辑等技术设计构建反应路径,通过高通量检测和AI学习优化重构线路发展,成为一个有机的进化整体。是解决天然产物丰度低,化学合成难的有效手段之一,生物合成途径解析,非天然氨基酸切块的生物合成,酶法后修饰应用等为天然产物的开发和应用提供新的技术。而我们也设想探索酶促反应方法及机制,合成羟基酸类化合物。所以构建高效的合成技术对药物和中药活性成分研究的绿色生物制造至关重要。本论文旨在开发建立具有高立体选择性、高区域选择性、高效率的不对称羟基化绿色合成技术。方法:本论文发现了一类α-KG依赖性的非血红素铁双加氧酶亚家族的非天然催化活性,该酶家族成员具有催化二级或三级C(sp~3)–H键的区域立体发散性氧官能化的多样功能。经过大肠杆菌异源表达,蛋白纯化,酶活测定,反应条件优化,底物与酶的二维筛选扩大适用范围,产物表征以及克级制备应用,通过单晶培养及旋光测试确定手性构型。利用计算机辅助分子对接及分子动力学模拟解释反应可能的机制及不同的选择性。最终获得的不对称羟基化产物对新冠病毒Mpro/3Clpro进行抑制活性和IC_(50)值测试。结果:本论文通过酶促反应开发建立了一套高立体选择性、高区域选择性、高效率的绿色不对称羟基合成技术。同时开发了连续不对称双羟基化合成方法技术,分别可以从苯甲醛及苯丙酸类底物出发经酶级联反应获得双羟基化产物。实现了4种单羟基化反应类型共计92个羟基酸的高效不对称合成,其中64个新化合物;2种双羟基化反应共计38个双羟基化产物,30个新化合物。大部分产物的ee>90%,de>95%;极大地丰富了该类化合物的物质基础,同时为该类化合物的合成、纯化、分析、检测建立了一套行之有效的方法。本论文的部分单羟基化和双羟基化产物具有一定的抗新冠病毒活RP56976溶解度性,其中双羟基化产物的抗新冠病毒活性优于单羟基化,可作为新型冠状病毒(2019-n Co V)Mpro/3CLpro抑制剂的活性化selleck HPLC合物进一步研究。结论:本论文通过酶促反应开发了高立体选择性、高区域选择性、高效率的不对称羟基绿色合成技术。通过灵活调整催化剂与底物的组合实现区域选择性不对称单羟基化反应,绘制了底物与酶相互反应的相关“二维谱图”;通过理论计算解释了区域选择性及立体选择性的差异,为该类酶进一步应用提供理论指导。并通过位点选择性互补催化剂的组合实现了可控的酶级联不对称双羟基化反应,构建了手性小分子羟基酸化合物库。本论文希望该酶促羟基化反应技术能够用于非天然手性小分子片段的构建和活性天然产物分子或药物分子的后期不对称修饰,服务于中药活性天然产物等小分子化合物的不对称合成,改善小分子的理化性质,为药物开发提供物质基础。

Bt毒素是源于苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）的具有特殊杀虫功能的大分子蛋白，其制剂和转基因作物已广泛用于害虫Labio y paladar hendido防治，产生了巨GSI-IX体内实验剂量大的经济和社会生态效益。围绕Bt毒素挖掘和提升其应用价值是持续研究的热点，特别是随着Bt毒素结构功能和作用机制日趋明晰，为其功能修饰和创新应用创造了条件，相关研究蓬勃发展，成效显著。大量研究表明，采用定点突变、结构域替换或融合以及抗独特型抗体模拟等策略，是理性设计活性更高、稳定性更强、杀虫谱更广、非靶标生物安全性更高甚至是可用于害虫抗药性治理的有别于母体Bt毒素的突变体、结构杂合体乃至功能效应物抗体等新型杀虫蛋白的有效手段；此外，采用催化毒素活化、驱动毒素靶向受体结合、促进毒素表达以及同源或异源杀虫材料复配或共表此网站达的协同促效等创新增效策略，也是助推Bt毒素应用价值的重要手段。本文总结了Bt毒素结构功能和作用机制，梳理了基于Bt毒素功能修饰的突变体、结构杂合体以及功能效应物抗体等新型杀虫蛋白理性设计和基于Bt毒素功能增效的创新应用策略等相关研究进展，并结合作者团队在模拟Bt毒素杀虫功能效应物抗体靶向设计研发方面的最新成果，探讨了基于Bt毒素的杀虫蛋白理性设计与创新应用策略未来发展动向及潜在可行捷径，为相关研究提供较为全面的最新有价值的文献资料和启发思路。

