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目的 探讨2型糖尿病伴有桥本甲状腺炎患者经左甲状腺素PF-6463922钠片+胰岛素+口服降糖药完成联合治疗后获得临床效果。方法 选取2019年1月—2022年1月甘肃省甘南藏族自治州人民医院收治的2型糖尿病伴有桥本甲状腺炎的100例患者为研究对象；依据治疗方法的不同分为两组，各50例。参照组实施左甲状腺素钠片+胰岛素治疗，研究组实施左甲状腺素钠片+胰岛素+口服降糖药治疗；比较两组患者的药物治疗效果、空腹血糖水平、糖化血红蛋白水平、餐后2 h血糖水平、血糖曲线下面积数、修整胰岛β细胞分泌指数以及不良反应情况。结果 研究组治疗总有效率（96.00%）高于参照组的76.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前，两组空腹血糖水平、糖化血红蛋白水平、餐后2 h血糖水平、血糖曲线下面积数以及修medical group chat整胰岛β细胞分泌指数比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，研究组空腹血糖水平、糖化血红蛋白水平、餐后2 h血糖水平、血糖曲线下面积数较参照组更低，差异有统计学意义（P<0.05）；研究组修整胰岛β细胞分泌指数较参照组更高，差异有统计学意义（P<0.05）；两组不良反应总发生率比较，差异无统Roxadustat计学意义（P>0.05）。结论 左甲状腺素钠片+胰岛素+口服降糖药治疗较左甲状腺素钠片+胰岛素治疗效果更确切，并且安全性较高，可将2型糖尿病伴有桥本甲状腺炎患者胰岛功能水平、血糖水平更好改善。

目的:研究华泽兰根茎石油醚部位的五种单体化合物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞体外抗炎活性。方法:MTT法检测各化合物对RAW264.7细胞增殖的影响，ELISA、Western Blot分别检测RAW264.7细胞上清液中NO、TNF-α含量和细胞中NLRP3、JAK/STAT抑制剂IL-1β、IL-18蛋白表达。结果:MTT分析显示泽兰素、化合物A、B、C和D五种单体分别在14.4μmol/L～115.6μmol/L、3.125μmol/L～25μmol/L、3.125μmol/L～25μmol/L、3.125μmol/L～25μmol/L、3.125μmol/L～5μmol/L时对RAW264.7细胞增殖没有明显抑制作用；RAW264.7细胞在用LPS刺激后，细胞上清液中NO、TNF-α含量和细胞中NLRP3、IL-18、IL-1β蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01);用泽兰素、化合物A、B、C和D干预后细胞上清液中NO、TNF-α含量和细胞中NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:华泽兰根茎中石油醚部位化学成分泽兰素、化合物A、B、C和D具有较好的抗炎作用，其作用机制与抑inhaled nanomedicines制NLRP3激活及炎症因子生成有关。其MK-2206中以泽兰素的作用效果最为显著，依次是化合物A、C、D和B。

