苦参碱对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡及Hedgehog信号通路相关蛋白表达的影响

目的:本研究旨在探讨苦参碱(Matrine,Ma)对结肠癌(colorectal cancer,CRC)SW480细胞增殖、凋亡及Hedgehog信号通路相关蛋白表达的影响。方法:(1)体外培养结肠癌SArabidopsis immunityW480细胞系;(2)不加或加入不同浓度的Ma(0mg/m L、0.25mg/m L、0.5mg/m L、0.75mg/m L、1mg/m L、1.25mg/m L、1.5mg/m L)对结肠癌SW480细胞系进行干预以进行分组实验;(3)CCK8法检测Ma对结肠癌SW480细胞增殖能力的影响,筛选适宜的Ma浓度用于后续实验;将SW480细胞分为空白组(0mg/m L)、低剂量组Ma(0.5mg/m L)、中剂量Ma组(0.75mg/m L)、高剂量组Ma(1mg/m L);(4)使用Hoechest 33258染色法评价各组细胞的凋亡情况;(5)通过Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Hedgehog信号通路相关蛋白及靶基因SHH、SMO、GLI1、c-Myc的表达水平;(6)统计处理:用SPSS 26.0和Graph Pad Prim8软件对所得数据进行统计分析。所有数据均来自3个独立实验。计量资料数据用均数±标准差((?)±s)表示,组间差异采用单因素方差分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:(1)CCK8法结果显示,苦参碱可显著抑制SW480细胞增殖活力,且呈现时间和药物浓度依赖性(P<0.05),通过预实验选择Ma实验浓度为0mg/m L、0.5mg/m L、0.75mLY294002试剂g/m L、1mg/m L用于正式研究;(2)Hoechest 33258染色法结果显示,随药物浓度增加,出现致密浓染的细胞核增加,表明凋亡数量增加;(3)Western blot结果显示,在不同浓度苦参碱处理SW480细胞48h后,与空白组相比,Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平显著降低,Bax/Bcl-2比值升高,差异具有统计学意义(P<0寻找更多.05);(4)Western blot结果显示,不同浓度苦参碱处理SW480细胞48h后,与空白组相比,HH信号通路关键因子及靶基因SHH、SMO、GLI 1、c-Myc的蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:苦参碱抑制结肠癌细胞生长的分子机制可能是苦参碱通过下调Hedgehog信号通路相关蛋白SHH、SMO、GLI1、c-Myc的表达,同时调节HH信号通路下游凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达,从而抑制CRC增殖和促进其凋亡。