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目的:探讨ABT-263红斑狼疮患者应用中医情志护理的效果及对其负性情绪的影响。方法:用随机数字表法将我院2021年1月—2022年10月收治的280例红斑狼疮患者分为两组：观察组和对照组，140例一组。观察组予以中医情Emerging infections志护理，对照组予以常规护理。比较两组护理前后的血清免疫指标，负性情绪评分以及生活质量评分。结果:与护理前相比，护理后两组的IgA、ANA水平下降，血清补体C3水平上升，且观察组变化幅度高于对照组(P<0.05)。与护理前相比，护理后两组的SAS、SDS评分下降，且观察组下降幅度高于对照组(P<0.05)。与护理前相比，护理后两组的社会功能、躯体功能等SF-36评分均上升，且观察组上升幅度高于对照组(P<0.05)。结论:红斑狼疮患者应用中医情志护理可以改善其免疫功能，降低其负性情绪，提升其生活质JQ1体外量，值得临床应用。

目的:内镜下逆行胰胆管造影术(Endoscopic retrograde cholangiopancreatography,ERCP)目前广泛用于胆胰疾病的诊治,尤其是治疗恶性胆道疾病造成的胆道梗阻,ERCP置入支架可通畅胆道以达到姑息性治疗的目的。由于患者本身患有恶性疾病及ERCP操作难度高等原因,其术后并发症diABZI STING agonist发生率较高,目前对于ERCP术后胰腺炎的研究较多,对于术后胆管炎的研究较少,且ERCP术后胆管炎严重影响了患者的术后生活质量及疾病预后。故本研究旨在分析可能导致恶性胆道梗阻患者ERCP置入支架后发生胆管炎的危险因素,并构建一个临床预测模型预测患者发生胆管炎的概率,以用来指导恶性胆道梗阻患者的个体化ERCP治疗。方法:收集2016年01月-2022年06月于我院行ERCP支架置入的311例恶性胆道梗阻患者临床资料,将可能导致胆管炎发生的影响因素纳入研究,如性别,年龄,既往疾病(糖尿病、高血压),既往是否吸烟、饮酒,患者胆道梗阻的部位,术中是否出现困难插管,置入支架类型,实验室检查数据和其他相关资料。将上述影响因素进行单因素、多因素Logistic回归分析,得出有统计学意义的独立危险因素,然后建立列线图预测模型,根据患者是否具有上述独立危险因素在预测模型中进行个体化量化评分,根据其所得总分数预测胆管炎发生概率。采用ROC曲线下面积(AUC)进行预测模型区分度评价,用校准曲线验证模型一致性。结果:1.一般资料比较311例于我院行ERCP胆道支架置入的恶性胆道梗阻患者,60例发生胆管炎,251例未发生胆管炎,胆管炎发生率为19.29%。其一般资料(年龄、性别)无显著差异(P>0.05),具有可比性,此外是否患有糖尿病、高血压亦无显著差异(P>0.05);梗阻部位比较显示高位梗阻更易导致胆管炎(P<0.05)。2.单因素、多因素Logistic回归分析单因素分析显示谷氨酰基转移酶(GGT,P=0.001)、白蛋白(P<0.001)、困难插管(P<0.001)、梗阻部位(P<0.001)、吸烟(P<0.001)是恶性胆道梗阻患者ERCP置入支架术后胆管BMS-907351炎发生的影响因素。将上述影响因素进行多因素分析显示GGT(P=0.005,OR 1.001,95%CI 1.000-1.001)、白蛋白(P=0.004,OR 4.645,95%CI 1.644-13.129)、困难插管(P<0.001,OR 18.859,95%CI 4.807-73.992)、梗阻部位(P<0.001,OR 5.723,95%CI2.587-12.663)、吸烟(P=0.002,OR 3.124,95%CI 1.525-6.398)是胆管炎发生的独立危险因素。3.模型建立及验证将多因素Logistic回归分析出有统计学意义的危险因素建立列线图预测模型,根据各个危险因素所占分数,显示GGT水平及困难插管对ERCP术后发生胆管炎的预测能力较大,其次是梗阻部位、白蛋白水平、是否吸烟。