抗菌肽是各物种用来抵御细菌和外来病原体的内源性分子,是先天免疫系统的一部分。有较多的研究发现部分抗菌肽具有抗肿瘤活性,同时副作用较少。其中有研究基于牛乳铁蛋白,开发出一系列阳离子肽,主要由九种氨基酸组成,发现该系列多肽对肿瘤细胞具有很强的破坏作用,而对正常细胞的毒性较低,表现出较高的选择性。其中最有效的LTX-315在治疗实体瘤方面有一定疗效,但给药方式仅限于瘤内给药,应用受到了明显的限制。因此本研究基于阳离子九肽(KKWW)_2K-NH_2(AMP),针对肿瘤微环境的高活性氧(ROS)和肿瘤细胞表面过表达的唾液酸基PF-07321332供应商团,设计并构建出多功能抗肿瘤多肽,通过分子动力学模拟技术、体外细胞实验及荷瘤小鼠实验等验证其肿瘤靶向能力和抗肿瘤活性。本文主要分为如下四个部分:1.综述本章首先对抗菌肽的研究进行了总结,基于抗菌肽的构效关系分析了其抗肿瘤的作用机制,以及抗菌肽对肿瘤细胞的抗增殖、促凋亡和抗转移应用;其次围绕靶向递送的研究,分析了靶向治疗的生物屏障,并且对小分子药物、多肽、抗体和基于细胞的靶向策略进行了综述;最后介绍分子动力学模拟研究现状。这几方面的综述从而为本课题提供了理论基础和技术支撑。2.多功能抗肿瘤多肽的设计及构建本章旨在设计并构建多功能抗肿瘤多肽,在能够靶向肿瘤部位的同时发挥其抗肿瘤活性。有研究表明基于牛乳铁蛋白的阳离子抗菌肽,多肽序列中主要含有五个阳离子残基、2-3个色氨酸残基和1-2个侧链空间位阻偏大的非天然残基,这些阳离子抗菌肽对多种癌细胞具有明显的疗效,并且对正常细胞毒性较低。虽然在治疗实体瘤方面显示出临床前景,但仅限于瘤内给药,应用受到一定的限制。因此,本课题基于牛乳铁蛋白,提取出阳离子九肽序列(KKWW)_2K-NH_2(AMP)为模板,引入半胱氨酸残基(C)改造成适合修饰的多肽(KKWC)_2K-NH_2(Cys-AMP);随后在Cys-AMP的半胱氨酸侧链巯基上修饰4-乙烯基苯基硼酸,从而构建抗肿瘤多肽(PBN-AMP),具有肿瘤微环境刺激响应的能力以及与肿瘤细胞表面高表达的唾液酸特异性结合的能力。通过分子动力学模拟技术,研究设计的多肽在肿瘤微环境条件下与肿瘤细胞膜的结合情况。分别模拟了AMP、Cys-AMP和PBN-AMP的动力学行为,实DNA biosensor验表明AMP与肿瘤细胞膜有一定的亲和力,但是结合的稳定性偏差,大约有10 ns的时间会游离出细胞膜,效果不理想。Cys-AMP在动力学模拟中发现与肿瘤细胞膜具有一定的结合能力,相比AMP要稳定一些。与前面两条多肽相比,在引入4-乙烯基苯基硼酸后,多肽PBN-AMP能够在较短时间内结合到肿瘤细胞膜上,并具有较高的稳定性,表明PBN-AMP与肿瘤细胞膜的亲和力更强,具有潜在更强的对肿瘤细胞的杀伤能力。采用多肽固相合成方法分别合成了多肽AMP和Cys-AMP。随后利用巯基-烯(Thiol-Ene)点击化学反应,将化合物4-乙烯基苯基硼酸修饰到多肽Cys-AMP上,合成多肽PBN-AMP;通过反相高效液相色谱(HPLC)和LC-MS对合成产物进行鉴定。3.多功能抗肿瘤多肽的体外活性研究本章通过细胞摄入实验及细胞毒性实验考察PBN-AMP的抗肿瘤活性,并且验证分子动力学模拟的结果。首先研究肿瘤细胞对多肽的摄取情况。利用FITC分别标记多肽AMP和PBN-AMP,制备得到多肽AMP-FITC和PBN-AMP-FITC,然后通过荧光显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7对两种多肽的摄取。实验结果表明,相比AMP,MCF-7细胞对PBN-AMP摄取量更多。随后考察三条多肽AMP、Cys-AMP和PBN-AMP的细胞毒性作用。分别培养人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及鼠乳腺癌细胞4T1,用于多肽的细胞毒性考察。实验结果表明三条多肽在多种细胞系上均表现出不同程度的杀伤作用。三条多肽对MCF-7细胞的毒性作用最明显,其中PBN-AMP效果最好(IC_(50):38.46μM),Cys-AMP次之(IC_(50):selleck Laduviglusib39.85μM),AMP最差(IC_(50):110μM)。细胞毒性实验的数据能够验证分子动力学模拟的结果,表明使用分子动力学模拟技术验证多肽的肿瘤靶向性是可行的,具有较强的与肿瘤细胞膜结合能力的PBN-AMP表现出良好的抗肿瘤活性。