4,6-α-葡聚糖转移酶(4,6-α-Gtf,EC 2.4.1.-)是近些年发现的新型转苷酶,可转化淀粉合成富含α-1,6键的低热量糊精,有望代替传统麦芽糊精应用于食品加工。本实验室前期已鉴定Bacillus sporothermodurans来源的4,6-α-Gtf(Bs Gtf)和LimosiJQ1lactobacillus fermentum NCC 3057来源的4,6-α-Gtf(Lf Gtf)。其中Bs Gtf制备的低热量糊精α-1,6键含量为同亚家族最高,即抗性最高;Lf Gtf制备的低热量糊精具有分子量低、可溶性好的特点。Bs Gtf和Lf Gtf制备低热量糊精各具优势,但均存在最适温度低、热稳定性差、可溶性表达量低的问题,限制了其工业应用。针对上述问题,本论文以Bs Gtf和Lf Gtf为研究对象,通过理性设计和定向进化等方式,对Bs Gtf和Lf Gtf的热稳定性进行改造;通过对末端序列截短以及表达元件优化,在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中对Bs Gtf和Lf Gtf进行重组表达研究;最后,通过对比不同蛋白酶基因敲除宿主及发酵条件优化,对Bs Gtf和Lf Gtf优势突变体表达菌株进行摇瓶和3-L罐发酵水平研究。主要研究结果如下:(1)Bs Gtf的热稳定性改造。首先,采用多序列比对、表面电荷优化和定向进化策略对Bs Gtf进行热稳定性改造,共获得8个热稳定性提高的突变体。其次,采用迭代组合的方式进行组合突变,获得了具有协同效应的6个突变体组合E110P/S209＿K210ins P/D30K/E31I/K327E/K328E/G331S/L333K/S405N/N406D/E407L/E408N/K455P,命名为CMⅥ。与野生型相比,CMⅥ最适温度提高10℃(55℃),T_m提高12.01℃(64.5℃),在50℃条件下半衰期(t_(1/2))提高16.4倍(144.4 min)。然后,通过分子动力学模拟(MD),结果表明CMⅥ的RMSD、SASA值比野生型明显降低,说明CMⅥ整体结构紧凑,刚性增强。结构分析表明表面电荷优化是提高CMⅥ热稳定性的主要原因。最后,在50℃条件下,分别利用野生型和优势突变体制备低热量糊精,优势突变体酶转化产物中抗性成分含量是野生型的1.46倍,说明优势突变体在高温条件下具有更好的应用效果。(2)Lf Gtf的热稳定性改造。首先,借助计算机辅助设计、同源序列比对和定向进化策略对Lf Gtf的Loop区域进行改造,共获得11个热稳定性提高的突变体。其次,采用迭代组合的方式进行组合突变,获得了具有协同效应的9个突变体组合Y134V/Y241P/N247P/D420P/A473P/T517M/M765L/L777P/S813P,命名为CM9。与野生型相比,CM9最适温度提高5℃(50℃),T_m提高5.8℃(59.5℃),在50℃条件t_(1/2)提高12.0倍(330.1 min)。然后,通过MD分析了CM9结构变化,结果表明CM9的RMSD、SASA值较野生型明显降低,说明CM9整体结构紧凑,刚性增强,其中最为显著的是酶表面三个Loop区域的摆动幅度明显降低,这些均有利于CM9热稳定性提高。