可根据患者是否具有上述危险因素在模型中进行个体化评分,预测其发生胆管炎的概率,根据其胆管炎发生概率可采取个体化预防措施。模型区分度用ROC曲线评价,根据每个患者预测发生胆管炎的概率绘制ROC曲线,ROC曲线下面积(AUC)为0.837(95%CI:0.777～0.896,P<0.001),提示模型有较高的区分度。一致性评价采用校准曲线(Calibration曲线),校准曲线图显示预测概率在20%-40%之间时,预测概率稍大于实际发生概率,预测该患者发生胆管炎的概率超过40%时与实际发生概率一致性较高,显示模型具有良好的预测效能。结论:1.对于恶性胆道梗阻患者,ERCP胆道支架置入是解决胆道梗阻的有效治疗方式,但其术后胆管炎发生概率较高。对此类患者应根据患者的病情并完善相关检查等综合评估,手术医师应严格把握ERCP的适应症与禁忌症,保证患者的手术安全及术后生活质量。2.对于ERCP胆道支架置入的恶性胆道梗阻患者,高GGT、低白蛋白、困难插管、高位胆道梗阻、吸烟是其胆管炎发生的独立危险因素。多因素独立或相互协同导致了恶性胆道梗阻患者ERCP置入支架术后胆管炎的发生,可通过在ERCP术前改善患者全身状态、术中有效进行胆道减压、通畅胆道引流、同时加强ERCP无菌操作等方法,尽量降低恶性胆道梗阻患者ERCP术后胆管炎的发生。3.根据分析出的危险因素建Transperineal prostate biopsy立列线图模型,模型区分度和一致性评价结果显示列线图模型具有良好的预测效能。可将患者具有的危险因素在列线图模型中进行评分,并得出总分数,来预测该患者发胆管炎的概率并据其发生胆管炎的概率采取个体化预防措施。

目的 探讨TRPC6离子通道在内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)诱导的肾小球系膜细胞(HBZY-1)凋亡中的作用及机制。方法 实验分为正常对照组(NC)、thapsigargin(TG)、TG+SKF96365和TG+TRPC6siRNA组。qRT-PCR和Western blot技术检测TRPC6和ERS相关蛋白(GRP78和Caspase12)的mRNA和蛋白表达。流式细胞术和Hoechst33258方法检测细Genetic and inherited disorders胞凋亡。Fluo-4AM Ca~(2+)成像技术测定细胞内Ca~(2+)内流(intraselleck产品cellular calcium,[Ca~(2+)]i)的变化情况。结果 TG组细胞出现核浓缩或核碎裂为特征的凋亡形态变化，细胞凋亡率增加。TRPC6和ERS相关蛋白(GRP78和Caspase12)的表达明显高于NC组(P<0.05)。SKF96365和TRPC6 siRNA预孵育HBZY-1细胞可减轻细胞Erdafitinib凋亡(P<0.05)。TG刺激后[Ca~(2+)]i也增加(P<0.05)。与TG组相比，SKF96365和TRPC6 siRNA处理后TRPC6、GRP78和Caspase12的表达下调，并伴有[Ca~(2+)]i的减少(P<0.05)。结论 抑制TRPC6可以减轻TG诱导的HBZY-1细胞凋亡。

目的：使用网络药理学方法分析黄芪治疗骨骼肌减少症的作用机制。方法：使用中药系统药理学数据库与分析平台（traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP）筛选黄芪的活性成分并预测其作用靶点；筛选GEO与人类基因数据库（the human gene database,GeneCards）中有关骨骼肌减少症的相关基因并进行合并；使用STRING在线数据库将疾病与药物交集靶点进行蛋白相互作用分析，并使用Cytoscape 3.7.2软件对蛋白-蛋白互作网络（protein-protein interactions,PPI）进行拓扑学分析，确定核心靶点；使用Cytoscape软件构建“药物-活性成分-靶点-疾病”网络，使用AutoDockTools等软件对药物关键分子与疾病关键蛋白进行分子对接验证；最后利用DAVID数据库对潜在靶点进行基因本体论（gene ontology,GO）分析，探究黄芪治疗骨骼肌减少症的生物功能，通过京都基因与基因组百科全书（kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析探究黄芪治疗骨骼肌减少症的主要信号通路。