CRISPR(Clustered regularly interspersed short palindromic repeats)技术的出现,大大提高了基因组编辑的准确性,并且有助于更好地诊断、预测疾病,以及更有效地实施基因治疗。基于腺嘌呤和胞嘧啶碱基编辑器,不同的科学家研制了一种新型双碱基编辑器,它能够有效地实现C-to-T和A-to-G的编辑。然而,许多人类遗传疾病是由在同一基因组位点上的多核苷酸变异引起的。而在同一等位基因上尚未开发出同时实现C&G-to-T&A和A&T-to-G&C转换的理想工具。本文提出了 一种碱基编辑器与双sgRNA(single guide RNA,sgRNA)相结合的策略,针对DNA双链上重叠的相邻两个位点,在重叠的靶向窗口内同时诱导C&G-to-T&A和A&T-to-G&C转换。研究结果如下:1.双sgRNA策略促进了小型目标窗口中并发的C&G-to-T&A或A&T-to-G&C转换,利用BE4max和ABEmax可精确突变HEK293T细胞中不同基因的目标位点,且没有副产物。根据HEK293T细胞中的目标位点设计了一对分别针对正义链和反义链的sgRNA(sg-L和sg-R),并设置了重叠的靶向窗口(单条间隔序列的4-8位;至少2-nt重叠);分别将单条gRNA和一对sgRNA与BE4max和ABEmax共同转染进HEK293T细胞。Sanger和深度测序结果显示,有七个位点在双sgRNA的引导下能够利用BE4max实现C&G-to-T&A的目标突变,有三个位点能够利用ABEmax实现A&T-to-G&C的目标突变。2.双sgRNA策略促进在同一条DNA链上同时实现C&G-to-T&A或A&T-to-G&C双碱基转换。考虑到C&G-to-T&A或A&T-to-G&C编辑可能同时发生在不同的等位基因上,将一对sgRNA克隆到由两个独立的人类U6启动子驱动的单一表达载体上,命名为2U6。与原始策略相比,在2U6驱动的双sgRNA引导下BE4max和ABEmax对目标位点的编辑效率略高。Sanger和深度测序结果显示对于大多数测试位点,2U6组中包含并发C&G-to-T&A或A&T-to-G&C转换的测序reads(读长)的百分比显著高于双载体组而Indels(插入和删除)比例并没有显著增加。3.对双sgRNA系统进行进一步改良,以提高同一等位基因的并发编辑效率。通过对其中一个配对的gRNA进行突变(与经过另外一条gRNA编辑的序列能够完美匹配),构建改良版的2U6,命名为2U6mut,可有效地促进同一等位基因上的碱基转换。Sanger和深度测序结果表明,BE4max和ABEmax在2U6mut驱动的sgRNA引导下的编辑效率与2U6相当或略高,同时大多数测试位点中2U6mut组中包含并发C&G-to-T&A或A&T-to-G&C转换的测序readsdisc infection的百分比显著高于双载体组而Indels 比例没有显著增加。4.利用SpRY介导的碱基编辑器,扩大了双sgRNA策略的靶向范围。根据我们的设计,在双sgRNA系统中,目标序列必须两侧有“CCN”和“NGG”PAM(protospacer adjacent motif,原间区相关基序)序列,在人类基因组中靶向的范围非常有限。因此,将PAMless SpRY Cas9n与胞嘧啶和腺嘌呤碱基编辑器融合,命名为SpRY-BE4max和SpRY-ABE8e可以极大地扩展潜在的靶向范围,覆盖多达90%的人类基因组。根据SpRY Cas9n的首选PAM序列“NRN”(R=G/A),采用2U6和2U6mut sgRNA策略分别检测SpRY-BE4max和SpRY-ABE8e在EMX1上的三个靶点,在目标窗口内同时发现了有效的 C-to-T 和 G-to-A,以及 A-to-G 和 T-to-C 转换。5.双sgRNA策略与双碱基编辑器相结合实现更为复杂多样的饱和突变。传统的双碱基编辑器只能引起C-to-G和A-to-T的转换,将双sgRNA策略与双碱基编辑器结合可以催化更复杂的突变类型。