最后,在50℃条件下,分别利用野生型和优势突变体制备低热量糊精,其中优势突变体酶转化产物中抗性成分含量是野生型的1.43倍,说明优势突变体在高温条件下具有更好的应用效果。(3)Bs Gtf在B.subtilis中重组表达。首先,通过MD模拟发现对Bs Gtf的C端截短158个氨基酸后,突变体BsΔGtf_(1-705)(简称BsΔGtf)结构最稳定。将其在B.subtilis中重组表达,酶活性是对照的3.4倍。其次,从11个内源性启动子中筛选出最优单启动子P_(npre),并与其它启动子串联组合,最终确定双启动子P_(hag-npre)最有利于BsΔGtf重组表达,酶活性是对照4.83倍。在此基础上,通过信号肽筛选,发现信号肽SP_(ywe A)效果最显著,酶活性是对照的1.41倍。将上述的策略引入热稳定性提高的突变体(BsΔm Gtf)进行重组表达,其酶活性达到1035.9 U·m L~(-1),是优化前的24.84倍。然后,在3-L罐体系中发酵验证BsΔm Gtf的重组表达效果,确定BsΔm Gtf适合于3-L罐大体系发酵。其次,通过验证敲除不同蛋白酶基因的B.subtilis宿主WS8-WS11,最终确定敲除六种蛋白酶基因(Δnpr B,Δmpr,Δbpr,Δepr,Δapr E和Δnpr E)的宿主菌WS9最有利于BsΔm Gtf重组表达,摇瓶发酵酶活性是1204.1 U·m L~(-1)。最后,对摇瓶发酵培养中重要成Gefitinib-based PROTAC 3分及参数进行优化,重组菌WS9BM的胞外BsΔm Gtf酶活性达到3556.5 U·m L~(-1),是优化前的2.9倍。在此基础上,对3-L罐发酵条件优化,确定BsΔm Gtf在重组菌中最优表达条件。在3-L罐中发酵,重组菌WS9BM胞外BsΔm Gtf酶活性达到36232.8 U·m L~(-1),是优化前的3.0倍。(4)Lf Gtf在B.subtilis中重组表达。首先,根据基因的m RNA 5′-端序列发卡结构自由能越大越有利于翻译的原则。对Lf Gtf的N端68个氨基酸进行截短获得突变体LfΔN_(69-949)Gtf(简称LfΔGtf),在B.subtilis中重组表达酶活性是对照的3.1倍。其次,从11个内源性启动子中筛选出最优单启动子P_(ahp F),并与其它启动子串联组合,最终确定双启动子P_(amy Q-ahp F)最有利于LfΔGtf重组表达,酶活性是对照的13.7倍。将上述策略引入热稳定性最优突变体(LfΔm Gtf)进行重组表达,其酶活性达到1194.1 U·m L~(-1),是优化前的54.28倍。然后,添加化学分子伴侣海藻糖进一步强化其重组表达。MD结果表明海藻糖分子结合在4,6-α-Gtf的特定区域,进而稳定了局部构象,最终提高重组酶在发酵环境中的稳定性,这可能是可溶性表达提高的原因。最后对LfΔm Gtf的重组菌发酵体系进行放大,经过多策略优化,LfΔm Gtf在重组菌WS9dual-phenotype hepatocellular carcinomaLM 3-L罐水平的酶活性仅为摇瓶的30.3%,其原因有待进一步研究。

【目的】探究德昂酸茶水提物对小鼠RAW264.7巨噬细胞的抗炎作用与机制。【方法】以脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)和干扰素-γ (interferon-gamma,IFN-γ)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞为炎症模型，采用GrOcular geneticsiess试剂盒检测一氧化氮(nitric oxide,NO)含量，采用实时荧光定量PCR分析炎症基因诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,INOS)、环氧合酶2 (cyclooxygenase 2,COX2)、白细胞介素-1β (interleukin-1β,IL1β)、白细胞介素-6 (interleukin-6,IL6)和核转录因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路关键基因的mRNA表达水平，采用蛋白质免疫印迹检测NF-κB信号Adezmapimod纯度通路活化水平。