结果：共得到黄芪有效活性成分作用靶点155个，骨骼肌减少症相关基因靶点1057个，药物-疾病交集靶基因36个，主bio depression score要包括Akt1、p53、VEGFA、TNF、ESR1等“；药物-活性成分-靶点-疾病”调控网络显示槲皮素、华良姜素、联苯双酯、7-O-methylisomucronulatol、异鼠李素等药物活性成分在治疗骨骼肌减少症中发挥作用；分子对接验证实现了5种主要活性成分与5种关键靶点蛋白的对接，结果发现其均具有较强的结合活性；GO分析结果显示，黄芪治疗骨骼肌减少症主要与调控炎症反应及凋亡过程的正调控、细胞对缺氧的反应、细胞衰老等生物学过程有关，并影响蛋白质结合、转运活性、过氧化物酶体增殖物激活受体结合、肌动蛋白结合、生长因子活性、蛋白磷酸酶抑制剂活Cell Cycle抑制剂性等分子功能；KEGG分析显示靶Cell Cycle抑制剂点基因主要富集在癌症、肿瘤坏死因子、低氧诱导因子-1、细胞凋亡等通路。结论：黄芪可能通过同时调控多个靶点基因及相关信号通路，发挥诱导细胞衰老和凋亡、改善局部微循环、降低细胞外基质降解速度、减轻慢性炎症及氧化应激损伤等作用，以延缓骨骼肌萎缩。

目的 分析参芪Erdafitinib浓度延肾方对慢性肾病患者炎症反应、肾selleck功能、钙磷代谢影响。方法 选择2019年6月—2022年1月间该院收治的慢性肾病60例患者，分为观察组和对照组，对照组采用醋酸泼尼松片治疗，观察组采用醋酸泼尼松片联合参芪延肾方治疗；比较两组患者临床疗效、钙磷代谢指标、肾功能指标、血液流变学指标、炎症水平。结果 观察组治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05);治疗后观察组患者血中钙(Ca)均明显高于对照组，磷(P)behavioural biomarker、全段甲状旁腺激素(iPTH)、全血低切(LS)、全血高切(HS)、血浆黏度(PV)、尿微量白蛋白(UmAlb)、尿微量白蛋白(UAER)、血肌酐(Scr)、C反应蛋白(CRP)、AGEs、Gd-IgA1、IL-8及IL-6水平均明显低于对照组，且差异存在统计学意义(P<0.05)。结论 利用参芪延肾方对慢性肾病患者进行干预后，可有效改善患者肾功能，降低炎症反应并改善钙磷代谢。

目的：观察双醋瑞因胶囊联合醋氯芬酸肠溶片和非布司他片治疗慢性痛风性关节炎患者的临床疗效。方法：将160例慢性痛风性关节炎患者随机分为治疗组和对照组，每组80例。对照组给RSL3予非甾体抗炎药醋氯芬酸肠溶片和降尿酸药非布司他片口服治疗；治疗组在对照组治疗基础上加服双醋瑞因胶囊。2组均以12周为1个疗程。观察2组患者治疗前后临床症状[关节肿痛数、急性发作次数、关节疼痛视觉模拟评分法（VAS）评分]及患者自我感觉的总体评估（PGA评分）；红细胞沉降率（ESR）,C反应蛋白（CRP），血尿酸（UA），三大常规（血、尿、大便常规），肝功能，肾功能等；运用肌骨超声描述病变关节“关节积液”的影像学变化情况。结果：治疗组显效25例，有效50例，无效5例，总有效率为93.75%；对照组显效10例，有效55例Dionysia diapensifolia Bioss，无效15例，总有效率为81.25%。2组比较，差异有统计学意义（P <0.05）。治疗4,8,12周后，2组关节肿痛数、急性发作次数、VAS评分、患者PGA评分、ESR、CRP、UA较治疗前均显著改善（P <0.05）；治疗组上述指标随着治疗时间的延长，疗效逐渐增加，具有时效性（P <0.05）；对照组治疗12周后，上述指标水平较治疗4,8周后明显改善，差异有统计学意义（P﹤0.05）。治疗8,12周后，治疗组上述指标均优于对照组（P <0.05）。治疗12周后，2组患者关节积液分级较治疗前均有明显改善（P <0.05）；且治疗组优于对照组（P <0.05）ZD1839分子量。不良反应率治疗组为23.75%，对照组为22.50%,2组比较，差异无统计学意义（P> 0.05）。结论：双醋瑞因胶囊联合醋氯芬酸肠溶片和非布司他片能明显缓解慢性痛风性关节炎的慢性关节滑膜炎症，减少急性发作，较好地控制病情。

