PRDX6缓解DEHP诱导林麝睾丸管周肌样细胞氧化应激及凋亡的研究

圈养林麝由于必要微量元素和维生素的摄取不足可能引起林麝异食症。一些异食症的林麝啃食圈舍中的异物,尤其是一些塑料制品,可能导致体内塑化剂沉积。邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)是一种广泛存在塑料制品中的内分泌干扰物,会造成细胞应激损伤,而过氧化物还原酶6(PRDX6)是一种细胞抗氧化因子,能够抵抗氧化应激造成的细胞损伤。本研究以林麝睾丸管周肌样细胞(testicular peritubular cells,TPCs)为研究对象,探究DEHP暴露对林麝TPCs氧化应激及凋亡的影响;分析了过表达PRDX6缓解DEHP诱导林麝TPCs凋亡中的作用。主要获得以下研究结果:1、DEHP诱导林麝TPCs的氧化应激及凋亡首先体外分离培养林麝TPCs。通过不同浓度(0μM,5μM,50μM,500μM,1000μM)DEHP处理林麝TPCs 24小时,CCK-8检测结果表明,500μM DEHP显著抑制细胞活力,但无明显细胞毒性。进一步分析500μM DEHP处理24小时的林麝TPCs,细胞内ROS水平和MDA含量显著增加,且GSH-Px活性及SOD活性显著降低;RT-q PCR检测显示下调PRDX1、PRDX4、PRDX5 m RNA表达水平,并且显著下调PRDX6的m RNA表达;Western blot检测结果表明,500μM的DEHP显著降低了PRDX6和BCL-2蛋白表达,但显著上调BAX、Cleaved-Caspase3和Cytochrome C蛋白表达;流式细胞术检测Annexin V-FITC/PI染色细胞显示,500μM DEHP显著诱导林麝TPCs凋亡。综上所述,500μM DEHP显PR-171著诱导林麝TPCs氧化应激及凋亡。2、PRDX6缓解DEHP诱导林麝TPCs氧化应激及凋亡生信分析显示,林麝PRDX6与绵羊、山羊、牛之间亲缘性最高,达到100%;PRDX6主要定位于林麝TPCs的细胞质。500μM DEHP处理过表达PRDX6林麝TPCs 24小时后,与500μM DEHP处理未连接PRDX6目的片段林麝TPCs 24小时后相比,显著降低细胞的ROS水平及MDA含量,显著提高SOD活性和GSH-Px活性;显著抑制BAX,Cleaved-Caspase3和Cytochrome C的表达,促进BCL-2的表达,表明过表达PRDX6显著缓解DEHP诱导林麝TPCs凋亡。综上所述,500μM DEHP能够显著升高林麝TPCs氧化应激水deformed wing virus平并诱导细胞凋亡;过表达PRDX6能够显著缓解DEHP诱导林麝TPCs氧化应激水平并抑制细胞凋亡。以上此网站结果为进一步理解林麝由于塑化剂导致的睾丸损伤提供依据,为圈养林麝饲养管理提供理论基础。