【结果】与LPS/IFN-γ诱导炎症组相比，德昂酸茶水提物可显著降低NO含量以及INOS、COX2、IL1β和IL6的mRNA表达水平(P<0.05)，显著增加NF-κB信号LGX818抑制剂通路负调控因子NFKBIA和TNFAIP3的m RNA表达水平(P<0.05)，显著抑制NF-κB信号通路关键上游激酶IKKα蛋白磷酸化和抑制蛋白IκBα磷酸化(P<0.05)。【结论】德昂酸茶水提物可以通过调节NF-κB信号通路基因表达、关键上游激酶活化和抑制蛋白磷酸化从而抑制炎症基因表达，进而抑制巨噬细胞炎症反应。

纳米铜碳复合材料(COPPWARE?)是以人体生长必需的微量元素”铜”为功能材料,以植物纤维素为模板,采用专利工艺技术制备的核/壳结构铜(核)/碳(壳)纳米颗粒镶嵌在生物炭基体里的复合材料。其化学组成为10-20%的铜(按应用可调),其余的为碳。COPPWARE?复合材料具有优异的广谱抗菌,广谱抗真菌,广谱抗病毒等功效。同时也能向生物提供生长所必需的微量元素铜。随着抗菌材料的应用越来越广泛,抗菌材料对人体肠道健康的影响和随之而来的对人体健康的影响应该引起大家的关注。研究表明:COPPWARE?具有优异的肠道微生物组修饰功能。可以在不改变肠道菌群种类和各类菌群数量比例的条件下,有效的控制肠道内的微生物总量,起到促进肠道健康Sensors and biosensors、促进糖代谢等功能。西安交大更多药学院动的小鼠物实验更多结果表明,该材料可以有效促进基础糖代谢过程,减少腹内脂肪的富集,提高小鼠的瘦肉/脂肪比例,对增进胰岛素的活性和控制血糖的稳定有着显著的作用、还能对血常规指标的优化起到有效的促进作用。

肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)是一种危害严重的人兽共患病原菌。近年来,ExPEC在猪群中逐渐流行,对养猪业造成严重损失。区别于致腹泻大肠杆菌,ExPEC能够引起猪的全身性感染,导致败血症、脑膜炎、肺炎等,然而其致病机制有待阐明。ExPEC造成全身感染过genetic constructs程中克服血液中的免疫杀伤和营养限制,从而在血液循环中存活和增殖是其致病的关键环节,潜在机制有待研究。本研究利用RNA-seq分析了猪ExPEC在血清条件下的基因表达变化,利用CRISPRi技术鉴定了这一系列差异表达基因对猪ExPEC血清存活的影响。利用转座子随机突变技术鉴定了一系列与猪ExPEC血清存活相关基因。取得的主要结果如下:1、通过对ExPEC PCN033菌株在血清孵育前后进行转录组测序,发现与血清孵育后有大量基因发生差异表达,GO数据富集结果显示,在与血清孵育15min后,大量核苷酸代谢、核糖体亚基形成等过程基因的表达发生差异,随着与血清孵育时间延长,孵育1 h后,大量金属离子结合过程、无机离子稳态等过程的基因出现差异表达。而KEGG数据富集显示,在与血清孵育前后以及孵育不同时间,核苷酸代谢、氨基酸代谢、DNA复制、铁载体生物合成等通路基因都显著上调,下调基因则富集在氨基酸降解、TCA循环等通路,通过分析15min和1 h血清孵育组中前30个显著上调的基因,发现了大量基因都与核苷酸从头合成和铁摄取系统相关,如:ent C、fes、chu T、pur T、pyr B等。