目的 基于AKT/mTOR及Beclin-1自噬信号通路探讨黄连解毒汤（Huanglian Jiedu Decoction，HLJDD）对自发性高血压大鼠（Spontaneous hypertension rat，SHR）主动脉损伤改善作用的研究。方法 将50只SHR随机分为模型组、HLJDD低剂量组（75 mselleck HPLCg·kg~(-1)·d~(-1)）、中剂量组（150 mg·kg~(-1)·d~(-1)）、高剂量组（300 mg·kg~(-1)·d~(-1)）以及卡托普利组（0.175 mg·kg~milk microbiome(-1)·d~(-1)）5个组，另设WKY大鼠为空白对照组，每组各10只。模型组和空白对照组灌胃给予等体积的生理盐水，每天灌胃给药1次，5天1个疗程，共8个疗程。实验末，取主动脉HE染色检测组织病理学变化，TUNEL染色检测主动脉细胞凋亡率，采用qRT-PCR和Western blot检测AKT/mTOR及Beclin-1自噬通路相关基因和蛋白表达水平变化。结果 与空白对照组相比，模型组主动脉内膜脱落严重，中膜弹性纤维排列发生紊乱，细胞凋亡率显著升高，HLJDD中、高剂量组和卡托普利组能够有效改善组织病理现象，显著降低细胞凋亡率。与空白对照组相比，模型组中AKT、mTOR、BecBAY 73-4506作用lin-1基因表达水平以及mTOR、AKT、LC3-II及Beclin-1的蛋白表达水平显著升高，经HLJDD干预后相关基因和蛋白表达水平均有不同程度的降低。结论 HLJDD能够有效改善SHR主动脉组织损伤，其机制可能与抑制AKT/mTOR及Beclin-1自噬相关信号通路有关。
Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响
目的:探讨Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响。方法:根据CCK-8实验结果选择CoCl_2和MK-2206的浓度，最后分成空白组、MK-2206组、CoCl_2组、MK-2206+CoCl_2组；Transwell小室实验检测四组细胞的迁移和侵袭能力；RT-PCR法检测各细胞组中Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达水平；Western blot技术检测各细胞组中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、HIF-1α蛋白表达的差异性情况。结果:CoCl_2诱导的缺氧环境可以促进SW480细胞的Proteomic Tools侵袭、迁移(P<0.05),同时能够促进HIF-1α的GDC-0068作用mRNA和蛋白表达(P<0.05),但是低浓度范围内的CoCl_2对SW480细胞增殖活性无明显影响(P>0.05);MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境中抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭、迁移能力(P<0.05);MK-2206能在体外的常氧环境下抑制SW480细胞的Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达(P<0.05),缺氧环境无明显作用；同时MK-2206能够在常氧和缺氧环境中显著降低p-AktBMN 673配制、p-mTOR、HIF-1α的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:Akt抑制剂MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境下抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭能力，但缺氧环境可能会弱化MK-2206对SW480细胞迁移的抑制作用。
ATP5A1在结肠癌中的表达及临床意义
目的 分析ATP5A1在结肠癌中的表达情况及其意义，研究ATP5A1表达变化导致结肠癌细胞分子及功能改变的机制，为针对结肠癌的精准治疗提供依据。方法 采用免疫组化结合生存期组织芯片研究ATP5A1severe acute respiratory infection在结肠癌及癌旁组织的表达变化及其与临床病理特征的关系，结合TCGA数据库分析ATP5A1表达改变对结肠癌生存率的影响。采用高分辨质谱分析ATP5A1表达改变对结肠癌总蛋白表达的影响。采用CCK-8法分析ATP5A1表达改变对氧化磷酸化通路Wnt-C59化学结构不同抑制剂的影响。结果 ATP5A1在结肠癌组织中的Gefitinib-based PROTAC 3临床试验表达水平高于对应癌旁组织，而患者的ATP5A1高表达预示着较长时间的生存期。蛋白质组学分析发现，随着ATP5A1表达增加，结肠癌细胞各呼吸链复合物都有不同程度的表达上调，尤以复合物II中的SDHB蛋白表达增高最为显著。TTFA和oligomycin A在低表达ATP5A1和SDHB的细胞系中表现出更明显的抑制细胞增殖的能力。结论 氧化磷酸化呼吸链的不同组分间的协同变化反映了结肠癌存在线粒体重塑现象，研究该现象有助于针对结肠癌采用更精准的治疗策略。