使用CABE-RY测试“CCN”和“NGG”PAM的四个位点以及4个“非NGG”PAM的位点。在较宽的靶向窗口内(从sg-L开始10-23 nt),观察到了相对较高的C-to-T、A-to-Gselleck产品、G-to-A和T-to-C转换,说明两种系统联用可大幅增加碱基变换的多样性。深度测序分析表明,可观察到多达三种不同类型的碱基转换的测序reads并且诱导产生的Indels率通常小于5%,这在生物医学和植物工程或饱和突变筛选中是可以接受的。6.双sgRNA策略用于多核苷酸变异致病突变模PCI-32765价格型。TP53是人类癌症中突变频率最高的基因之一,但是大部分突变的影响在很大程度上仍不清楚,其中包括一些突变已被确定为相邻区域的多核苷酸变异(Multi-nucleotide variant,MNV)。为了进一步解释MNVs 的功能意义,本文构建了两对 2U6mut sgRNA(sgTP53-2U6mut-1 和 sgTP53-2U6mut-2),分别使用 SpRY-ABE8e 和 SpRY-BE4max 诱导 L330P/Q331R 和R280K/R281Q/R283Y 突变;并且,从 sgTP53-2U6mut-1 和 SpRY-ABE8e 共转染的细胞中成功建立了含有L330P/Q331R突变的单个HeLa细胞克隆。通过细胞凋亡实验和RNA-seq分析表明,L330P/Q331R突变导致TP53的表达明显降低并促进了 GPX4-In-3诱导的HeLa细胞死亡。
米氮平联合柴胡桂枝干姜汤加减治疗抑郁症的效果观察
目的:探讨米氮平联合柴购买RAD001胡桂枝干姜汤加减治疗stem cell biology抑郁症的效果。方法:选取2022年3月—2023年1月正定县正定杨建斌中医综合诊所收治的54例抑郁症Blebbistatin患者作为研究对象,根据随机数字表法分为观察组和对照组,各27例。对照组给予米氮平治疗,观察组在对照组基础上应用柴胡桂枝干姜汤加减治疗。比较两组中医证候积分、抑郁情况、不良反应发生情况。结果:治疗前,两组大便秘结、失眠多梦、不思饮食、腹胀嗳气、神疲乏力、胸闷心烦、精神抑郁积分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组各证候积分均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗1、2、4、6周后,观察组HAMD评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:米氮平联合柴胡桂枝干姜汤加减治疗抑郁症的效果显著,可改善患者临床症状与抑郁情况,安全性较高。
小麦突变体株高的QTL定位及Rht2回复突变的鉴定
【研究背景】小麦是世界上种植面积最大的作物之一,小麦的高产稳产为保障我国粮食安全做出了重要贡献。株高对于小麦的产量有着重要作用,株高过高更易倒伏,而株高过矮又不利于光合作用的进行和根系养分的吸收。绿色革命基因Rht1和Rht2是影响小麦株高的重要基因,它们通KPT-330说明书过编码提前终止的DELLA蛋白影响赤霉素的信号传导途径,进而引起植株矮化。绿色革命基因的引入使得小麦产量大幅度提升,为培育高产广适小麦新品种提供了理论基础。【材料与方法】本研究以一个航天搭载的耐盐突变体st1为研究材料,分析比较突变体与野生型株高、千粒重、有效穗数等农艺性状。为定位引起突变体株高变异的基因,将野生型和突变体杂交,构建了F_2分离群体,并通过F3家系进行表型验证。采用BSA-seq方法对极端表型混池进行外显子捕获测序分析,结合ED和SNP-index算法初步确定突变体st1株高变异基因所在的染色体区段。根据两亲本间的纯合差异位点开发分子标记对F2群体进行基因分型,进而结合表型数据利用QTL Ici Mapping构建遗传连锁获悉更多图谱进行QTL定位。【结果与分析】田间表型统计表明,突变体st1株高、千粒重、有效穗数均显著高于野生型,暗示突变体st1具有高产潜力。BSA-外显子捕获测序结果显示,在4D染色体短臂上存在一个影响株高的主效QTL区段。