4.多功能抗肿瘤多肽的体内活性研究通过构建4T1乳腺癌荷瘤小鼠模型,进一步考察PBN-AMP的肿瘤靶向能力及抗肿瘤活性。小动物活体成像结果表明,和AMP相比,PBN-AMP能够更好地靶向聚集到肿瘤部位。药效学实验结果表明,PBN-AMP高剂量组(20 mg/kg)的小鼠肿瘤体重显著小于生理盐水组,其抑瘤率为59.36%。并且比较不同剂量组的抑瘤率能够发现:PBN-AMP的抗肿瘤作用具有剂量依赖性;并与多肽AMP相比,PBN-AMP具有更强的抗肿瘤活性。荷瘤小鼠实验的结果证明构建的PBN-AMP能够赋予多肽的肿瘤靶向性,并增强其抗肿瘤活性。综上所述,本课题设计并构建的多功能抗肿瘤多肽PBN-AMP,通过响应肿瘤微环境的刺激条件,表现出良好的肿瘤靶向性和抗肿瘤活性,从而实现了靶向肽和治疗肽的融合,具有潜在的应用发展前景。并且本课题中使用分子动力学技术也为多肽的设计提供了一种可靠的验证手段,从而高效、低耗地优化生物活性大分子的设计。

目的 探讨CTRP9对远端缺血预处理心肌梗死模型大鼠心肌缺血再灌注致脑损伤的保护作用。方法 选取40只雄性SD大鼠，随机分为4组：假手术组（NS组）、心肌缺血再灌注组（NIR组）、缺血预处理组（NIPost组）及缺血预处理+CTRP9抑制剂组（NIPostI组），每组10只。采用苏木精-伊红染色观察大鼠脑组织病理学变化，免疫组织化学法检测大鼠脑组织凋亡因子、炎症因子的表达，TUNEL法检测大鼠脑组织细胞凋genetic constructs亡，Western blotting检测大鼠心肌组织p-AMPK/t-AMPK、LC3Ⅰ/Ⅱ及P62蛋白的表达。结果 (1)HE染色结果显示，NSJNJ-42756493组皮层的神经元胞浆十分丰富，核呈圆形，碱染后呈蓝色，分布均匀且排列整齐；NIR组神经元结构受损c-Met抑制剂，分布不均匀，胞浆出现空泡，胞核固缩，碱染后出现了淡红色；NIPost组细胞结构大多恢复正常，大部分神经元包膜完整，胞核清晰可见；NIPostI组经CTRP9抑制剂干预后，预处理的保护效应消失。(2)NIR组、NIPost组及NIPostI组脑组织Bax、IL-6、IL-8表达水平高于NS组（P <0.05）,Bcl-2、IL-10表达水平低于NS组（P <0.05）;NIPost组较NIR组Bax、IL-6、IL-8表达水平降低（P <0.05）,Bcl-2、IL-10表达水平升高（P <0.05）;NIPostI组较NIPost组Bax IL-6、IL-8表达水平升高（P <0.05）,Bcl-2、IL-10表达水平降低（P <0.05）。(3)NIR组、NIPost组和NIPostI组脑组织凋亡细胞多于NS组（P <0.05）;NIPost组和NIPostI组较NIR组凋亡细胞减少（P <0.05）。NIPost组和NIPostI组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。(4)NIR组、NIPost组及NIPostI组心肌组织p-AMPK/t-AMPK蛋白相对表达量低于NS组（P <0.05）,LC3Ⅰ/Ⅱ和P62蛋白相对表达量高于NS组（P <0.05）;NIPost组较NIR组p-AMPK/t-AMPK蛋白相对表达量升高（P <0.05）,LC3Ⅰ/Ⅱ和P62蛋白相对表达量降低（P <0.05）;NIPostI组较NIPost组p-AMPK/t-AMPK蛋白相对表达量降低（P <0.05）,LC3Ⅰ/Ⅱ和P62蛋白相对表达量升高（P <0.05）。结论 远端缺血预处理可缓解大鼠心肌缺血再灌注所致脑损伤。CTRP9可通过激活AMPK信号通路，参与远端缺血预处理对心肌缺血再灌注所致脑损伤的保护过程。CTRP9水平升高有益于防治心肌梗死。

