Category: Uncategorized

目的：了解青少年抑郁障碍患者伴有非自杀性自伤（NSSI）的行为情况，并探讨音乐疗法对其NSSI行为及焦虑、抑郁情绪的影响。方法：将2022年3月—2023年3月在中山市第三人民医院住院治疗的63例伴有NSSI行为的青少年抑郁障碍患者随机分为对照组（n=32）和研究组（n=31）。对照组采用单纯的药物治疗和常规护理，研究组在此基础上增加4周的音乐疗法。入组前采用渥太华自伤量表（OSI）评估LGX818分子量两组患者的NSSI行为情况；比较两组患者治疗前及治疗1、2、4周时汉密尔顿焦虑量表（HAMA）、汉密尔顿抑郁量表（HAMD-17）的评分；比较两组患者治疗1、2、4周时NSSI行为发生率。结果：两组患者中最常见的自伤方式是刀割（72.1%），伤害部位最多的是手（47.6%）。采取一Bafilomycin A1种自伤方式的患者最多（52.5%），过去1个月至少有1次自伤行为的占52.4%。治疗1、2、4周时，两组患者HAMA、HAMD-17评分较治疗前均降低，差异有统计学意义（P<0.05），研究组明显低于对照组。治疗后两组患者NSSI行为发生频次均明显降低，特别是在治疗2、4周时，研究组患periprosthetic infection者NSSI行为发生频次明显低于对照组。结论：音乐疗法能够有效缓解青少年抑郁障碍患者的焦虑、抑郁情绪，并降低NSSI行为的发生率，提高临床疗效。

目的:系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一种慢性、复杂的自身免疫性疾病,常常会影响多个器官和系统,其中以肾脏损伤最严重,常并发狼疮肾炎。狼疮肾炎(Lupus nephritis,LN)通常表现为蛋白尿、血尿、肾功能不全等症状,治疗的主要目的之一是减轻肾脏损害,早期诊断治疗可以改善预后。足细胞属于终末上皮细胞,是肾脏肾小球滤过的重要组成部分,足细胞损伤可导致蛋白尿的产生,防止足细胞损伤对Y-27632使用方法LN的治疗和预后具有重要意义。白介素17B受体(Interleukin 17B Receptor,IL-17RB)属于白介素17受体家族,其异常表达与多种自身免疫病有关。IL-17RB可以在多种细胞上表达,包括免疫细胞,内皮细胞和上皮细胞,但IL-17RB是否在LN足细胞上表达以及发挥何种作用尚不清楚。为了探讨IL-17RB在LN足细胞表达情况以及是否对足细胞损伤发挥作用,我们进行了一项研究,为IL-17RB能否成为LN潜在的治疗靶点提供了基础实验依据。方法:1.收集符合临床诊断标准的3名LN患者的肾穿标本,用HE、马松(Masson)、六胺银(PASM)染色的方法观察患者肾穿标本的肾脏病理学改变,肾细胞癌患者癌旁正常组织作为正常对照组。采用免疫组织化学的方法,检测LN患者肾脏肾小球以及足细胞IL-17RB的表达情况。2.观察MRL/lpr模型小鼠状态。用考马斯亮蓝方法(CBB)检测小鼠尿液中尿蛋白浓度,用尿酶法检测小鼠血浆中尿素氮浓度。用电镜观察模型小鼠肾脏及足细胞超微结构的病理学改变。采用免疫组织化学的方法,检测MRL/lpr模型小鼠肾脏中肾小球以及足细胞IL-17RB表达的情况。3.用差异过筛法提取MRL/lpr模型小鼠以及健康小鼠的原代足细胞培养观察足细胞的一般形态。用免疫荧光法检测提取的原代足细胞IL-17RB表达情况。4.培养永生化人肾小球足细胞(human glomerulus podocytes,HGPC)系,用IFN-α刺激。选取不同效价(10U/ml、50U/ml、100U/ml、500U/ml、1000U/ml)IFN-α,不同时间梯度(8h、12h、24h)刺激足细胞,用ELISA方法检测足细胞表达IL-6情况,探究足细胞受损程度,以及选取IFN-α最适效价,最适时间,作为足细胞损伤模型条件。5.流式检测最适条件下刺激足细胞损伤后IL-17RB的表达情况。