目的 探讨应用注射用谷胱甘肽联合硫普罗宁治疗药物性肝损伤(DILI)患者的疗效。方法 2019年12月～2022年8月我院诊治的DILI患者72例，被随机分为对照组36例和观察组36例，分别给予硫普罗宁治疗或谷胱甘肽联合硫普罗宁治疗2～4 w。采用黄嘌呤氧化法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)水平，采用硫代巴比妥酸法检测血清丙二醛(MDA)水平，采用二硫基双硝基苯甲酸法检测血清谷INCB28060胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平，采用ELISA法检测血清人血红素氧合酶1(HO-1)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-1β水平。结果 在治疗4周末，观察组血清ALT和AST水平分别为(40.6±11.5)U/L和(31.0±2.6)U/L,显著低于对照组【分别为(64.6±13.9)U/L和(63.7±15.3)U/L,PCaptisol体外<0.05】,而两组血清总胆红素和GGT水平无显著性相差【分别为(16.8±3.9)μmol/L和(59.2±13.3)U/L对(20.2±4.2)μmol/L和(60.8±1Probiotic product4.7)U/L,P>0.05】;观察组血清SOD、GSH-Px和HO-1水平分别为(82.4±12.7)U/L、(99.8±16.6)U/L和(256.7±20.8)U/L,显著高于对照组【分别为(75.6±10.9)U/L、(80.6±15.4)U/L和(197.5±24.9)U/L,P<0.05】,而血清MDA水平为(5.1±0.8)μmol/L,显著低于对照组【(6.2±1.3)μmol/L,P<0.05】;观察组血清IL-6、TNF-α、IL-1β和CRP水平分别为(5.1±1.7)pg/mL、(4.4±1.7)pg/mL、(11.2±4.1)ng/mL和(3.9±2.0)mg/L,均显著低于对照组【分别为(9.7±1.1)pg/mL、(10.2±1.8)pg/mL、(25.3±4.8)ng/mL和(13.6±2.9)mg/L,P<0.05】。结论 应用注射用谷胱甘肽联合硫普罗宁治疗DILI患者可有效改善肝功能水平，可能与其抑制了机体炎症和氧化应激反应有关，值得临床进一步观察。

目的 调查西安地区成年居民的胃癌相关血清学指标包括幽门螺杆菌抗体（Hp-IgG）、胃蛋白酶原（PG）和胃泌素-17(G-17)的检测结果，分析其血清学指标特点，为胃癌早期筛查和防治提供参考资料。方法采用方便抽样方法于2022年9—12月在西安13个区县中招募当地常住居Z-IETD-FMK作用民进行检查，检查的项目及要求由研究组所在单位体检中心按常规操作进行，采集静脉血利用酶联免疫吸附（ELISA）法完成血清学Hp-IgG、PG I、PG Ⅱ水平检测，并分析胃癌相关血清学指标异常情况以及筛查阳性的人群特点。结果 共纳入1 035名西安地区成年居民，男性455名，女性580名，男女比1:1.275；其中血清Hp-IgG抗体阳性267例（25.8%）;PG异常386例（37.29%）;G-17异常405例（39.13%）。筛查阳性组为428例，占41.35%，筛查阳性组为607例，占58.65%。不同性别、年龄的体检人群筛查阳性率差异具有统计学意义（均P<0.01），男性体检人群的筛INCB28060价格查阳性率（46.81%）明显高于女性（37.07%），筛查阳性率呈现随年龄增加而明显升高（P<0.01）。同时，相比Hp-IgG抗体阴性组，Hp-IgG抗体阳性组的体检人群PG I、PGⅡ和G-17水平明显升高，PGR明显降低（P<0.01）。结论 西安地区成年居民的胃癌筛查阳性Anaerobic membrane bioreactor率与性别、年龄密切相关，而HP感染状态会影响血清PG和G-17水平，因此在胃癌相关血清学筛查中解读PG和G-17应考虑HP的影响。