目的 探讨SIRT4调控MAPK信号通路和脂代谢途径对胰腺癌细胞增殖和侵袭及裸鼠Erastin移植瘤生长的影响。方法收集2021年6月1日—2022年7月28日于广西医科大学第一附属医院肝胆外科经手术治疗的5例胰腺导管腺癌患者的癌组织和癌旁组织样本，选取人正常胰腺细胞株（HPDE6-C7）及胰腺癌细胞系（CFPAC-1、PANC-1、BXPC-3、ASPC-1），采用RT-qPCR和Western blot检测SIRT4在胰腺癌组织和细胞中的表达水平。通过质粒转染法构建过表达SIRT4的BXPC-3和PANC-1细胞株，采用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力；Transwell实验检测细胞侵袭能力。使用慢病毒载体构建稳定过表达SIRT4的BXPC-3细胞株并接种至裸鼠腋下，采用裸鼠成瘤实验观察SIRT4对体内肿瘤生长的影响；免疫组织化学实验检测裸鼠移植瘤中Ki67的表达水平。通过mRNA-seq检测分析SIRTNovel coronavirus-infected pneumonia4下游分子的表达情况，用Western blot检测MAPK信号通路及脂代谢相关蛋白的表达水平。结果 RT-qPCR和Western blot检测结果显示，相对于癌旁组织，胰腺癌组织中SIRT4 mRNA和蛋白表达水平显著降低（均P<0.05）。CCK-8实验、平板克隆形成实验和Transwall侵袭实验结果显示，相对于NC组，SIRT4-OE组的BXPC-3和PANC-1细胞增殖和侵袭能力均降低（均P<0.05）；裸鼠成瘤实验发现SIRT4过表达后移植瘤体积和重量明显减少（均P<0.05）；免疫组织化学实验结果显示，与NC组相比，SIRT4-OE组移植瘤中的Ki67阳性细胞个数明显减少（P=0.002）;mRNA-seq及富集分析结果显示，SIRT4下游差异表达基因显著富集于MAPK信号通路。进一步Western blot检测结果显示，过表达Baricitinib分子量SIRT4后，MAPK信号通路相关蛋白p-ERK蛋白表达水平降低，而JNK、p-JNK、p38和p-p38的蛋白表达水平变化不明显；脂质生成关键因子ACC、FASN和SREBP1C的蛋白表达水平降低，而脂代谢调节因子PPARα和CPT1a的蛋白表达水平升高。结论 SIRT4可能通过抑制MAPK信号通路和脂质代谢途径抑制胰腺癌增殖和侵袭及裸鼠移植瘤生长。

目的 探究三维斑点追踪技术（3D-STI）对乳腺癌术后化疗左室心肌功能损害的诊断价值。方法 65例乳腺癌患者（观察组）及20例健康志愿者（对照组）作常规二维超声、3D-STI检查，分析观察组化疗前后左室舒张末期容积（LVEDV）、左室收缩期末期容积（LVESV）、左室整体面积应变（GAS）、整体圆周应变（GCS）、整体径向应变（GRS）、整体纵向应变Laboratory Supplies and Consumables（GLS），采用受试者工作特征（ROC）曲线获取LV获悉更多EDV、LVESV、GAS、GCS、GRS、GLS对左室心肌功能损害的评估效能。结果 观察组化疗中期GAS、GLS水平低于化疗前（P<0.05）。化疗中期，当GAS、GLS截断值分别为31.0%、18.0%时，其诊断左室心肌功能损害ROC曲线的AUC分别为0.970、0.865，敏感度分别为93.9%、89.2%，特异度分别为95.0%、75.0%。结论 3D-STI可应用于乳腺癌术后化疗患者左室心肌功能Apoptosis抑制剂损害检测，GAS、GLS对乳腺癌患者化疗中期药物心肌毒性监测有重要意义。

