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本试验主要验证了莫高组合对环磷酰胺致小鼠免疫力低下的调节作用。取80只小鼠随机分为对照组、模型组和莫高不同剂量（0.5g/kg、1g/kg、1.5g/kg、2g/kg、2.5g/kg、3g/kg）处理组，每组10只。除对照组外其余各组小鼠连续3d腹腔注射环磷酰胺（80mg/kg），第6d同更多剂量加强一次，第7～16d莫高各处理组每天primary endodontic infection分别给予相应浓度莫高灌胃1次，对照组和模型组灌胃等体积生理盐水。计算各组小鼠平均采食量、体质量变化率、免疫器官指数，采用酶联免疫吸附法测定血清溶菌酶活性。结果是模型组小鼠的体质量变化率、胸腺指数、脾脏指数、血清溶菌酶活性均显著低于对照组（P<0.05）。与模型组相比，不同剂量莫高组小鼠采食量、体质量变寻找更多化率、胸腺指数、脾脏指数均有所升高，并且在低剂量（0.5g/kg）时显著提高（P<0.05）。不同剂量莫高组合小鼠溶菌酶活性明升高（P<0.05）。说明莫高组合能提高小鼠免疫器官指数，增强溶菌酶活性，对环磷酰胺致免疫力低下小鼠的免疫功能具有改善作用。

目的 对磁珠法结合实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测新型冠状病毒（简称新冠）灭活疫苗（Vero细胞）中宿主细胞残留DNA(residual cell DNA,rcDNA)进行验证及应用。方法 利用磁珠与溶液中DNA的特异性结合来提取样品中rcDNA。将已知浓度的细胞DNA标准品系列稀释后，根据DNA标准品的循环阈值与浓度之间的线性关系，对未知样品中的rcDNA进行定量分析。对方法进行线性和范围、专属性、准确度、精密度验证，并使用该方法对新冠灭活疫苗（Vero细胞）生产过程样品进行rcDNA及其片段大小检测。结果 标准品检测mTOR抑制剂范围为0.000 3～30 pg/μL，该方法的标准曲线决定multiple HPV infection系数（R~2）> 0.99，扩增效率为90%～110%。质控样品回收率为50%～1D-Lin-MC3-DMA浓度50%，相对标准偏差（RSD）均小于30%。试验结果的各项参数均符合标准。结论 磁珠法可解决rcDNA检测中样品前处理提取DNA的技术难点，qPCR能够简便、快速、准确地对新冠疫苗生产过程中的rcDNA进行定量测定。该方法适用于新冠疫苗中rcDNA的检测及疫苗生产过程和成品的质量控制，对其他采用同样细胞基质的病毒性疫苗质量控制也具有借鉴意义。

旨在通过构建PLC-γ1真核过表达载体并制备其多克隆抗体，为探索绵羊PLC-γ1基因对卵母细胞激活作用及早期胚胎发育的影响提供基础数据。本研究以实验室保存的Puc57-P2Asport and exercise medicine-Flag-PLC-GW4869小鼠γ1菌株为模板设计引物并引入HindⅢ、AgeⅠ酶切位点，利用PCR扩增并纯化P2A-Flag-PLC-γ1基因，将其连入pcDNA3.1-EGFP载体，进行转化，通过菌液PCR、双酶切及测序鉴定后提取质粒。随后将构建好的重组质粒转染HEK-293T细胞24 h,分为control组、空载组和PLC-γ1过表达组，通过显微镜观察细胞荧光，实时荧光定量PCR(qPCR)及Western blot(WB)检测转染后细胞中PLC-γ1的表达情况；Anti-Flag免疫磁珠纯化PLC-γ1蛋白；以10月龄的新西兰大白兔(健康状态良好，体重约50 kg,n=2)为对象制备多克隆抗体，间接ELISA法测定多克隆抗体效价，WB鉴定其特异性。通过显微注射重组质粒及离子霉素(Ion)结合6-DMAP孤雌激活卵母细胞，qPCR及WABT-263B检测PLC-γ1在卵裂后不同时期(2细胞期、4细胞期、8细胞期、桑椹胚期)的绵羊早期胚胎细胞中的表达情况。结果显示，成功构建真核过表达载体；转染24 h后，与空白对照及阴性对照相比，过表达组PLC-γ1表达量明显升高(P<0.01);WB结果显示成功获得并纯化PLC-γ1蛋白，大小为149 ku;测得PLC-γ1多克隆抗体效价为1∶12 800,并可与PLC-γ1蛋白发生免疫反应。将重组质粒注射到绵羊MⅡ期卵母细胞胞质中，qPCR及WB结果显示PLC-γ1在绵羊早期胚胎发育各时期均有表达。综上所述，本研究成功构建了PLC-γ1真核过表达载体并制备了其多克隆抗体，通过显微注射技术将重组质粒注入卵母细胞并实现表达，证明PLC-γ1在绵羊早期胚胎发育各时期均有表达，且具有作为新的卵母细胞激活因子的潜能。既为探索绵羊PLC-γ1基因对卵母细胞激活作用及早期胚胎发育的影响提供了科学依据，也为进一步提升绵羊的繁殖性能奠定基础。