加味升降散对糖尿病肾病大鼠TXNIP/NLRP3通路及足细胞焦亡的影响
目的:探讨加味升降散对糖尿病肾病(Diabetic kidney disease,DKD)大鼠的干预作用及对硫氧还蛋白结合蛋白(Thi-oredoxin interacting protein,TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide oligomerization domain-(NOD-) like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)通路及细胞焦亡的影响。方法:随机将造模成功SD大鼠分为模型对照组、阳性药厄贝沙坦0.014 g/kg组、加味升降散4.37、8.73、17.46 g/kg组,另设正常对照组,各组灌胃相应剂量药物或蒸馏水,连续4 w。给药结束后检测大鼠24 h尿蛋白(UTP)含量,血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18含量Roxadustat;采用苏木素-伊红(HE)染色和透射电镜(TEM)观察大鼠肾脏病理学变化;TUNEL染色检测肾组织细胞DNA损伤情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和免疫组化(IHC)分别检测大鼠肾组织中Podocalyxin、Nephrin、Podocin、Synaptopodin、Gasdermin D(Gsdmd) mRNA及蛋白表达;蛋白免疫印迹法(West-ernblot)检测TXNIP/NLRP3信号通路关键蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠肾脏足细胞足突广泛融合,肾组织细胞DMED-EL SYNCHRONYNA损伤明显增加,UTP含量显著升高,血清IL-1β、IL-18含量显著升高,肾组织中Podocalyxin、Nephrin、Podocin、Synaptopod-in mRNA和蛋白表达明显下调,Gsdmd mR NA和蛋白表达明显上调、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、TXNIP和NLRP3蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,加味升降散4.37、8.73、17.46 g/kg组及厄贝沙坦0.014 g/kg组大鼠肾脏足细胞足突融合均有不同程度改善,肾组织细胞DNA损伤均有不同程度减少,UTP含量显著降低,血清中IL-1β、IL-18含量显著降低,肾组织中Podocalyxin、Nephrin、Podocin、Synaptopodin mRNA表达显著上调,Podocalyxin、Synaptopodin蛋白表达显著上调,肾组织中Gsdmd mRNA和蛋白表达显著下调,Caspase-1、TXNIP及NLRP3蛋白表达显著下调(P<0.01);加味升降散8.73、17.46 g/kg组及厄贝沙坦0.014 g/kg组肾组织中Nephrin、Podocin蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论:加味升降散可通过下调TX-NIP/NLRP3信号通此网站路,减少肾组织足细胞焦亡,减轻DKD大鼠肾损伤。
血浆D-二聚体、HBP表达与高血压脑出血术后颅内感染及预后的关系