目的 探讨麝香保心丸联合西药治疗老年冠心病心绞痛的效果及对或者血管内皮功能和血脂代谢的影响。方法 将2020年1月至2022年3月郑州奥美康复医院收治的114例老年冠心病心绞痛患者随机分为Rapamycin分子量观察组和对照组，各57例。对照组接受常规西药口服治疗，观察组加用麝香保心丸，两组均连续治疗8周。比较两组患HIV – human immunodeficiency virus者心电图疗效、血管内皮功能指标、血脂指标以及不良反应发生情况。结果 治疗后两组患者经心电图检查，观察组改善总有效率高于对照组(P<0.05)。两组患者治疗后血清一氧化氮(NO)水平增加，且观察组高于对照组；内皮素-1(ET-1GSK126浓度)和血栓调节蛋白(TM)水平降低，且观察组低于对照组(P<0.05)。两组患者治疗后总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C)降低，且观察组低于对照组；高密度脂蛋白(HDL-C)升高，且观察组高于对照组(P<0.05)。观察组患者在服药期间的不良反应发生率和对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 麝香保心丸联合西药治疗可改善老年冠心病心绞痛患者血管内皮功能和血脂代谢相关指标，有效提高心功能，且安全性较高。

背景胃癌是胃肠道最常见的恶性肿瘤之一Y-27632细胞培养,大量证据表明长链非编码RNA(Long non-coding RNAs,lncinappropriate antibiotic therapyRNAs)在胃癌(Gastric cancer,GC)中具有重要的调控作用。1 号染色体上的局部扩增 lncRNA(Focally amplified lncRNA on chromosome 1,FALEC)是一种新的lncRNA,已在甲状腺癌,大肠癌和子宫内膜癌等中反复被报道具有致癌效应,而其在胃癌细胞的增殖、凋亡、自噬selleck STM2457中的作用和机制尚不清楚。因此,本研究旨在探讨lncRNA FALEC在胃癌发生过程中的作用及其机制。方法1.采用qRT-PCR法检测FALEC在20对胃癌和癌旁组织及GC细胞中的表达水平。2.用 FALEC siRNA 转染 GC 细胞,通过 CCK8 检测法、Annexin-VFITC/PI 双染法、transwell迁移及侵袭实验、透射电镜、Western blot、免疫荧光检测干扰FALEC对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移侵袭和自噬的影响。3.通过StarBase数据库筛选FALEC的潜在靶miRNA,用qRT-PCR法验证FALEC与靶miRNA表达水平之间的相关性,用双荧光素酶报告基因检测确定二者的相互作用。4.对胃癌细胞NCI-N87转染miR-203b模拟物和过表达FALEC,通过上述2中的方法检测过表达miR-203b和同时过表达miR-203b及FALEC对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭和自噬的影响。5.通过TargetScan数据库筛选miRNA-203b的潜在靶基因。用免疫组化、Western blot、qRT-PCR方法检测靶基因PIM3在胃癌和癌旁组织中的表达情况。6.用 FALEC siRNA 转染 GC 细胞,通过 Western blot 检测 PIM3 与 miR-203b和FALEC表达水平的关系,通过双荧光素酶报告基因实验检测PIM3与miR-203b之间的相互作用。7.为了确定PIM3是否参与FALEC/miR203b对胃癌细胞功能的调控,我们通过上述2中的方法检测了 miR-203b过表达、miR-203b和PIM3同时过表达,以及miR-203b、PIM3、FALEC三者同时过表达对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移侵袭和自噬的影响。8.除了体外实验,我们还构建了裸鼠胃癌异种移植瘤模型进行了体内实验。用qRT-PCR检测了移植瘤组织中FALEC、miR-203b和PIM3的表达水平。