通过构建遗传连锁图谱,将引起突变体株高变异的QTL定位在4D染色体前端标记Ph3和Ph4之间,对应中国春参考基因组16.8-25.9Mb的区间内,该区间内存在绿色革命基因Rht2,推测Rht2基因突变导致突变体株高变异。因此,利用特异性引物对两亲本的Rht2基因全长进行扩增测序,结果显示野生型中Rht2在DELLA结构域181bp的位置含有T等位变异,导致翻译提前终止,表现植株矮化表型。而在突变体中,此位置T到G的回复突变使序列从终止密码子变为谷氨酸,翻译出正常的DELLA蛋白,使得突变体株高变高。通过将Rht2突变位点开发KASP标记,结合F2群体和F3家系的表型数据,证实了Rht2是突变体株高变异的目标基因,Rht2的回复突变使得株高和千粒重分别增加了15.24%和14.04%,同时对有效穗数产生负面效应。因此,推测突变体有效穗数增加是由于其他基因有利突变引起。【结论】在本研究中,我们观察到耐盐突变体Second-generation bioethanolst1在苗期也能抵抗干旱胁迫,具有较高的产量潜力。通过BSA-seq和遗传连锁分析,证实了Rht2的回复突变导致突变体st1的株高和千粒重显著增加。本研究为培育耐盐抗旱小麦品种提供了新的资源,并为小麦高产新品种的培育提供了材料来源和技术支撑。
膝骨关节炎患者巨噬细胞趋化力与疾病严重程度的相关性
目的:探讨膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)患者巨噬细胞趋化力增强情况,及与疾病严重程度的相关性。方法:筛选2019年7月至2022年6月收治的80例KOA患者为观察组Precision immunotherapy,并分为中度组29例、重度组30例和极重组21例。同期选入健康体检者30例作为对照组。检测各组巨噬细胞中核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)、CXC趋化因子受体7 (C-X-C chemokine receptor type 7,CXCR7)和CXC趋化因子配体12 (C-X-C chemokine ligand 12,CXCL12)的基因表达;用视觉模拟量表评分(visual analogue scale,VAS)评价关节的疼痛程selleck Alisertib度;用膝骨关节学会评分系统(Knee SocietyElexacaftor score,KSS)评价关节功能;并进行分析。结果:中度组、重度组、极重组的NF-κB、CXCR7和CXCL12表达均高于对照组;重度组、极重组的VAS、NF-κB、CXCR7和CXCL12表达均高于中度组,KSS低于中度组;极重组VAS、NF-κB、CXCR7和CXCL12表达高于重度组,KSS低于重度组(均P<0.01)。患者巨噬细胞中NF-κB、CXCR7和CXCL12表达均与VAS呈正相关,而与KSS呈负相关(P均<0.01)。患者巨噬细胞中NF-κB、CXCR7和CXCL12表达均与疾病严重程度呈正相关;排除传统因素(性别、年龄、病程)的影响,多元线性回归分析进一步显示NF-κB、CXCR7和CXCL12表达均与疾病严重程度仍呈正相关(P均<0.01)。结论:KOA患者巨噬细胞趋化力随着病情加重而呈增强趋势,且与疼痛程度、功能受损程度均相关。
阿托伐他汀钙关键中间体的合成研究
心脑血管疾病的致病性因素之一就是高血脂症,而高血脂症的成因复杂,针对不同的发病机制有不同的药物,其中他汀类药物的效果显著,尤其是阿托伐他汀钙。阿托伐他汀钙的合成路线近十条,包括主环和侧链的合成、手性拆分法、酶催化法以及不同的后处理方式,但现有生产工艺收率低,后处理复杂,价格昂贵。本研究结合现有工艺,确立了一条新的合成阿托伐他汀钙关键中间体2-[(4Erastin供应商R,6R)-2-(4-氟苯基)-5-异丙基-3-苯基-1-H-吡咯]-1-(2,2-二甲基-1,3-二氧代环氧己烷)-4-乙酸叔丁酯(1)的路线,具体研究内容如下:(1)以苯乙酰氯(2)和氟苯(3)为原料,得到中间体1-(4-氟苯基)-2-苯乙酮(4),通过实验优化并结合反应机理,选择Al Cl_3为催化剂,二氯甲烷为溶剂反应4 h,收率达87.1%。