选取最适条件下刺激足细胞,随后进行siRNA转染12h,将足细胞分为无IFN-α刺激的空白对照组、IFN-α刺激的IFN-α组、IFN-α刺激的敲减IL-17RB转染组(IFN-αantibiotic loaded+siRNA组)以及IFN-α刺激的无效转染组(IFN-α+NC组),用PCR法检测刺激以及转染后足细胞IL-17RB m RNA的相对表达量,用Western Blot检测IL-17RB的表达情况。6.用白蛋白内流实验检测不同组足细胞滤过功能情况,用流式检测不同组足细胞凋亡情况。用Western Blot检测不同组足细胞标志蛋白nephrin表达情况。结果:1.与对照组相比,LN患者肾脏肾小球高表达IL-17RB(P<0.01)。IL-17RB在LN患者肾小球足细胞表达。2.14周MRL/lpr模型小鼠尿液中尿蛋白浓度增高,血浆中尿素氮浓度增高(P<0.05)。电镜下观察模型小鼠足细胞数量减少、足突广泛融合,系膜增生,基底膜增厚。与健康小鼠相比,模型小鼠肾小球高表达IL-17RB以及原代足细胞高表达IL-17RB(P<0.05)。3.不同效价IFN-α在不同时间刺激足细胞,ELISA检测在500U/ml IFN-α,12h刺激下足细胞分泌IL-6最多(P<0.05),所以将500U/ml IFN-α,12h作为刺激足细胞损伤最适条件。4.与对照组相比,IFN-α刺激组足细胞IL-17RB表达增加,与IFN-α组相比,siRNA转染后足细胞IL-17JNJ-42756493小鼠RB表达降低(P<0.05)。5.白蛋白内流实验检测足细胞滤过功能,与对照组相比,IFN-α组和IFN-α+NC组培养基中白蛋白浓度增加(P<0.01)。与IFN-α组相比,IFN-α+siRNA组培养基中白蛋白浓度降低(P<0.01),与空白对照组相比,IFN-α+siRNA组培养基中白蛋白浓度升高(P<0.05)。流式检测足细胞凋亡率,结果显示4组足细胞凋亡率差别不大,无统计学意义。6.与空白对照组相比,IFN-α组和IFN-α+NC组足细胞标志物nephrin表达降低,IL-17RB表达增高,且差异具有统计学意义(P<0.05)。与IFN-α组相比,IFN-α+siRNA组足细胞标志物nephrin表达升高,IL-17RB表达降低(P<0.05)。结论:1.LN患者和MRL/lpr小鼠肾脏足细胞高表达IL-17RB。2.体外IFN-α刺激足细胞系HGPC,IL-17RB表达增加。IL-17RB可促进足细胞滤过功能的损伤,对足细胞凋亡能力没有影响,可降低足细胞标志蛋白的表达。

目的:描述系统性红斑狼疮(SLE)患者妊娠前或妊娠期间暴露于贝利尤单抗的妊娠结局,探讨围妊娠期暴露于贝利尤单抗与不良妊娠结局的相关性。方法:本文从贝利尤单抗临床试验、贝利尤单抗妊娠登记(BPR)和已发表病例报告/系列中收集不良妊娠事件的数据,包括妊娠丢失(流产或死胎E-616452)、出生缺陷、围产期事件(先兆子痫/子痫前期、胎盘早剥、胎膜早破、早产、胎儿呼吸窘迫)等信息,同时对贝利尤单抗暴露时间、伴随用药和潜在混杂因tumour biology素进行了描述性总结。结果:在228例已知结局(不包括选择性终止妊娠)的妊娠中,176例为活产。其中,在贝利尤单抗临床试验中,31.8%(n=35/110)接受贝利尤单抗治疗的患者发生了妊娠丢失(流产或死产),而75例以活产为结局的妊娠中,5.3%(n=4/75)的新生儿发生了出生缺陷;在BPR中,9.5%(n=6/63)的妊娠发生了流产,而57例活产中,17.5%(n=LY-188011抑制剂10/57)存在出生缺陷;在病例报告/系列中,10.3%(n=4/39)的妊娠发生了流产,而35例活产中,2.9%(n=1/35)存在出生缺陷。不管在BPR还是在病例报告/系列中,孕早期时,暴露贝利尤单抗的患者占比均最高,前者(n=54/55,98.2%),后者(n=28/39,71.8%);而除了孕晚期,BPR中暴露贝利尤单抗的患者占比都比病例报告/系列中的要高。比较两者各种不良妊娠结局的发生率,除了出生缺陷,病例报告/原列中的患者其不良妊娠结局(包括流产、早产、胎儿小于胎龄[SGA]以及新生儿死亡)的发生率都比BPR的高。