通过HE染色法评估移植瘤的分化情况,用免疫组化检测移植瘤中PIM3的表达水平。用Western blot检测了移植瘤中PIM3和自噬相关蛋白P62和Beclin 1的表达水平。用透射电镜检测移植瘤中的自噬情况。结果本研究结果显示,FALEC在GC组织和细胞NCI-N87中表达明显升高。敲低FALEC在体外可以抑制GC细胞的生长、迁移、侵袭,诱导凋亡及自噬。在GC中,FALEC可以靶向调控miR-203b,二者的表达水平呈负相关,miR-203b在GC组织中低表达。MiR-203b可以抑制GC细胞NCI-N87的增殖、迁移和侵袭能力,促进其凋亡及自噬,而过表达FALEC可以部分逆转miR-203b对GC细胞的调控作用。更进一步,我们发现在GC中,PIM3是miRNA-203b的靶基因,二者的表达水平呈负相关,而PIM3的表达水平与FALEC呈正相关。PIM3在GC组织和GC细胞NCI-N87中高表达。MiR-203b的过表达可以抑制胃癌细胞NCI-N87的增殖、迁移和侵袭能力,促进其凋亡和自噬,而PIM3的过表达可以逆转miR-203b的作用,FALEC过表达又可以加强PIM3的逆转作用。更进一步,我们进行了体内实验,结果显示敲低FALEC显著降低了 GC细胞NCI-N87中FALEC和PIM3的表达水平,而升高了miR-203b的表达水平。在体内,敲低FALEC可抑制GC细胞NCI-N87的生长,促进自噬,其在小鼠体内形成的肿瘤分化良好。总的来说,我们的体内外实验结果一致显示,FALEC可通过miR-203b上调PIM3,FALEC是通过调控miR-203b/PIM3轴而促进GC的恶性行为。结论1.FALEC在GC组织和细胞中高表达,体外、体内实验均证实敲低FALEC可以抑制GC细胞的生长、迁移、侵袭,诱导凋亡及自噬,FALEC表现出癌基因的功能,可能与GC的发生发展密切相关。2.FALEC是通过调控miR-203b/PIM3轴促进GC的恶性行为,FALEC/miR-203b/PIM3轴可能成为治疗胃癌患者有希望的新靶点。

目的:本研究旨在通过蛋白质组学和磷酸化蛋白质组学联合分析,探索子宫内膜异位症发病机制相关的特异性蛋白和磷酸化位点,验证其对子宫内膜异位症发病机制的影响,以期对子宫内膜异位症的早期诊断及非激素治疗靶点研究提供理论依据。方法:1)本研究选择卵巢子宫内膜内异症患者为研究对象,取患者异位子宫内膜、在位子宫内膜组织样本各5例,再选取健康女性正常子宫内膜组织样本5例为对照组,提取总蛋白经蛋白酶解后,LC-MS/MS高分辨质谱分析,TMT标记,肽段分级,高分辨质谱仪检测差异表达蛋白,得到原始数据。再用TMT标记磷酸化肽段,串联使用Ti O2法和IMAC法富集磷酸化肽段,高分辨质谱仪检测获得质谱原始数据,生物信息学分析得出差异表达蛋白及差异蛋白磷酸化修饰位点。2)从全局角度观察蛋白质组学和磷酸化蛋白质组学数据特征,两组学联合分析研究,采用去本底分析、PCA分析、Venn及火山图等统计学方法联合分析两组学中差异蛋白肽段、差异磷酸化修饰肽段组间、组内的差异性,采用柱状图和圈图分析GO、KEGG的注释和富集功能差异,采用motif分析、激酶-底物预测、激酶-底物相互作用PPI互作网络分析挖掘差异最显著的激酶及底物,采用KSEA分析来预测激酶活性,结合KEGG通路分析结果,寻找到更重要、更具研究价值的蛋白激酶、磷酸化事件和关键信号通路。然后选择一具有研究价值的信号通路、选择此信号通路中相关的活性差异最大的蛋白激酶及底物,应用q RT-PCR方法进行差异性验证。3)基于两组学研究得出的具有研究价值的PI3K/AKT信号通路及Axl、mTOR蛋白激酶靶点进行验证及功能研究,研究对象同前,分离培养HEc ESCs、HEu ESCs及HEn ESCs并免疫组化鉴定,研究在细胞水平靶向上游Axl激酶、mTOR激酶调控PI3K/AKT信号通路影响HESCs细胞凋亡的机制。