(2)化合物4与卤代试剂在室温条件下发生取代反应,生成中间体2-溴-1-(4-氟苯基)-2-苯乙酮(5),经工艺优化确立氯仿为溶剂,溴为卤代试剂,氢溴酸和冰醋酸为催化剂,在30℃下反应2 h,收率可达96.0%。(3)中间体5与原料异丁酰乙酸甲酯(6)发生亲核取代反应得到2-[2-(4-氟苯基)-2-羰基-1-苯基]-4-甲基-3-羰基-戊酸甲酯(7),针对7的合成进行实验优化后,确定工艺:以碳酸钾为碱催化剂,异丙醇为反应溶剂,反应时长为12 h,反应投料比为n(5):n(6):n(碳酸钾)为1.0:1.1:1.2,可得最佳收率56.2%。(4)中间体7在碱的催化下,发生酮式分解得到1-(4-氟苯基)-5-甲基-2-苯基-1,4-二酮(selleck8),经实验优化确立以5%氢氧化钾溶液为碱催化剂,四氢呋喃和甲醇为溶剂,温度为50℃,收率可达73.7%。(5)化合物8与手性边链(4R-Cis)-6-氨乙基-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-己酸叔丁酯(9)经过酸催化反应得到关键中间体1。原料9经过精制后与中间体8,在特戊酸催化下反应,以(n)正庚烷:(n)甲苯:(n)四氢呋喃为2:1:1的混合溶剂为反应环境,收率可达79.6%,总收率为27Peptide Synthesis.56%。本工艺路线所用原料具有价格低廉,反应条件温和,后处理简单等明显优点,利于大规模工业化生产。以上各中间体与目标产物均通过~1H NMR确认结构。
细菌驱动的杂化药物体系靶向肿瘤缺氧区增强乳腺癌疗效
研究背景与目的:肿瘤内部紊乱的血管结构是药物不能高效到达肿瘤组织的主要原因,而乏氧主要是造成药物治疗响应率下降,免疫逃逸,肿瘤耐药与转移的重要原因。本研究的目的是开发一种自驱动的生物杂化物(Bif@DOX-NPs),并探究该系统的抗肿瘤疗效与机制。原理:厌氧婴儿双歧杆菌(Bif)将载阿霉素的牛血清白蛋白纳米粒(DOX-NPs)输送到乳腺肿瘤中。Bif@DOX-NPs保留了婴儿双歧杆菌对缺氧区的靶microbiome establishment向能力,同时也保留了DOX的细胞毒性。该生物杂化物能够积极地在低氧肿瘤中定植,并显著增加了肿瘤部位的药物积聚。方法与结果:(1)使用去溶剂化法合成DOX-NPs,利用细菌对蛋白的亲和力制备了Bif@DOX-NPs,最后通过利用形态学、凝胶电泳法、荧光分光光度法、共定位荧光图像证实了双歧杆菌和阿霉素纳米颗粒之间的成功结合。体外释放实验以及Bif@DOX-NPs与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)共孵育实验的结果证实了DOX-NPs可以稳定地与Bif结合,而在肿瘤组织中MMP-2的影响下更容易脱落。(2)体外对Bif@DOX-NPs进行了细胞摄取、细胞毒性、细胞凋亡和细胞VX-661细胞培养划痕实验。研究乳腺癌细胞对该纳米粒子的摄取能力,培养乳腺癌细胞,加入不同药物共培养后分析纳米粒子在细胞内的分布。采用MTT法研究不同纳米粒子对乳腺癌细胞4T1的体外细胞毒性;采用Annexin V FITC凋亡检测试剂和与流式细胞技术分析经不同治疗组处理的乳腺癌细胞的凋亡情况;将长满乳腺癌细胞的平板进行划线,不同时间点拍摄不同药物处理的乳腺癌细胞的生长情况。以上体外实验研究结果验证了本研究研发的Bif@DOX-NPs不会影响纳米药物被肿瘤细胞摄取,并且具有良好的抗肿瘤效应。同时也证实了Bif以及空白载体具有良好的生物相容性。(3)我们验证了Bif@DOX-NPs在肿瘤乏氧区的定植能力。体外构建厌氧模型、体内进行细菌生物分布实验、药物分布实验及小鼠肿瘤的石蜡切片荧光细菌和HIF-1α的免疫荧光双标实验,以上实验结果均证实了Bif@DOX-NPs在乏氧区的成功定植。