本文从异质性较大的三个数据源中收集的所有暴露于贝利尤单抗的孕妇均接受了联合用药,且存在混杂因素和/或缺失数据。鉴于数据的局限性,所以只分别对各个数据源的患者特征进行了统计描述。结论:本文总结了暴露于贝利尤单抗的SLE患者妊娠结局的有限数据。样本量少、混杂因素、数据缺失以及缺乏对照组等局限性的存在,阻碍了贝利尤单抗对SLE患者妊娠结局影响的分析。鉴于全球的数据仍有限,无法明确贝利尤单抗是否增加不良妊娠结局的风险,仍需要更多的临床数据评估其在妊娠期间的安全性。背景:目前,贝利尤单抗在妊娠期应用的数据仍有限,尤其妊娠前或孕早期暴露于贝利尤单抗的安全性数据更为匮乏,且已有的临床试验缺少未暴露贝利尤单抗的SLE孕妇作对照组,使得混杂因素(包括妊娠期SLE活动、合并抗磷脂综合征、子宫手术史等)干扰了妊娠期间暴露于贝利尤单抗的安全性评估。目的:探讨妊娠前和/或孕早期意外暴露于贝利尤单抗后对其妊娠结局的影响以及是否增加不良妊娠事件的风险。方法:为进行回顾性队列研究,通过单中心收集同一时期的18名SLE妊娠患者,其中6名被定义为暴露组(在妊娠前4个月和/或孕早期至少接受了 1次贝利尤单抗输注),另外12名为对照组。所有患者符合SLICC标准并在妊娠开始时病情稳定,且均在妊娠期间常规标准治疗。用图表描述队列的人口统计学和临床特征、产科并发症和胎儿结局。包括APOs的危险因素(不良妊娠史、SLE疾病活动程度、SLE临床表现、自身抗核抗体水平、伴随药物、抗磷脂综合征病史、子宫手术史和妊娠期感染史)、妊娠结局、胎龄及新生儿体重、围产期不良事件以及各妊娠阶段的狼疮活动指数评分。结果:本研究共收集了 18例妊娠:暴露组6例,其中活产6例,流产0例;对照组12例,其中活产10例(83.3%),流产2例(16.7%)。两组间的APOs的危险因素,包括年龄、体重、病程、不良妊娠史、抗磷脂综合征病史、子宫手术史、妊娠期感染史、伴随药物等,均无统计学差异。比较了两组患者在妊娠前6个月内、孕早期、孕中期、孕晚期、产后6个月内等5个观察时间点中的SLEDAI、尿液异常情况、C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)、补体3(C3)、补体4(C4)、抗ds-DNA抗体、抗ENA抗体情况,均无统计学差异。对两组患者进行1:1倾向性评分匹配,成功配对4例患者后,比较两组患者不良妊娠结局(APOs)和围产期不良妊娠事件(APEs)的发生率。匹配前后,两组患者APOs和APEs的发生率均无统计学差异。结论:本研究为SLE妊娠患者应用贝利尤单抗提供了新的临床证据。鉴于全球的数据仍有限,无法明确贝利尤单抗是否增加不良妊娠结局的风险,仍需要积累更多的临床高质量数据来评估其在妊娠期间的安全性。

目的:探讨改良型富血小板纤维蛋白(Advanced Platelet-Rich Fibrin,A-PRF)治疗糖尿病足截趾伤口的临床疗效及价值,为糖尿病足截趾伤口的治疗提供合理有效的方案。方法:严格按照纳入标准和排除标准,收集2022年5月至2023年1月期间因患糖尿病足病需要在我院烧伤整形外科进行足趾截肢手术的患者50例。该50例患者按照随机数字表法分为对照组和A-PRF组,每组25例。两组患者入院后完善相应的术前检查和术前准备,排除手术禁忌后进行Ⅰ期手术(趾骨截断术+清创术+负压伤口治疗),5～7天的负压伤口治疗后,待创面新鲜肉芽生长后行Ⅱ期手术,对照组患者清创后直接缝合,A-PRF组患者截趾后腔隙填入A-PRF后再缝合。观察指标包括:1.伤口愈合相关指标:(1)伤口愈合时间;(2)伤口甲级愈合率。2.疼痛相关指标:(1)疼痛评分;(2)镇痛药的使用。3.治疗前后炎性指标。4.创面分泌物细菌培养。5.住院费用。6.不良事件发生情况。7.A-PRF的微观形态。结果:1.两组患者一般临床资料两组患者的性别(P=0.556>0.05)、年龄(P=0.699>0.05)、糖尿病病程(P=0.550>0.05)以及治疗前的白细胞(P=0.600>0.05)、血小板(P=0.260>0.05)、C反应蛋白(P=0.677>0.05)均无统计学差异,两组患者具有可比性。