采用q RT-PCR验证HEc ESCs、HEu ESCs及HEn ESCs、Axl、mTOR、p-mTOR及其m RNA的表达差异;细胞水平选择si RNA转染调控Axl靶点、雷帕霉素调控mTOR靶点,采用WB、q RT-PCR检测Axl、mTOR、p-mTOREnasidenib研究购买 cyclin D1表达差异。结果:1)三组样本的蛋白质组学研究共筛选到7575个差异蛋白,异位子宫内膜组与在位子宫内膜组比较差异蛋白数量最多共535个,其中上调272个,下调263个;其次是异位子宫内膜组与正常子宫内膜组比较差异蛋白296个,其中上调198个,下调98个;在位子宫内膜组与正常子宫内膜组比较差异蛋白52个,其中上调12个,下调40个。GO注释及富集分析结果在生物过程方面异位子宫内膜组与正常子宫内膜组比较细胞外基质组织,生长板软骨软骨细胞形态发生和弹性纤维组装等差异最显著。在分子功能方面在位子宫内膜组与正常子宫内膜组比较抗原结合,CXCR3趋化因子受体结合和白细胞介素-8受体结合等差异最显著。在细胞组份方面三组样本具有差异的是细胞外空间,在位子宫内膜组与正常子宫内膜组比较免疫球蛋白复合物和血红蛋白复合物差异显著,异位子宫内膜组与在位子宫内膜组和正常内膜组分别比较含胶原细胞外基质、Z盘和膜攻击复合体等功能差异显著。KEGG注释及富集分析结果三组间差异排名前几位的通路分别为代谢通路、PI3K/AKT信号通路、补体和凝血级联、粘着斑、癌症通路及系统性红斑狼疮等。三组间共同的差异信号通路是代谢通路、PI3K/AKT信号通路。异位子宫内膜组与在位子宫内膜组和正常子宫内膜两组间比较差异蛋白亚细胞定位分布按占比大小排序,依次为细胞核、细胞外、质膜和细胞质。在位子宫内膜组与正常子宫内膜组比较差异蛋白亚细胞定位分布按占比大小排序,依次为细胞外、细胞核、细胞质和质膜。2)在蛋白质组学研究基础上联合磷酸化蛋白质组学研究,分析结果显示蛋白质组学和磷酸Angiogenesis抑制剂化蛋白质组学共有的蛋白质有2071个,蛋白质组学特有的蛋白质有5504个,磷酸化蛋白质组学特有的蛋白质有53个。异位子宫内膜组与正常子宫内膜组比较差异磷酸化蛋白数量最多共1701个,其中上调607个,下调1094个。异位子宫内膜组、在位子宫内膜组与正常子宫内膜组三组共有的差异磷酸化蛋白为丝氨酸/精氨酸重复基质蛋白2。异位子宫内膜组、正常子宫内膜组分别与在位子宫内膜组比较共有的差异磷酸化归属蛋白为延伸蛋白A。异位子宫内膜组与在位子宫内膜组和正常子宫内膜分别比较共有的差异磷酸化蛋白为激酶A锚定蛋RIPA Radioimmunoprecipitation assay白12和山梨糖SH3结构域蛋白2。三组间差异磷酸化蛋白KEGG富集分析结果主要的差异信号通路在核质运输、粘着斑、嗅觉传导、剪接体、黑素原生成、长时程增强、血管平滑肌收缩、甲状腺激素、肝细胞肝癌和肿瘤小分子RNA等信号通路。三组间差异蛋白亚细胞定位分析结果异位子宫内膜组与正常子宫内膜组比较质膜的差异蛋白质及差异磷酸化蛋白的差异最显著,异位子宫内膜组与正常子宫内膜组间比较差异磷酸化蛋白差异枢纽蛋白有两个,为肌球蛋白轻链激酶和平滑肌和肌球蛋白-11,可能与子宫内膜异位症迁移、种植、侵袭可能有关。激酶-底物预测分析比较三组间差异底物数量排列前10的激酶,三组比较结果中共有的激酶是PRKACA、MAPK3、CDK1、CSNK2A1、CDK2、MAPK1、AKT、AKT1、PRKACA、PRKACD,其中MAPK、AKT激酶均参与mTOR信号通路。KSEA分析三组激酶活性差异,异位子宫内膜组与正常子宫内膜组间比较结果,差异最显著且活性上调的激酶有AKT1、AKT、MAPKAPK2、MAPK12等,差异最显著且活性下调的激酶有CDK2、CDK1、CDK7与MTOR等,活性上下调的共有激酶是AKT、MAPK、MTOR,均与PI3K/AKT信号通路有交互联系,Axl激酶为P13K/AKT信号通路上游重要的调控点,选择PI3K/AKT信号通路、MTOR激酶及Axl激酶为下一步的研究靶点验证并开展功能性研究。