为了探讨mi R-542-3p的生物信息学信息及其对未成熟猪睾丸支持细胞的影响,试验通过Ali Baba 2.1和AnimalTFDB 3.0软件预测mi R-542-3p转录因子结合位点(TFBS);并分析mi R-542-3p在不同物种间的保守性;采用CCK-8试剂、ATP试剂盒、流式周期检测试剂盒和实时荧光定量PCR方法探究过表达mi R-542-3p对未成熟猪睾丸支持细胞的影响;利用TargetScan、mi RDB和mi Walk 3种在线软件预测mi GDC-0068 NMRR-542-3p靶基因后取交集,并对猪源靶基因进行GO功能注释和KEGG信号通路富集分析;最后利用Cytoscape 3.2. 0软件构建TF-mi R-542-3p-靶基因相互作用网络。结果表明:经预测mi R-542-3p受GATA1、TBP、Sp1、Ap1、SRF等多个转录因子调控,且在多物种间具有高度的保守性;mi R-542-3p可显著或极显著抑制未成熟猪睾丸支持细胞增殖活性(P<0.05或P<0.01),极显著降低细胞内ATP含量(P<0.01),显著或极显著抑制细胞增殖基因和周期基因的相对表达量(P<0.05或P<0.01),进而抑制细胞周期和细胞增殖;转染mi R-542-3p mimic后G1期猪睾丸支持细胞比例显著升高(P<0.05),S期细胞比例极显著降低(P<0.01);共发现7个猪V180I genetic Creutzfeldt-Jakob disease源mi R-542-3p潜在靶基因,mi R-542-3p调控的UBE2E1基因相对表达量极显著下降(P<0.01),KCMF1、ILK基因相对表达量显著下降(P<0.05),HIPK3基因相对表达量极显著升高(P<0.01),AP3D1、PLEKHM3基因相对表达量显著升高(P<0.05),各靶基因主要在激酶活性和结合上发挥作用;mi R-542-3p靶基因主要参与MAPK、cAMP、TGF-β和cGMP-PKG等信号通路;构建的TF-mi R-542-3p-靶基因相互作用网LGX818纯度络包含5个转录因子和50个m RNA。说明mi R-542-3p受多种转录因子调控,在多物种间高度保守,能够抑制未成熟猪睾丸支持细胞增殖,并通过调控下游靶基因的表达参与MAPK、cAMP和TGF-β等信号通路,从而调控未成熟猪睾丸支持细胞生长。