2.伤口愈合相关指标(1)伤口愈合时间A-PRF组(10.48±2.82天)愈合时间短于对照组(15.88±3.70天),两组愈合时间差异具有统计学意义(P=0.000<0.05)。(2)伤口甲级愈合率对照组甲级愈合14例,乙级愈合7例,丙级愈合4例,甲级愈合率为56%。A-PRF组甲级愈合22例,乙级愈合3例,甲级愈合率为88%。两组的愈合等级(P=0.026<0.05)和甲级愈合率(P=0.027<0.05)均存在显著差异,差异具有统计学意义。3.疼痛相关指标(1)疼痛评分分析两组患者Ⅱ期手术术前、术后24 h、术后72 h的VAS评分。两组患者Ⅱ期手术术前的疼痛评分(对照组4.00±1.73,A-PRF组4.28±1.59)无统计学差异(P=0.555>0.05),具有可比性;Ⅱ期手术术后24小时(对照组4.92±2.04,A-PRF组 3.80±1.58)、Ⅱ期手术术后 72 小时(对照组 3.80±1.52,A-PRF 组 2.44±1.50)A-PRF组VAS评分均较对照组低,两组VAS评分存在统计学差异(P=0.035<0.05,P=0.003<0.05)。(2)镇痛药的使用记录并分析两组患者Ⅱ期手术术后7天内使用镇痛药的次数,A-PRF组(4.12±2.24)对镇痛药的需求比对照组(6.36±2.86)更少,两组患者镇痛药使用次数具有统计学差异(P=0.003<0.05)。4.治疗前后炎性指标两组患者入院当天、Ⅱ期手术术前和Ⅱ期手术术后第7天抽血送检。对照组和A-PRF组经治疗后炎性指标均有明显改善(白细胞(109/L):对照组入院时11.13±2.96、Ⅱ期手术术后7.92±1.23,A-PRF组入院时10.65±3.45、Ⅱ期手术术后第7天7.68±1.39;C反应蛋白(mg/L):对照组入院时51.41±54.41、Ⅱ期手术术后第7天9.33±1.51,A-PRF组入院时55.39±56.39、Ⅱ期手术术后第7天7.97±2.11),变化具有统计学差异(P<0.05)。对比Ⅱ期手术术前和术后第7天的炎性指标,组间不具有统计学差异(白细胞P=0.383>0.05,C反应蛋白P=0.172>0.05)。5.创面分泌物细菌培养分别于患者入院当天、Ⅱ期手术术前和Ⅱ期手术术后第7天的采集患者足部创面分泌物送细菌培养。入院当天:对照组患者细菌培养阳性16例,A-PRF组患者细菌培养阳性17例,两组细菌培养阳性率无统购买VX-445计学差异(P=0.556BYL719分子式>0.05)。Ⅱ期手术术前:对照组患者细菌培养阳性4例,A-PRF组患者检出细菌培养阳性6例,两组细菌培养阳性率无统计学差异(P=0.724>0.05),具有可比性。Ⅱ期手术术后第7天:对照组患者细菌培养阳性2例,A-PRF组患者细菌培养阳性0例,两组细菌培养阳性率无统计学差异(P=0.245>0.05)。6.住院费用对比两组患者住院费用,A-PRF组的住院费用(42755.84±3641.21元)比对照组住院费用(47705.40±3417.88元)更低,两组患者住院费用具有统计学差异(P=0.000<0.05)。7.不良事件发生情况对两组患者进行3至6月(从伤口完全愈合后)的随访。对照组:3例患者失随访,2例患者原伤口出现红肿疼痛,予以清创换药、抗感染等保守治疗后好转,2例患者患侧足部出现新的感染破溃,经住院手术治疗后好转。A-PRF组:2例患者失随访,1例患者原伤口出现红肿疼痛,予以清创换药、抗感染等保守治疗后好转。对照组不良事件发生率为18.18%,A-PRF组不良事件发生率为4.35%,两组不良事件发生率不存在统计学差异(P=0.293>0.05)。8.改良型富血小板纤维蛋白形态结构扫描电子显微镜下,A-PRF是一种轻度聚集的纤维蛋白基质,由细小的纤维蛋白结构、松散排列的大网状结构组成,间质中散在分布着正常或变形的白细胞和血小板。结论:本研究表明,A-PRF能加速糖足截趾创面愈合,未增加不Essential medicine良反应的发生,具有一定的生物安全性,同时降低了患者术后的疼痛感,减轻了患者的住院负担。这为现今糖尿病足截趾创面的治疗提供了一种新的思路。