目的:观察益气通络方联合达格列净片治疗气阴两虚型早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的临床疗效及安全性,探讨益气通络方联合达格列净片对气阴两虚型早期DN患者的临床疗效指标及安全性的影响。同时通过研究益气通络方联合达格列净片对气阴两虚型早期DN患者的作用通路,解释其对肾脏保护作用的潜在分子机制,为气阴两虚型早期DN的治疗提供科学的依据。方法:选取玉林市中医医院收治的早期DN患者且辨证为气阴两虚证共90例,病例进院时间为2022年03月至2022年12月,按入院先后采用随机数字表法,随机分为对照组(达格列净片组)、试验组1(益气通络方组)、试验组2(益气通络方联合达格列净片组),各30例。统计分析患者的一般临床资料,对比分析三组患者治疗效果、中医证候积分评价、治疗前和治疗第12周后糖尿病指标、肾功能指、炎症指标和氧化应激指标变化,并评价安全性。研究益气通络方联合达格列净片对气阴两虚型早期DN患者的作用通路,解释益气通络方联合达格列净片肾脏保护作用的潜在分子机制。结果:1.临床疗效:治疗后,试验2组临床总有效率为86.68%,显著优于对照组30%、试验1组63.33%(P<0.05)。2.中医证候积分变化情况:治疗前,三组患者中医症候总积分相近(P>0.05)。治疗后,三组患者中医症候总积分均低于本组治疗前(P<0.05)。治疗后三组间比较,试验2组患者中医症候总积分低于对对照组、试验1组,差异有统计学意义(P<0.05)。3.糖尿病指标变化情况:治疗前,三组患者FBG、GLU2、Hb A1c和LDL-C水平相似(P>0.05)。三组患者FBG、GLU2、Hb A1c和LDL-C水平均低于本组治疗前(P<0.05)。治疗后三组间比较,试验2组患者FBG、GLU2、Hb A1c和LDL-C显著低于对照组和试验1组,差异有统计学意义(P<0.05)。4.肾功能指标变化情况:治疗前,三组患者Cr、UA和MALB/Ucr水平相似(P>0.05)。三组患者Cr、UA和MALB/Ucr水平均低于本组治疗前(P<0.05)。治疗后三组间比较,试验2组患者Cr、UA和MALB/Ucr显著低于对照组和试验1组,差异有统计学意义(P<0.05)。5.炎症指标变化情况:治疗前,三组患者TNF-α和CRP水平相似(P>0.05)。三组患者TNF-α和CRP水平均低于本组治疗前(P<0.05)。治疗后三组间比较,试验2组患者TNF-α和CRP显著低于对照组和试验1组,差异有统计学意义(P<0.05)。6.氧化应激指标变化情况:治疗前,三组患者SOD水平相似(P>0.05)。三组患者SOD水平均低于本组治疗前(P<0.05)。治疗后三组间比较,试验2组患者SOD显著低于对照组和试验1组,差异有统计学意义(P<0.05)。7.各项机制相关指标变化情况:治疗前,三组患者各项机制指标水平相似(P>0.05)。治疗后,试验2组患者INS和HOMA-IR值显著低于对照组和试验1组(P<0.05)。试验2组患者IGF-1水平显著低于对照组和试验1组,而VEGF水平则显著高于对照组和试验1组(P<0.05)。试验2组患者PTX-3水平显著高于对照组和试验1组(P<0.05);试验2组患者BAX和BCL-2水平显著低于对照组和试验1组(P<0.05)。试验2组患者TGF-β1、p38MAPK及Caspase-3 m RNA水平显著低于对照组和试验1组(P<0.05)。8.EPZ-6438使用方法三组患者安全性情BIOCERAMIC resonance况:三组患者治疗期间,均没Alpelisib细胞培养有明显不良反应发生。结论:益气通络方联合达格列净片治疗气阴两虚型早期DN临床效果显著,可显著降低血糖水平,改善肾脏功能,其作用机制可能与维持糖脂代谢正常,抑制炎症反应、氧化应激、TGF-β1/p38MAPK信号通路等作用机制有关。