结果表明铁摄取系统以及核苷酸代谢相关基因对于肠外致病性大肠杆菌在血清中存活至关重要。2、针对上述在血清中的部分差异表达基因,利用CRISPRi技术对其进行下调表达,并检测了其在血清存活中的影响,结果发现当fep E、fep A、ent C、chu A、chu T、feo A、fes、ent D等铁摄取基因的表达被抑制后,ExPEC在血清中的存活能力显著下降,表明铁摄取相关基因是ExPEC在血清中存活的一类关键基因。3、大量ExPEC的核苷酸从头合成相关基因在血清条件下也发生了显著差异表达,因此进一步探究了核苷酸从头合成基因的表达调控机制,发现缺失转录调控因子pur R和核苷酸警报分子(p)pp Gpp后,嘌呤合成的相关基因pur H、purK、purE、purN均表达上调,这也就证明了(p)ppGpp和PurR会下调嘌呤生物合成过程。4、利用MDorsomorphin浓度ariner随机转座突变技术构建了ExPEC PCN033的随机突变文库,检测了4500个转座突变体在血清中存活情况,鉴定得到18株血清存活能力显著下降的突变体。通过转座子插入测序对转座子插入位点进行鉴定,发现与血清存活相关的基因包括purH、purD、pyrC、aroA、wecA、rfaH、narI,它们主要与核苷酸从头和胞外多糖生物合成途径相关。5、将上述获得的核苷酸相关基因突变的突变菌株进行一系列的表型验证,pur H、pur D突变会导致ExPEC PCN033基本无法在血清中存活,而外源添加核苷酸则能恢复在血清中的生长,表明ExPEC存在核苷酸摄取系统。同时,观察到突变体在血清中的形态异常,推测可能是由于核苷酸从头合成途径的缺失会影响ExPEC PCN033包膜完整性以及DNA复制从而影响其在血清中的存活。本研究发现猪ExPEC在血清中发生了显著的基因差异表达,且差异表达基因主要富集在铁摄取系统和核苷酸代谢相关通路,并发现Pur R和(p)pp Gpp和Pur R会抑制嘌呤生物合成过程。在全基因组范围内鉴定了一系列血清存活相关基因,并初步探究了这selleck化学些基因在血清存活中的作用及机制。本研究将为揭示ExPEC的致病机制,挖掘新型抗菌药物靶标奠定了基础。

目的 探讨单次静注利多卡因对预防止血带诱导的高血压（tourniquet-induced hypertension, TIH）的效果，并比较利多卡因与氯胺酮在全身麻醉患者中的作用。方法 通过随机、对照、双盲方法，方便选择2021年7月—2023年1月在福建省立医院南院进行下肢手术并使用止血带的患者75例。患者分别给予利多卡因（利多卡因组，1.5 mg/kg,n=25）、氯胺酮（氯胺酮组，0.2 mg/kg,n=25）及生理盐水（生理盐水组，n=25），在止血带充气前10 min静脉给药。在止血带充气之前，以10Colforsin体外 min的间隔在止血带充气60 min后以及放气后立即测量收缩压（systolic blood pressure, SBP），舒张压（diastolic blood pressure, DBP）和心率（heart rate, HR），并记录TIH的发病率。结果 与利多卡因和氯胺酮组相比，对照组的SBP、DBP和HR在止血带充气后60 min内显著增加CB-839 MW，差异有统计学意义（P<0.05）。利多卡Medial prefrontal因组（16%）和氯胺酮（12%）组的TIH发生率显著低于对照组（56%），差异有统计学意义（χ~2=14.231,P<0.05）。结论 单次推注利多卡因可有效缓解止血带充气引起的血压升高，其效果与推注氯胺酮相当。