目的 观察在为系统性红斑狼疮患者实施治疗的过程中三联疗法的临床效果与安全性。方法 本次试验研究的对象为2017年Entinostat使用方法2月至2018年2月在我院接受系统性红斑狼疮治疗的患者64例，根据患Purification者入院病历尾数单双号的不同将患者分为人数相等的两组，运用常规治疗方法实施治疗的32例患者作为试验组，运用三联疗法治疗的32例患者作为对照组。比较两组的治疗效果。结果 试验组患者治疗有效率明显高于对照组患者（P <0.05）；试验组与对照组患者治疗后在疾病活动度评分的比较上差异有统计学意义（P <0.05），两组患者治疗前疾病活动度评分差异无统计学意义（P> 0.05）；试验组患者复发率、感染率和消化道不良反应、肝肾功能损害、心血管不良反应发生率明显低于对照组患者（P <0.05）。结论 在为系统性红斑狼疮患者实施治疗的过程中，三联疗法的运用可以提高治疗有效率，改善疾病活动度评分，减少疾病Belumosudil molecular weight复发、感染和消化道不良反应、肝肾功能损害、心血管不良反应的出现。

幽门螺杆菌（Hp）属于革兰阴性菌，可以在人胃内存活并定植。Hp能够利用其毒力因子调节宿主炎症反应，破坏胃黏膜，其感染的长期结局包括胃癌和胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等恶性肿瘤，是与胃Regulatory toxicology癌相关的Ⅰ类致癌物。与Hp生存相关的毒力因子主要是脲酶PLX-4720 NMR，在脲酶的帮助下，Hp可以在pH值极低的胃内生存，形成持久感染；与Hp定植相关的毒力因子包括外部炎症蛋白A、H点击此处p外膜蛋白Q、血型抗原结合黏附素，这些毒力因子与宿主胃上皮细胞相互作用，帮助Hp在胃黏膜定植，增加癌前病变及胃癌发生风险；与Hp致病相关的毒力因子包括细胞毒素相关基因A、空泡细胞毒素、外膜囊泡、γ-谷氨酰转肽酶、高温需求蛋白A等，Hp在胃上皮细胞存活、黏附并成功定植后，上述毒力因子进一步诱导炎症反应，促进细胞增殖、侵袭和转移，促使胃部炎症向胃癌转化。深入研究Hp毒力因子诱导胃癌发生的机制，有助于为胃癌的诊断和治疗提供新思路和方法。

目的：探讨臂踝脉搏波传导速度（baPReady biodegradationWV）变化对估算肾小球滤过率（eGFR）下降、蛋白尿和慢性肾脏病（CKD）的影响。方法：入选2006～2018年开滦研究队列中完成健康体检并行两次baPWV检测的8 182例职工为研究对象，并依据两次体检baPWV的变化分为baPWV持续低组（n=3 139，两次体检时baPWV均<1 400 cm/s）、baPWV降低组（n=567，第一次体检时baPWV≥1 400 cm/s但第二次体检时<1 400 cm/s）、baPWV升高组（n=1 020，第一次体检时baPWV<1 400 cm/s但第二次体检时≥1 400 cm/s）、baPWV持续高组（n=3 456，两次体检时baPWV均≥1 400 cm/s）。采用多因素Logistic回归分析探讨baPWV变化对e GFR下降、蛋白尿和CKD的影响。结果：baPWV持续低组Navitoclax抑制剂、baPWV降低组、baPWV升高组、baPWV持续高组人群eGFR下降的检出率分别为0.88%、1.81%、1.91%、4.33%，蛋白尿的检出率分别为3.69%、5.52%、3.96%、8.66%,CKD的检出率分别为4.27%、6.88%、5.59%、12.04%；组间差异均有统计学意义（P均<0.01）。多因素Logistic回归分析显示，与baPWV持续低组相比，baPWV持续高组eGFR下降、蛋白尿和CKD的OR(95%CI)分别为[1.73(1.01～2.95),P<0.01]、[1.36(0.95～1.93),P>0.05]、[1.42(1.05～1.93),P<0.01]。结论：baPWV增加是e GFR下降和CKD的危险因购买Dibutyryl-cAMP素。