目的 不同抗生素治疗新生儿胎膜早破(premature rupture of membranes, PROM)感染的效果，并分析其危险因素。方法 选择2019年2～12月收治的215例PROM新生儿，对其临床资料进行回顾性分析，根据不同抗生素治疗方案分为2组，对照组130例依照入院风险评估结构实施治疗，观察组85例依照入院后PLX-4720价格感染筛查结果与风险评估结果实施治疗，对比2组PROM新生儿治KPT-330研究购买疗效果。另将215例PROM新生儿根据是否发生感染分为正常组(n=178)和感染组(n=37),整理2组患儿基本信息，分析影响新生儿PROM感染的高危因素。结果 观察组总感染发生率为14.12%略低于对照组的19.23%;但差异无统计学意义(P>0.05)。观察组新生儿抗生素使用时间低于对照组(P<0.05);观察组败血症/可疑败血症占比为3.53%低于对照组的11.54%(P<0.05)。单因素分析显示，出生体重、是否足月、分娩方式、PROM时间、抗生素使用、发热与新生儿PROM感染的发生存在密切关系(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示，剖宫产、未足月儿、出生体重<2.5 kg是影响新生儿PROM感染的高危因素(P<0.05)。结论 新生儿PROM患儿使用抗生素治疗时，需根据患儿感染筛查结果与风险评估合理用药，确保药物疗效同时，减少抗生素药物使用；影响新生儿PROM感染的主要危险因素是低体重、早产与剖宫产，此类高风险新生儿，需高度重视，加Molecular Biology强早期预防管理工作。

目的 利用iTRAQ标记的蛋白组学技术探讨骨肉瘤肺转移患儿血清中蛋白的表达。方法 纳入10例骨肉瘤患儿和10例骨肉瘤肺转移患儿作为研究对象，收集AG-221抑制剂所有研究对象血清5 ml,采用iTRAQ标记的蛋白组学技术分析2组血清中的差异表达蛋白，并对差异表达蛋白进行GO富集分析、KEGG通路富集及蛋白-蛋白互作分析。外科手术后获取2例骨肉瘤肺转移患儿及2例骨肉瘤患儿瘤体组织，采用Western blot验证2组患儿癌组织中CDK1、hnRNP A2/B1、ITGAV和SRSF10的蛋白表达水平。结果 与骨肉瘤患儿相比，骨肉瘤肺转移患儿血清中高表达的蛋白共477种，低表达的蛋白共235种。KEGG通路富集显示，ECM及受体的相互作用、黏着力及PI3K-Akt信号通路等可能是骨肉瘤肺转移的主要发病机制。骨肉瘤肺转移患儿血清中差异蛋白前10种为CDK1、CTNNB1、ITGB1、SNRPE、SNRPG、HNRNPH1、SNRPD3、HNRNPC、ITGAV和SRSF1。与骨肉瘤患儿的癌组织相比，骨肉瘤肺转移患儿癌组织中CDK1、hnRNP A2/B1、ITGAV和SRSF10蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 与骨肉瘤患儿相比，BYL719临床试验骨肉瘤肺转移immunostimulant OK-432患儿血清中存在多种差异表达蛋白，采用iTRAQ标记的蛋白组学技术能很好地筛选出差异蛋白，为骨肉瘤发生肺转移的分子机制研究提供了潜在的血清学标志物。