3)q RT-PCR检测结果对比分析正常子宫内膜间质细胞,在位及异位子宫内膜间质细胞中Axl及mTOR m RNA表达水平差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,雷帕霉素组及Axl-si RNA组Axl、cyclin D1 m RNA表达水平差异有统计学意义(P<0.05);与雷帕霉素组相比,在Axl-si RNA组中Axl m RNA表达水平差异有统计学意义(P<0.05);对比分析阴性对照组数据,雷帕霉素组Axl、cyclin D1 m RNA等表达水平差异有统计学意义(P<0.05);与阴性对照组数据相比,Axl-si RNA组中Axl和cyclin D1 m RNA的表达差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,雷帕霉素组中mTOR m RNA相对表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组、雷帕霉素组、阴性对照组比较分析,Axl-si RNA组数据差异显著有统计学意义(P<0.05);四组间mTOR蛋白表达未见显著差异;与空白对照组相比较,雷帕霉素组及Axl-si RNA组中p-mTOR、cyclin D1蛋白表达差异显著有统计学意义(P<0.05),与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:基于LC-MS/MS高分辨质谱,TMT蛋白质组学和磷酸化蛋白质组学两组学的联合分析子宫内膜异位症临床样本研究,成功筛选出了子宫内膜异位症发病机制相关的具有研究价值的一系列的差异蛋白、信号通路及最具活性的激酶及底物。其中的PI3K/AKT信号通路,mTOR激酶以及上游Axl激酶验证,Axl和mTOR激酶在异位内膜间质细胞,在位子宫内膜中均高表达,验证了组学差异,证实Axl、mTOR参与了子宫内膜异位症的发生。Axl通过介导PI3K/Akt信号通路参与了异位子宫内膜间质细胞的活化与增殖,mTOR可能通过PI3K/AKT信号通路以外的其他机制与Axl参与子宫内膜异位症的发生。调控Axl、mTOR激酶,可促进子宫内膜间质细胞凋亡,Axl、mTOR可成为子宫内膜异位症发病机制及非激素靶点药物的研究思路之一,需开展更深入的体内研究验证。深挖组学分析结果可筛选出更多具有研究价值的靶点,为探索子宫内膜异位症早期筛查、诊断及非激素靶点药物研究提供更多的思路。

目的将极强电负性的氟原子引入2-羟基-2-三氟甲基-3-噻吩-5-色酮C_(Belnacasan配制23)H_(2SAG IC501)BrF_3NO_3S的芳香性结构,获得高脂溶性、高稳定的化合物。方法以对溴基苯甲醛、达咪酮、4,4,4-三氟-1-(噻吩-2-基)丁烷-1,3-二酮和醋酸铵为原料,少量的乙醇作溶剂,多组分一锅法合成目标化合物。核磁共振谱(~1H-NMR和~(13)C-NMR)、红外光谱(IR)、高分辨质谱(HRMS)和X射线单晶衍射确证目标化合物的结构,并分析该结构的各平面角度。结果获得目标产物,即2-羟基-7,7-二甲基-3-(噻吩-2-羰基)-4-(对溴苯基)-2-(三氟甲基)-3,4,7,8-四氢-5(6H)-色酮。产物结构经核磁、红外和高分辨质谱确证。单晶X射线衍射分析显示,该产物的晶体结构属正交晶系,空间群PbDevice-associated infectionsca。采用直接法解析该晶体结构,全矩阵最小二乘法修正的原子参数显示,最终的偏离因子为R=0.0464,wR=0.1133。该分子结构中新构筑的吡啶环为半椅式构象。结论本研究通过多组分反应将三氟甲基高效且便捷地引入到色酮骨架。