病毒性肝炎是肝硬化、肝癌事件的重要诱因，已经成为了全球重大公共卫生问题。中药治疗病毒性肝炎具有独特的优势，能够抑制病毒复制，增强机体免疫力，有效防止肝脏纤Z-VAD-FMK作用维化与癌变，对肝功能和症状的改善效果显著，临床疗效确切，安全性较高且不易产生抗药性，减轻西药副作用，达到增效减毒的效果，同时降低患者停药后的复发率。中药治疗病毒性肝炎的研究备受关注，在实验研究与临床方面取得重大进展。本文系统梳理了近5年来中药治疗病毒性肝炎的国内外研究进展，现代研究证实中药可通过直接或间接抑制病毒、抗炎、抗纤维化、抗氧化、调节免疫、调节自噬及通过其他信号通路发挥了治疗病毒性肝炎的作用。临床上多以中药intermedia performance复方或联合西药使用以此改善患者乏力、食欲不振等临床症状，改善机体免疫机制，增强抗病毒能力，缩短患者的治疗疗程更多并改善其生活质量。上述研究为病毒性肝炎病的药理研究、临床研究和新药研发提供参考与借鉴。

目的:分析系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)患者联合使用糖皮质激素与免疫抑制剂发生感染的危险因素并建立风险预测模型。方法:回顾性分析联合使用糖皮质激素与免疫抑制剂的348例SLE住院患者临床资料，其中感染组124例、点击此处非感染组224例，并对2组患者进行倾向性评分匹配，使组间混杂因素均衡。匹配后运用单因素分析和多因素logis获悉更多tic回归模型分析SLE并发感染的危险因素，并建立发生感染的风险预测模型，采用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线评价预测模型，使用70例SLE患者Anal immunization数据进行模型验证。结果:倾向性评分匹配后，感染组与非感染组分别为123例，糖皮质激素剂量(>7.5 mg)、发热、淋巴细胞计数减少(<1×10~9 L~(-1))和血小板减少(<100×10~9 L~(-1))、低蛋白血症(<30 g·L~(-1))是SLE患者感染的独立危险因素。建立logistic回归模型logit(P)=0.8X_1+2.384X_2+1.131X_3+2.059X_4+0.848X_5-1.127,构建各危险因素的ROC曲线，模型预测概率的曲线下面积约0.872,其在ROC曲线对应的最佳截断值为0.506 4。使用符合纳入标准的70例患者资料进行模型外部验证，结果显示预测模型的准确率为77.1%。结论:该研究建立的SLE患者感染风险预测模型具有较高的准确率，有助于早期识别SLE患者的感染风险，对临床制订综合治疗策略有重要意义。

血管性认知障碍(Vascular cognitive impairment,VCI)和血管性痴呆(Vascualr dementia,VaD)是指由脑血管疾病的危险因素、显性或非显性脑血管疾病引起的从轻度认知损害到痴呆的一组综合征。在我国人口老龄化进程加速的趋势下,VCI的患病率、发病率和死亡率日益升高,成为当今医疗事业关注的重点之一。VaD是指由脑血管病变引起的或与脑血管病变相关的一种慢性获得性退行性智力损害综合征,,临床表现为智能障碍,包括认知能力、记忆力、判断和思维能力、计算能力和社会生活能力的减退,伴随着情感、性格的改变。高血压不仅是我国脑卒中发生的首要原因也是VaD、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)等认知障碍独立的危险因素。蛋白质组学是以蛋白质为研究对象,通过质谱技术对生物样本中的蛋白质进行检测和分析,通过对VaD模型动物的蛋白质表达水平、翻译后的修饰、蛋白与蛋白相互作用等的研究。而代谢组学技术,是指某一生物或细胞在一特定生理时期内的所有低分子量代谢产物的分析,研究疾病导致机体病理生理过程变化,最终引起代谢产物发生相应的改变关键物质。课题组在前期研究基础上应用防治VaD的中药复方——参麻益智方(SMYZG),获国家新药发明专利(ZL201610565191.5),并批准为北京市医疗机构中药制剂(Z20200005000),由人参、天麻、鬼箭羽、川芎组成,有益气化瘀、平肝潜阳之用。