本研究构建了一种稳定表达ATP结合盒转运蛋白2 (ATP binding cassette subfamily G member 2, ABCG2)并可用于筛选ABCG2抑制剂的细胞模型。首先,利用脂质体lipo3000将表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2转染至HEK293细胞,经G418Dibutyryl-cAMP临床试验筛选阳性克隆株后,采用q RT-PCR与Western-blot方法进行ABCCRG 81045生产商CG2稳转细胞株(稳转株)pediatric infection的鉴定;随后,利用差速离心法提取膜囊泡,通过14C-尿酸同位素摄取实验筛选ABCG2抑制剂。结果表明, ABCG2稳转株的mRNA及蛋白质表达水平分别为野生型的1 717.5倍和2.64倍;经其提取的囊泡摄取14C-尿酸的能力为对照囊泡的3.73倍。利用上述工具细胞,研究评价了临床常用的降尿酸药物对ABCG2的抑制活性。结果显示,苯溴马隆抑制ABCG2的IC50值为(3.45±1.09)μmol/L, RDEA3170抑制ABCG2的IC50为(9.90±2.11)μmol/L。综上所述,本实验成功构建了ABCG2抑制剂体外筛选模型,并首次发现RDEA3170具有ABCG2抑制作用。

目的 探讨2型糖尿病伴有桥本甲状腺炎患者经左甲状腺素PF-6463922钠片+胰岛素+口服降糖药完成联合治疗后获得临床效果。方法 选取2019年1月—2022年1月甘肃省甘南藏族自治州人民医院收治的2型糖尿病伴有桥本甲状腺炎的100例患者为研究对象；依据治疗方法的不同分为两组，各50例。参照组实施左甲状腺素钠片+胰岛素治疗，研究组实施左甲状腺素钠片+胰岛素+口服降糖药治疗；比较两组患者的药物治疗效果、空腹血糖水平、糖化血红蛋白水平、餐后2 h血糖水平、血糖曲线下面积数、修整胰岛β细胞分泌指数以及不良反应情况。结果 研究组治疗总有效率（96.00%）高于参照组的76.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前，两组空腹血糖水平、糖化血红蛋白水平、餐后2 h血糖水平、血糖曲线下面积数以及修medical group chat整胰岛β细胞分泌指数比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，研究组空腹血糖水平、糖化血红蛋白水平、餐后2 h血糖水平、血糖曲线下面积数较参照组更低，差异有统计学意义（P<0.05）；研究组修整胰岛β细胞分泌指数较参照组更高，差异有统计学意义（P<0.05）；两组不良反应总发生率比较，差异无统Roxadustat计学意义（P>0.05）。结论 左甲状腺素钠片+胰岛素+口服降糖药治疗较左甲状腺素钠片+胰岛素治疗效果更确切，并且安全性较高，可将2型糖尿病伴有桥本甲状腺炎患者胰岛功能水平、血糖水平更好改善。

目的:研究华泽兰根茎石油醚部位的五种单体化合物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞体外抗炎活性。方法:MTT法检测各化合物对RAW264.7细胞增殖的影响，ELISA、Western Blot分别检测RAW264.7细胞上清液中NO、TNF-α含量和细胞中NLRP3、JAK/STAT抑制剂IL-1β、IL-18蛋白表达。结果:MTT分析显示泽兰素、化合物A、B、C和D五种单体分别在14.4μmol/L～115.6μmol/L、3.125μmol/L～25μmol/L、3.125μmol/L～25μmol/L、3.125μmol/L～25μmol/L、3.125μmol/L～5μmol/L时对RAW264.7细胞增殖没有明显抑制作用；RAW264.7细胞在用LPS刺激后，细胞上清液中NO、TNF-α含量和细胞中NLRP3、IL-18、IL-1β蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01);用泽兰素、化合物A、B、C和D干预后细胞上清液中NO、TNF-α含量和细胞中NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:华泽兰根茎中石油醚部位化学成分泽兰素、化合物A、B、C和D具有较好的抗炎作用，其作用机制与抑inhaled nanomedicines制NLRP3激活及炎症因子生成有关。其MK-2206中以泽兰素的作用效果最为显著，依次是化合物A、C、D和B。