(4)进行体内动物实验,首先建立乳腺肿瘤模型,分为6组:a:Control,b:Bif,c:Bif@BSA-NPs,d:DOX+Bif,e:DOX-NPs,f:Bif@DOX-NPs。所有药物通过尾静脉给药。隔天测量小鼠肿瘤体积、体重,绘制各组肿瘤生长体积变化曲线以及生存曲线。对小鼠进行Micro-PET/CT扫描,分别考察小鼠对不同治疗方案的早期响应性。免疫组化检测肿瘤组织HIF-1α的表达;用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡,检测肿瘤组织Ki67、CD31的表达。这些结果显示了Bif@DOX-NPs对小鼠肿瘤具有优异的治疗效果。为了评估我们制备的药物递送系统的安全性,进行了血液相容性分析、血细胞及血生化评价、治疗小鼠体重变化、各器官组织H&E染色分析等,以上评价均说明了Bif以及纳米载体材料均均有良好的体内安全性。结论:我们通过将DOX-NPs结合在婴儿双歧杆菌表面来构建一种自驱动的Bif@DOX-NPs生物杂化物,用于将化疗药物靶向输送到缺氧的肿瘤部位。通过增加肿瘤内药物蓄积Bif@DOX-NPs提高了DOX诱导肿瘤细胞凋亡的治疗作用,显著抑制肿瘤生长并延长荷瘤小鼠生存期。Bif@DOX-NPs还减少了主要器官对药物的吸收,从而降低了DOX的毒副作用。表明本研究制备的生物杂化物Bif@DOX-NPs可能在实体肿瘤治疗中产生良好的效果而具有重要的意义,本研点击此处究也将为开发新型的靶向药物制剂奠定一定的研究基础。因此,Bif@DOX-NPs生物杂化物在恶性实体瘤的治疗中具有广阔的应用前景。
金属纳米团簇在大脑成像及主要神经退行性疾病治疗方面的研究
近年来,硫醇配体保护的水相金属纳米团簇(MNCs)作为一种新型的纳米材料在生物医学领域得到了广泛关注。MNCs通常由几个,几十个至几百个内部金属原子(金、银、铜、铂等)及表面配体组成。除了具有超小的尺寸(小于3纳米)、超高的比表面积和丰富的表面化学,MNCs还表现出独特的类分子性质,如离散的电子能级、最高已占据分子轨道(HOMO)-最低未占据分子轨道(LUMO)跃迁、可调节的光学吸收、强光致发光等。这些独特的性质使得MNCselleckchems在生物成像和药物靶向治疗方面具有很好的应用前景。大脑作为人类行为活动的主要支配者,在人类生命活动中起着重大的作用,若大脑内部出现疾病会严重影响着人类的正常生命活动。为了进一步提高对大脑的突现特性和功能的理解,需要直接可视化大脑结构。了解大脑及其对损伤和疾病的易感性,需要详细了解一个复杂动态系统的结构、功能和发展,这个系统在许多长度和时间尺度上工作。大脑疾病的主要类别之一是神经退行性疾病(NDDs),其特征是进行性长期认知衰退、记忆和日常生活功能丧失。最为常见的两种神经退行性疾病分别为帕金森疾病(PD)和阿尔兹海默疾病(AD)。缺乏有效的药物和治疗策略预防或延缓神经退行性疾病,因此迫切需要尽早和准确地诊断NDDs。目前,诊断NDDs主要存在的障碍是大脑中存在人体监管最严格的界面-血脑屏障(BBB),该屏障通rehabilitation medicine常排斥大多数治疗方法,使得针对中枢神经系统的治疗仍然难以转化为改善的临床结果。MNCs作为一种尺寸小于3纳米的超小纳米材料,可以被设计具有不同的表面电荷,亦可被药物分子修饰,得以增强穿透和靶向能力。因此,MNCs有望成为诊断及治疗大脑疾病的关键药物。针对以上存在的问题,以MNCs为基体设计了以下三个课题:1)为实现大脑成像用于可视化大脑的目的,采用配体工程策略,在聚集诱导发光(AIE)特性的Au Ag纳米团簇表面偶联(4-羧基丁基)三苯基溴化铵(TPP),设计合成了一种新型发光Au Ag纳米团簇@TPP探针,用于靶向线粒体和脑成像。所设计的Au Ag NCs@TPP探针显示出以下优点,如超小尺寸(<3 nm),发光波长为610 nm,发光寿命长(7.193μs),具有两亲性表面化学性质,稳定性好,可用于靶向线粒体成像和活体小鼠脑成像。此外,Au Ag NCs@TPP探针具有低细胞毒性和良好的体内生物相容性,有助于生物医学应用。