主治气虚血瘀、肝阳上扰证,治疗症见健忘、神情呆滞、智能减退等的VaD。前期动物实验和临床研究表明SMYZG具有改善VCI大鼠的药理作用及多种作用机制,同时能较好改善患者的认知行为和神经功能。课题组拟通过蛋白组学和代谢组学技术分析高血压结合内皮损伤致VaD模型动物的蛋白质表达和代谢产物差异,并进行中药复方SMYZG的干预研究,获得VaD在蛋白质水平上有关疾病发生、细胞代谢等过程的整体且全面的认识。通过分析VaD模型和SMYZG干预后的脑组织代谢产物,寻找VaD的生物标记物,通过标准化和精细化的蛋白质组学、代谢组学及联合组学技术来立体阐释中医药整体观。研究目的:建立自发性高血压大鼠(Spotaneously hypertensive rats,SHR)复合内皮损伤致VaD模型,观察SMYZG对VaD模型大鼠学习记忆能力、海马突触可塑性、血清胆碱能和β-淀粉样蛋白含量的影响。应用蛋白质组学和代谢组学技术,寻找SMYZG干预VaD参与的代谢通路和具有相同变化趋势的差异蛋白、差异代谢物,系统描述SMYZG在生物体内的分子调控机制。研究方法:实验一参麻益智方对SHR结合内皮损伤致认知功能障碍模型的学习记忆和突触可塑性的影响实验动物使用SHR,无特定病原体级别(SPF),雄性,13～14周龄。通过微电流刺激SHR双侧颈动脉形成血栓的方法制备VaD模型,随机分成:VaD模型(ModeL)组、盐酸多奈哌齐组(DNPQ)、SMYZG高剂量组(SMYZG-H)、SMYZG低剂量组(SMYZG-L),每组10只,并给予相应的药物等体积灌胃。选用相同遗传背景的正常血压Wistar-Kyoto大鼠(WKY)作为对照,与ModeL予等体积蒸馏水灌胃,连续8周。采用Morris水迷宫、脑组织病理HE染色、尼氏染色、高尔基银染方法观察SMYZG对大鼠学习记忆功能、海马(CA1、CA3区)病理形态和突触可塑性形态的影响。血清标记物检测采用ELISA法检测炎症因子:白介素(Interleukin,IL)-1 β、IL-6、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-α水平;血管活性物质:血管紧张素(Angiotensin,Ang)Ⅱ、内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、降钙素基因相关肽(Calcitonin selleck化学gene related peptide,CGRP)水平;痴呆相关病理产物:β-淀粉样蛋白(Amyloid β-protein,Aβ)含量。采用比色法和化学荧光法检测氧化相关指标,诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nos,iNOS)和活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)水平。采用比色法检测胆碱能相关指标,乙酰胆碱(Acetyl-choline,Ach)、乙酰胆碱酯酶(Acetyl-cholinesterase,AchE)水平。实验二参麻益智方对SHR结合内皮损伤致认知障碍模型的蛋白组学研究采用液质联用iTRAQ/TMT标记定量蛋白质组研究的方法,通过TMTpro 16标试剂标记SMYZG干预模型大鼠基因组表达的全部蛋白质,利用标记报告的离子丰度对蛋白进行精确鉴定和定量。数据分析采用Proteome Discoverer软件的搜索引擎Sequest HT检索Uniport蛋白组数据库,获取蛋白质序列信息。开展SMYZG对血管性认知障碍的蛋白质组学研究,以寻找差异蛋白和药物靶标。实验三参麻益智方对SHR结合内皮损伤致认知障碍模型的代谢组学研究应用TM1000靶向代谢组学技术方法,从代谢物层面分析SMYZG干预模型大鼠脑组织代谢物变化及其作用机制。实验四参麻益智方对SHR结合内皮损伤致认知障碍模型的联合组学研究将蛋白组学与代谢组学数据通过R4.0.1和cytoscape3.8.2进行生物信息学分析、代谢物与蛋白酶对应、代谢-蛋白联合分析KEGG代谢通路富集、共有KEGG分析、网络分析(Network)等。