背景与目的:胆管癌(Cholangiocarcinoma,CCA)起源于胆管上皮,约占所有胃肠道肿瘤的3%,作为肝胆系统第二常见的恶性疾病,在全球近几十年内的发病率呈现持续增加态势~([1])。因其起病隐匿,侵袭性强,手术切除率低,患者总体预后较差,5年生存率仅5%-15%~([1])。ABC-02研究已经证实,对于无法行手术切除的CCA患者,吉西他滨(Gemcitabin,GEM)联合顺铂(Cisplatin,DDP)优于GEM单药,并被美国国立综合癌症网络(National Comprehensive Cancer Network,NCCN)指南列为晚期CCA的标准化疗方案~([2]),一线治疗后,积极控制症状联合FOLFOX方案~([3])也能够为晚期胆道恶性肿瘤患者提供生存改善。虽然已有证据显示,胆管癌存在不同程度的基因突变,例如IDH1突变、BRAFV600E突变、NTRK融合和/或HER2(ERBB2)扩增~([4]),但基于以上靶点药物的多项临床试验研究均未显示出优于基础化疗方案的结果。2020年4月17日,美国食品药品管理局(Food and Drug Administration,FDA)加速批准培米替尼片上市~([5]),然而发生FGFR融合/重排的患者不足CCA患者的五分之一~([6]);且由于患者总生存率尚未达到随访终点,仍缺乏亚洲人群其是中国患者相关疗效数据。近期TOPAZ-1的突破性研究~([7]),使得化疗联合免疫治疗(度伐利尤单抗,Durvalumab)的方案有望列入胆道恶性肿瘤诊疗指南的一线治疗方案,不可忽略的是,传统化疗仍然是CCA的重要治疗手段。白藜芦醇(resveratrol,trans-3,4’,5,-trihydroxystilbene,Res)最早从白木香的根中分离得到~([8]),作为一种天然存在的多酚类化合物,基于前期对白藜芦醇的实验和临床试验以及白藜芦醇的分子特性,白藜芦醇可能应用于以下治疗策略:首先,由于白藜芦醇具有抑制癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的能力,白藜芦醇可作为术前新辅助化疗药物以减小肿瘤体积;其次,白藜芦醇可以作为一种辅助化疗药物抑制癌症术后的早期侵袭和转移;第三,白藜芦醇可以作为放疗或化疗增敏剂与多种化疗药物联用可能提高其抗癌效果;第四,白藜芦醇可用于癌症高危人群的癌症预防;第五,白藜芦醇可以作为一种辐射保护剂来减少放疗引起的不良反应,包括口干症和黏膜炎~([9])。鉴于已有研究发现白藜芦醇在对抗癌症耐药性方面具有增益作用,可以增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。由于白藜芦醇的抗氧化及舒张血管等特性,能进一步缓解基础化疗带来的副作用,减轻化疗对正常细胞的杀伤作用,因此具有很大的研究前景及应用价值。综上所述,吉西他滨联合顺铂的标准化疗方案在胆管癌化学药物治疗方面依然并且在可见的未来仍将具有极其重要的地位,如何提高胆管癌患者对GP治疗的敏感性,寻找更佳的联合治疗方案具有积极意义和潜在的临床应用价值。鉴于白藜芦醇对抗肿瘤的特性,白藜芦醇联合GP的三联方案能否优于传统的化疗方案,值得进一步探索。研究方法:白藜芦醇增强胆管癌细胞对吉西他滨联合顺铂的化疗敏感性1)选取胆管癌细胞系并通过cck8实验对白藜芦醇,吉西他滨及顺铂的起效浓度进行摸索以开展后续体外实验;2)通过克隆形成、侵袭及迁移实验、流式凋亡分析等表型实验探究白藜芦醇对胆管癌细胞的增殖,凋亡能力的影响;3)通过Western blot等手段检测自噬凋亡等相关标志物的表达,ROS探针检测细胞的活性氧状态;4)建立裸鼠皮下荷瘤模型,处死后第一时间对瘤重,体积,大小等进行记录。