抗菌肽是各物种用来抵御细菌和外来病原体的内源性分子,是先天免疫系统的一部分。有较多的研究发现部分抗菌肽具有抗肿瘤活性,同时副作用较少。其中有研究基于牛乳铁蛋白,开发出一系列阳离子肽,主要由九种氨基酸组成,发现该系列多肽对肿瘤细胞具有很强的破坏作用,而对正常细胞的毒性较低,表现出较高的选择性。其中最有效的LTX-315在治疗实体瘤方面有一定疗效,但给药方式仅限于瘤内给药,应用受到了明显的限制。因此本研究基于阳离子九肽(KKWW)_2K-NH_2(AMP),针对肿瘤微环境的高活性氧(ROS)和肿瘤细胞表面过表达的唾液酸基PF-07321332供应商团,设计并构建出多功能抗肿瘤多肽,通过分子动力学模拟技术、体外细胞实验及荷瘤小鼠实验等验证其肿瘤靶向能力和抗肿瘤活性。本文主要分为如下四个部分:1.综述本章首先对抗菌肽的研究进行了总结,基于抗菌肽的构效关系分析了其抗肿瘤的作用机制,以及抗菌肽对肿瘤细胞的抗增殖、促凋亡和抗转移应用;其次围绕靶向递送的研究,分析了靶向治疗的生物屏障,并且对小分子药物、多肽、抗体和基于细胞的靶向策略进行了综述;最后介绍分子动力学模拟研究现状。这几方面的综述从而为本课题提供了理论基础和技术支撑。2.多功能抗肿瘤多肽的设计及构建本章旨在设计并构建多功能抗肿瘤多肽,在能够靶向肿瘤部位的同时发挥其抗肿瘤活性。有研究表明基于牛乳铁蛋白的阳离子抗菌肽,多肽序列中主要含有五个阳离子残基、2-3个色氨酸残基和1-2个侧链空间位阻偏大的非天然残基,这些阳离子抗菌肽对多种癌细胞具有明显的疗效,并且对正常细胞毒性较低。虽然在治疗实体瘤方面显示出临床前景,但仅限于瘤内给药,应用受到一定的限制。因此,本课题基于牛乳铁蛋白,提取出阳离子九肽序列(KKWW)_2K-NH_2(AMP)为模板,引入半胱氨酸残基(C)改造成适合修饰的多肽(KKWC)_2K-NH_2(Cys-AMP);随后在Cys-AMP的半胱氨酸侧链巯基上修饰4-乙烯基苯基硼酸,从而构建抗肿瘤多肽(PBN-AMP),具有肿瘤微环境刺激响应的能力以及与肿瘤细胞表面高表达的唾液酸特异性结合的能力。通过分子动力学模拟技术,研究设计的多肽在肿瘤微环境条件下与肿瘤细胞膜的结合情况。分别模拟了AMP、Cys-AMP和PBN-AMP的动力学行为,实DNA biosensor验表明AMP与肿瘤细胞膜有一定的亲和力,但是结合的稳定性偏差,大约有10 ns的时间会游离出细胞膜,效果不理想。Cys-AMP在动力学模拟中发现与肿瘤细胞膜具有一定的结合能力,相比AMP要稳定一些。与前面两条多肽相比,在引入4-乙烯基苯基硼酸后,多肽PBN-AMP能够在较短时间内结合到肿瘤细胞膜上,并具有较高的稳定性,表明PBN-AMP与肿瘤细胞膜的亲和力更强,具有潜在更强的对肿瘤细胞的杀伤能力。采用多肽固相合成方法分别合成了多肽AMP和Cys-AMP。随后利用巯基-烯(Thiol-Ene)点击化学反应,将化合物4-乙烯基苯基硼酸修饰到多肽Cys-AMP上,合成多肽PBN-AMP;通过反相高效液相色谱(HPLC)和LC-MS对合成产物进行鉴定。3.多功能抗肿瘤多肽的体外活性研究本章通过细胞摄入实验及细胞毒性实验考察PBN-AMP的抗肿瘤活性,并且验证分子动力学模拟的结果。首先研究肿瘤细胞对多肽的摄取情况。利用FITC分别标记多肽AMP和PBN-AMP,制备得到多肽AMP-FITC和PBN-AMP-FITC,然后通过荧光显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7对两种多肽的摄取。实验结果表明,相比AMP,MCF-7细胞对PBN-AMP摄取量更多。随后考察三条多肽AMP、Cys-AMP和PBN-AMP的细胞毒性作用。分别培养人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及鼠乳腺癌细胞4T1,用于多肽的细胞毒性考察。实验结果表明三条多肽在多种细胞系上均表现出不同程度的杀伤作用。三条多肽对MCF-7细胞的毒性作用最明显,其中PBN-AMP效果最好(IC_(50):38.46μM),Cys-AMP次之(IC_(50):selleck Laduviglusib39.85μM),AMP最差(IC_(50):110μM)。细胞毒性实验的数据能够验证分子动力学模拟的结果,表明使用分子动力学模拟技术验证多肽的肿瘤靶向性是可行的,具有较强的与肿瘤细胞膜结合能力的PBN-AMP表现出良好的抗肿瘤活性。4.多功能抗肿瘤多肽的体内活性研究通过构建4T1乳腺癌荷瘤小鼠模型,进一步考察PBN-AMP的肿瘤靶向能力及抗肿瘤活性。小动物活体成像结果表明,和AMP相比,PBN-AMP能够更好地靶向聚集到肿瘤部位。药效学实验结果表明,PBN-AMP高剂量组(20 mg/kg)的小鼠肿瘤体重显著小于生理盐水组,其抑瘤率为59.36%。并且比较不同剂量组的抑瘤率能够发现:PBN-AMP的抗肿瘤作用具有剂量依赖性;并与多肽AMP相比,PBN-AMP具有更强的抗肿瘤活性。荷瘤小鼠实验的结果证明构建的PBN-AMP能够赋予多肽的肿瘤靶向性,并增强其抗肿瘤活性。综上所述,本课题设计并构建的多功能抗肿瘤多肽PBN-AMP,通过响应肿瘤微环境的刺激条件,表现出良好的肿瘤靶向性和抗肿瘤活性,从而实现了靶向肽和治疗肽的融合,具有潜在的应用发展前景。并且本课题中使用分子动力学技术也为多肽的设计提供了一种可靠的验证手段,从而高效、低耗地优化生物活性大分子的设计。