本章节为制备用于线粒体和脑成像的MNCs探针提供了一种“一石二鸟”的策略,这会激发更多关于超小MNCs设计和生物医学应用的相关研究。2)帕金森疾病的治疗一直是生物医学领域的一大难题。本章节中设计合成了槲皮素(Qe)修饰的单-(6-巯基-6-脱氧)-β-环糊精(SH-β-CDs)-保护的Cu NCs(CCQ NCs),其可有效消除ROS并调节小胶质细胞极化形态治疗PD。CCQ NCs具有多酶活性,可有效消除活性氧,促进小胶质细胞极化为抗炎M2样表型,缓解神经炎症。并且CCQ NCs可显著改善PD小鼠症状,治疗效果显著,酪氨酸羟化酶(TH)和电离钙结合适配蛋白1(IBA-1)恢复正常水平。本课题中MNCs通过酶活性和极化小胶质细胞的方式治疗帕金森疾病,是一种新型治疗方式,且其治疗过程不会用到超声等外加手段辅助,团簇自身即可突破血脑屏障,为MNCs治疗帕金森疾病提供了新的借鉴。3)治疗阿尔兹海默疾病是一直是生物医学领域的难点。本章节通过研究CCQ NCs在体外和体内对Aβ42蛋白的抑制效果,并且在细胞水平上研究了其对人神经母瘤细胞(SH-SY5Y)的保护,证明CCQ NCs可以实现在体外和细胞层面上治疗阿尔兹海默疾病。以上证明Cwww.selleck.cn/products/CP-690550CQ NCs可以实现一种团簇治疗两种神经退行性疾病,为MNCs在神经退行性疾病治疗方面提供了思路。
卫矛提取物活性成分分析及细胞毒性检测
卫矛(Euonymus alatus(Thunb.)Sieb)是卫矛科植物,在我国分布较为广泛,具有较强的生命力。卫矛是一种常用的药用植物,在医学方面应用较为广泛,但目前国内外对卫矛所含化学成分潜在用途的研究较少。本研究通过傅立叶变换红外光谱(FTIR)、气相色谱质谱联用(GC-MS)、超高效液相色谱质谱联用(UPLC-MS)及细胞毒性检测等现代分析技术手段对卫矛春夏两季树叶、树枝、树木、树皮、树根及根皮六个部位化学成分进行研究分析。此外,还探究了卫矛所含活性成分对胃癌、肝癌、乳腺癌等的影响,为进一步探索开发卫矛在农业、食品、及生物医药等领域的潜在价值提供理论参考与技术支撑。具体研究结果如下:(1)卫矛官能团分析经过傅立叶红外光谱技术对春夏两季卫矛叶、枝、皮、木、根、根皮六个部位官能团Patrinia scabiosaefolia分析显示卫矛春夏两季的成分相差不大,六个部位均含有较强的特征吸收峰,特征吸收峰主要分布在3400-3320cm~(-1)、1630-1615cm~(-1)波段,除根皮部位外的其他五部位夏季的特征峰强于春季。由此推测卫矛中可能含有醇类、胺类、酚类、酯类及醛类等物质,并且卫矛在夏季的化学物质含量及种类可能高于春季。(2)卫矛提取物化学成分分析经过对卫矛提取物GC-MS检测分析,发现卫矛叶共检测出101种物质、枝共检测出108种物质、皮共检测出127种物质、木共检测出129种物质、根共检测出92种物质、根皮共检测出114种物质,共347种化学物质。春季卫矛化学物质种类高于夏季,其中木部位检测出的化学物质种类最多,根部位检测出的化学物质最少。UPLC-MS检测分析发现,卫矛叶共检测出281种物质、枝共检测出250种物质、皮共检测出346种物质、木共检测出298种物质、根共检测出291种物质、根皮共检测出455种物质,共1110种化学物质。夏季化学物质含量高于春季,其中根皮部位检测出的化学物质种类最多,枝部位检测出的最少。综合来看,卫矛夏季化学物质含量高于春季,枝部位化学物质相对含量最低,根皮部位化学物质相对含量最高。卫矛不同部位均含有利用价值很高的化学物质,能应用于食品、工业、农业、生物医药等领域。所含化学成分可以用于配置各种食用香精香料、生产增塑剂、生产杀虫剂、生产植物生长激素、治疗心血管疾病、治疗泌尿感染等作用。一些化合物还具有较强的抗癌活性,能应用www.selleck.cn/products/Decitabine于治疗癌症。(3)卫矛提取物细胞毒性检测分析经细胞毒性检测后结果显示:卫矛对肝癌Hepg2细胞的杀死率普遍杀死率最高,对白血病K562细胞和乳腺癌MDA-MB-231的普遍杀死率相对较低,六个部位对四种癌细胞都具有抑制作用。