研究结果:1.SMYZG对VaD模型大鼠记忆学习能力的影响与WKY组比较,Modelwww.selleck.cn/products/mcc950-sodium-salt穿台次数显著减少(P<0.05),目标象限寻找时间减少(P<0.05),目标象限总路程减少(P<0.05);与Model比较,SMYZG-L、SMYZG-H组穿台次数显著增加(P<0.05,P<0.05),目标象限寻找时间增加(P<0.05,P<0.05),目标象限总路程显著增加(P<0.05,P<0.05)。2.SMYZG对VaD模型大鼠海马CA1-CA3区域突触可塑性的影响与WKY组比较,Model组大鼠海马CA1-CA3区HE染色可见细胞排列无规则,细胞核变形固缩,染色加深;尼氏染色可见尼氏体粉末状改变,数量减少,细胞水肿和溶解;高尔基银染可见树突长度变短,树突棘密度降低,可见不成熟神经元;和Model组比较,DNPQ、SMYZG-H、SMYZG-L组海马病理形态有不同程度的改善,尤其SMYZG-H组神经细胞突触密度显著增加。3.SMYXG对于VaD模型大鼠血清学标志物的影响与 WKY 组相比,Model 组 IL-1 β、IL-6、INOS、ROS、TNF-α 含量均显著升高(P<0.05,P<0.05),Ang Ⅱ、ET-1、Aβ、AchE含量均显著升高(P<0.05,P<0.05),CGRP、Ach 含量下降(P<0.05);与 Model 组比较,SMYZG-L 组、SMYZG-H 组:IL-1 β、IL-6、iNOS、ROS、TNF-α 含量均降低(P<0.05,P<0.05),AngⅡ、ET-1、Aβ 含量降低(P<0.05,P<0.05),CGRP、Ach、AchE 含量上升(P<0.05)。4.SMYZG对VaD模型大鼠蛋白质组学的影响筛选SMYZG改善VaD的潜在信号通路与生物标志物,其潜在作用靶蛋白为:表皮生长因子受体(Egfr)、关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rock1)、原癌基因Pik3ca、RAS相关病毒(Rras)、Ⅲ型β微管蛋白3(Tubb3)、细胞色素C氧化酶亚型5A(Cox5a)、非转移性细胞1基因(Nme1),具有改善血管内皮功能、保护神经元、改善认知功能。神经退行性疾病、阿尔茨海默病的关键通路为:AMPK/PGC-1 α/UCP2/ATP5A、HIF/VEGF、VEGF/Flk-1/p8 MAPK,具有血管内皮保护、神经元保护功能。5.SMYZG对VaD模型大鼠代谢组学的影响研究发现SMYZG可影响VaD模型大鼠认知功能作用的差异代谢物质谱,结果显示在代谢物层面的显著标志物为:酪氨酸(Tyr),麦角硫因(ET),鲱精胺(AGM),甲基烟酰胺(MNA),维生素B6(VB6)以及“精氨酸和脯氨酸代谢”、“辅助因子的生物合成”、“氨基酸的生物合成”作用通路。SMYZG与DNPQ在治疗VaD的代谢层面主要差异标记物为:胞嘧啶(Cytosine)Genetic circuits,一氧化氮合酶抑制剂(L-NMMA),硫酸吲哚酚(Indoxyl Sulfate)以及“神经活性配体与受体”、“辅助因子的生物合成”。6.SMYZG对VaD模型大鼠的联合组学研究研究发现VaD发病与SMYZG起效的共同信号是通路神经退行性疾病-多疾病通路、缝隙链接(Gap junction)、ErbB 信号通路(ErbB signaling pathway)。研究结论:SMYZG可以改善高血压合并血管内皮损伤所致血管性痴呆大鼠的学习记忆功能;蛋白组学和代谢组学研究显示涉及“Egfr,Rock1,Pik3ca,Rras,Tubb3,Cox5a,Nme1”差异蛋白与“Tyr,ET,AGM,MNA,VB6”差异代谢物是 SMYZG改善血管性痴呆的潜在生物标志物。从整体性、时空性和复杂性的分子角度阐释VaD模型的高血压和内皮损伤特征,为探索中药复方防治VaD相关机制提供了新视角。