目的 探讨血浆D-二聚体(DD)、肝素结合蛋白(HBP)表达与高血压脑出血(HICH)术后颅内感染physical medicine及预后的关系。方法 选取2016年5月—2020年5月于我院治疗的HICH术后颅内感染病人(感染组)82例与未发生颅内感染病人(非感染组)120例作为研究对象。根据感染组病人预后是否发生死亡分为不良预后组(20例)与非不良预后组(62例)。采用全自动血凝分析仪检测血浆DD水平，采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆HBP水平；采用Logistic回归分析更多影响HICH术后颅内感染病人不良预后的因素；采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆DD、HBP对HICH颅内感染病人不良预后的预测价值。结果 感染组血浆DD、HBP水平均明显高于非感染组(P<0.05);不良预后组血浆DD、HBP水平均明显高于非不良预后组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示，血浆DD、HBP高表达均是PUN30119纯度影响HICH术后颅内感染病人不良预后的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示，血浆DD评估HICH术后颅内感染病人不良预后的曲线下面积为0.660[95%CI(0.525,0.796),P<0.001],截断值为93.146 ng/mL,灵敏度为60.0%,特异度为67.7%;血浆HBP水平预测HICH术后颅内感染病人不良预后的曲线下面积为0.775[95%CI(0.662,0.888),P<0.001],截断值为15.242 ng/mL,灵敏度为85.0%,特异度为61.3%;血浆DD、HBP联合评估HICH术后颅内感染病人不良预后的曲线下面积为0.790[95%CI(0.682,0.897),P<0.001],灵敏度为65.0%,特异度为82.3%。结论 HICH术后颅内感染病人血浆DD、HBP水平升高，且两者均对HICH术后颅内感染病人的不良预后有一定预测价值，且二者联合检测预测价值更高。
清热消癥方对糖尿病肾病大鼠肾损伤的保护作用研究
背景清热消癥方对糖尿病肾病（DKD）肾损伤有保护作用，然而机制尚不十分明确。目的 探讨清热消癥方在单侧肾切除联合链脲佐菌素（STZ）诱导的1型DKD大鼠肾损伤中的保护作用及机制。方法 2019年7—11月，将30只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（n=10）和模型组（n=20）。假手术组大鼠于右肾体表解剖位置做1 cm的横行切口并缝合；模型组大鼠予右侧肾切除。1周后，大鼠伤口愈合后，假手术组大鼠给予等量柠檬酸缓冲液腹腔注射；模型组大鼠予单次腹腔注射链脲佐菌素（55 mg/kg）的方法构建DKD大鼠模型。成模后将模型组大鼠随机分为DKD亚组（n=10）和清热消癥方亚组（QRXZF亚组，n=10）。NC组和DKD亚组大鼠灌服等量（1ml/100 g）0.9%氯化钠溶液，1次/d。QRXZF亚组大鼠以7.92g·kg~(-1)·d~(-1)的剂量予中药灌胃。干预期间每周大鼠称重和检测血糖水平。干预16周后留取大鼠24 h尿、血清、肾组织标本，并称取肾体质量，计算肾重指数。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠24 h尿微量白蛋白（24 hUpro）水平，全自动生化分析仪检测大鼠血肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）和血清白PF-6463922纯度蛋白（ALB）。将肾脏组织进行苏木素-伊红（HE）染色、糖原（PAS）染色、Masson染色，观察大鼠肾脏组织损伤程度。免疫组化法（IHC）检测各组大鼠肾组织Caspase-3和p16表达情况。原位末端脱氧核苷酸转移酶标记技术（TUNEL）法检测肾小管细胞凋亡率。结果 DKD亚组、QRXZF亚组体质量均低于NC组、肾重指数均高于NC组（P<0.01）;QRXZF亚组体质量高于DKD亚组、肾重指数低于DKD亚组（P<0.01）。DKD亚组Scr、BUN、24 hUpro水平均高于NC组，ALB水平低于NC组（P<0.01）;QRXZF亚组BUN、24 hUpro水平均高于NC组，ALB水平低于NC组（P<0.01）;QRXZF亚组Scr、BUN、24 hUpro水平均低于DKbiocultural diversityD亚组，ALB水平高于DKD亚组（P<0.01）。与NC组相比，DKD亚组和QRXZF亚组大鼠肾脏均出现明显病理损伤，肾小球肥大和间质小管纤维化，但QRXZF亚组病变程度较DKD亚组明显减轻。免疫组化结果表明，DKD亚组、QRXZF亚组肾组织p16、Caspase-3表达水平均高于NC组，QRXZF亚组肾组织p16、Caspase-3表达水平均低于DKD亚组（AZD2281核磁P<0.01）。DKD亚组、QRXZF亚组大鼠肾小管细胞凋亡率高于NC组，QRXZF亚组肾小管细胞凋亡率低于DKD亚组（P<0.01）。结论 清热消癥方可有效改善DKD大鼠的肾功能，抑制肾脏病理损伤和纤维化，抑制DKD大鼠肾组织中Caspase-3和p16的表达，降低肾小管细胞凋亡率。提示清热消癥方发挥肾保护作用的机制可能与抑制肾脏细胞衰老和凋亡有关。