其中对肝癌Hepg2(81.49%)和白血病K562(58.74%)杀死率最高的是春季卫矛的根皮部位,对胃癌SGC7901(80.57%)和乳腺癌MDA-MB-231(60.64%)杀死率最高的是春季的根部位。这可能是其中所含的二氢猕猴桃内酯、β-石竹烯、肉桂酸、苦楝皮萜酮、芦竹碱、α-亚麻酸、坡模醇酸、京尼平、灵芝烯酸D、灵芝酸D、蔷薇酸、鼠尾草酚酮、银杏酸、荜茇酰胺、乙酰紫草素、镰叶芹二醇等活性物质通过多种途径抑制癌细胞生长造成的结果。卫矛在治疗癌症,开发抗癌药物具有很大的潜在价值。但卫矛抑selleck Dorsomorphin制癌细胞所作用的靶点及其机理并不清楚,下一步应探究卫矛中单种化合物的提取方式并深化其对治疗各种疾病及抗癌所作用靶点和机制的研究。
NDM-5-C208A突变大肠埃希菌的构建及大蒜辣素与NDM-5相互作用位点分析
[目的]产新德里金属β-内酰胺酶5(NDM-5)的革兰阴性耐药菌对人畜健康产生巨大威胁。本文旨在初步探究大蒜辣素对NDM-5的抑制作用及其相关作用位点,为临床开发新型β-内酰胺酶抑制剂提供理论支持。[方法]通过AutoDock模拟分子对接,预测大蒜辣素与NDM-5的结合位点;构建突变型载体pET21a-NDM-5-C208A,测序验证无误后转入感受态大肠埃希菌BL21(DE3),通过药敏试验进行突变表型确认;采用微量肉汤棋盘法和时间杀菌曲线测定大蒜辣素与美罗培南对NDM-5突变型细菌的联合抑菌效果。通过体外表达突变蛋白NDM-5-C208A,建立酶活性测定体系,比较大蒜辣素对C208突变型NDM-5和野生型NDM-5酶活性的抑制效果。[结果]经测序证实NDM-5的C208A突变株BL21(DE3)pET21a-NDM-5-C208A构建成功,C208A突变株恢复了对头孢类和碳青霉烯类抗生素的敏感性,且大蒜辣素与美罗培南联用的联合抑菌指数由0.375增加至2,联用表现为独立作用而非协同作用;体外酶活测定结果显示NDM-5-C208A突变不仅使酶活性下降约85%,而且该位点突变导致大蒜辣素对NDM-5失去抑制作用PLX4032抑制剂。[结论]Cys208位点是维持NDM-5水解酶活性的关键位点,且大获悉更多蒜辣素可通Atención intermedia过与该位点结合发挥抑制酶活性的作用。该结果为大蒜辣素作为新型β-内酰胺酶抑制剂的开发和应用提供试验依据。
NK细胞水平及毒性与卵巢型子宫内膜异位症病变程度相关性
为探究分化群56(cluster of differentiatidiABZI STING agonist配制on 56, CD56)、分化群107a(cluster of differentiation 107a, CD107a)和自然杀伤细胞2族成员D(natural killer group 2 member D, NKG2D)在卵巢型子宫内膜异位症(endometriosis, EM)患者在位内膜和异位内膜中的表达情况,探讨EM发生发展过程中NK细胞数量及毒性的变化和其中关联,收集连云港市妇幼保健院2018年1月至2020年12月40例卵巢型EM患者在位Bafilomycin A1 IC50内膜、异位子宫内膜以及10例健康人子宫内膜组织,免疫组化法检测CD56、CD107a和NKG2D表达水平,分析其表达程度。结果显示,卵巢programmed transcriptional realignment型EM患者CD56、CD107a和NKG2D的表达强度显著低于健康女性(均P<0.01),异位内膜组织CD56、CD107a和NKG2D表达强度低于其在位内膜(均P<0.01),且CD56、CD107a和NKG2D表达程度随着病变程度的增加逐渐下降(均P<0.01)。由此,卵巢型EM患者的异位内膜组织中存在CD56、CD107a和NKG2D的表达下调,并且与病变程度存在一定的关联,提示异位子宫内膜可能是通过NKG2D途径降低NK细胞的数量及毒性,进而诱导局部的免疫逃逸。