目的 探讨CTRP9对远端缺血预处理心肌梗死模型大鼠心肌缺血再灌注致脑损伤的保护作用。方法 选取40只雄性SD大鼠，随机分为4组：假手术组（NS组）、心肌缺血再灌注组（NIR组）、缺血预处理组（NIPost组）及缺血预处理+CTRP9抑制剂组（NIPostI组），每组10只。采用苏木精-伊红染色观察大鼠脑组织病理学变化，免疫组织化学法检测大鼠脑组织凋亡因子、炎症因子的表达，TUNEL法检测大鼠脑组织细胞凋genetic constructs亡，Western blotting检测大鼠心肌组织p-AMPK/t-AMPK、LC3Ⅰ/Ⅱ及P62蛋白的表达。结果 (1)HE染色结果显示，NSJNJ-42756493组皮层的神经元胞浆十分丰富，核呈圆形，碱染后呈蓝色，分布均匀且排列整齐；NIR组神经元结构受损c-Met抑制剂，分布不均匀，胞浆出现空泡，胞核固缩，碱染后出现了淡红色；NIPost组细胞结构大多恢复正常，大部分神经元包膜完整，胞核清晰可见；NIPostI组经CTRP9抑制剂干预后，预处理的保护效应消失。(2)NIR组、NIPost组及NIPostI组脑组织Bax、IL-6、IL-8表达水平高于NS组（P <0.05）,Bcl-2、IL-10表达水平低于NS组（P <0.05）;NIPost组较NIR组Bax、IL-6、IL-8表达水平降低（P <0.05）,Bcl-2、IL-10表达水平升高（P <0.05）;NIPostI组较NIPost组Bax IL-6、IL-8表达水平升高（P <0.05）,Bcl-2、IL-10表达水平降低（P <0.05）。(3)NIR组、NIPost组和NIPostI组脑组织凋亡细胞多于NS组（P <0.05）;NIPost组和NIPostI组较NIR组凋亡细胞减少（P <0.05）。NIPost组和NIPostI组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。(4)NIR组、NIPost组及NIPostI组心肌组织p-AMPK/t-AMPK蛋白相对表达量低于NS组（P <0.05）,LC3Ⅰ/Ⅱ和P62蛋白相对表达量高于NS组（P <0.05）;NIPost组较NIR组p-AMPK/t-AMPK蛋白相对表达量升高（P <0.05）,LC3Ⅰ/Ⅱ和P62蛋白相对表达量降低（P <0.05）;NIPostI组较NIPost组p-AMPK/t-AMPK蛋白相对表达量降低（P <0.05）,LC3Ⅰ/Ⅱ和P62蛋白相对表达量升高（P <0.05）。结论 远端缺血预处理可缓解大鼠心肌缺血再灌注所致脑损伤。CTRP9可通过激活AMPK信号通路，参与远端缺血预处理对心肌缺血再灌注所致脑损伤的保护过程。CTRP9水平升高有益于防治心肌梗死。