白藜芦醇减轻吉西他滨联合顺铂化疗的毒副作用研究1)选取C57小黑鼠,2周后待瘤体长到合适大小进行分组用药(分为NC/吉西他滨+顺铂/吉西他滨+顺铂+白藜芦醇三组),1周后处死,处死后第一时间抽取老鼠鼠骨髓并进行骨髓涂片制作及染色镜检等操作;并将小鼠的脾脏进行剥离,摆放好标尺拍照。2)征集健康志愿者,抽取其外周血,提取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)后分组用药置于37℃二氧化碳孵箱培养36h,并采用ELISA法检测白介素1β,3,TNF-α的浓度。白藜芦醇协同吉西他滨联合顺铂化疗疗效作用机制研究1)将分组用药培养的胆管癌细胞系进行RNA-Seq研究以进行有效靶点CYP24A1,VDR,Rx Rα的寻找;2)通过RT-PCR,Western blot验证CYP24A1,VDR,Rx Rα在不同分组用药细胞中的表达情况;3)添加VDR抑制剂骨化二醇,通过RT-q PCR,Western blot验证CYP24A1,VDR,Rx Rα在不同分组用药细胞中的表达情况;4)将前述裸鼠皮下荷瘤模型鼠瘤进行免疫组化染色以验证CYP24A1Torin 1抑制剂,VDR,Rx Rα的表达情况;5)收集不同用药分组细胞的上清,采用试剂盒法对上清进行外泌体抽提并做好标记;6)对VDR阳性的外泌体进行分选并富集,后添加进细胞培养基中并对细胞系进行培养,通过EDU及流式凋亡分析等实验进行增殖及凋亡能力检测;7)通过生信网站(GEPIA寻找更多2等)预测VDR对CCA患者预后的影响;8)通过对人ICC芯片就VDR,Rx Rα进行免疫组化染色并与患者临床信息相匹配,探究VDR表达与预后的关系。研究结果:1)CCK8实验表明胆管癌细胞系RBE及HCCC-9810的最适起效浓度为白藜芦醇1μM,吉西他滨联合顺铂为10μM;2)克隆形成、EDU、流式凋亡分析均表明,相较于吉西他滨+顺铂组,白藜芦醇的加入增强了肿瘤细胞的杀伤作用,进而导致增殖能力减弱及凋亡(早凋+晚凋)比例增加;3)Western blot等实验表明,白藜芦醇能够通过进一步增强凋亡及自噬相关标记物的表达来促进肿瘤细胞的死亡;4)裸鼠成瘤实验表明,相较于NC组小鼠,吉西他滨联合顺铂治疗组的小鼠的皮下荷瘤较小,白藜芦醇联合治疗组小鼠的皮下荷瘤最小,且在瘤重方面也展现出同样的趋势;5)小鼠骨髓涂片显示,相较于NC组小鼠吉西他滨联合顺铂用药组小鼠的骨髓抑制作用明显,白藜芦醇联合治疗组小鼠的骨髓抑制效应较吉西他滨联合顺铂用药组小鼠得到缓减;6)健康志愿者PBMC用药培养后的细胞上清细胞因子检测显示,白介素1β,3,TNF-α等细胞因子的浓度在NC/吉西他滨+顺铂/吉西他滨+顺铂+白藜芦醇三组中呈现递进式增加;7)RNA-Seq结果显示吉西他滨联合顺铂处理后CYP24A1的表达量显著下降,白藜芦醇的加入能够使得这一趋势更加明显,此种趋势在湿实验中得到证实,且VDR,Rx Rα的表达趋势在各组间与CYP24A1相反;8)VDR抑制剂骨化二醇的加入能够逆转结果7)的趋势,VDR抑制剂的加入使得白藜芦醇增强吉西他滨联合顺铂治疗的敏感性降低。9)裸鼠皮下荷瘤模型鼠瘤免疫组化结果显示CYP24A1,VDR,Rx Fluorescence biomodulationRα的表达与前述湿实验结果展现出同等趋势;10)外泌体研究显示,VDR~+外泌体治疗能够明显抑制癌细胞的增殖同时能够促进癌细胞的凋亡,因此VDR~+外泌体能够增强吉西他滨联合顺铂治疗的药物敏感性;11)生信网站(GEPIA2等)预测结果显示,VDR的表达与CCA患者的预后呈现正相关,且根据CCA组织芯片VDR结果所建立的预后关系展示出了与生信预测相一致的结果。实验结论:我们的研究发现,白藜芦醇的加入能够增强吉西他滨联合顺铂治疗胆管癌细胞的药物敏感性,同时,白藜芦醇能够减轻吉西他滨联合顺铂治疗的骨髓毒性。白藜芦醇通过抑制CYP24A1的表达增强VDR活性以提高CCA对药物的敏感性,且VDR~+外泌体能够展现出同样的抗癌增敏效果,VDR是与CCA化疗敏感性相关的关键效应分子,增强VDR的表达能够抑制CCA细胞的增殖并促进其凋亡。