目的:分析老年钙化性心脏瓣膜病发生的影响因素。方法:回顾Taurine配制性分析2020年4月至2022年3月该院收治的Emricasan核磁81例老年钙化性心脏瓣膜病患者的临床资料,设为钙化组,另回顾性分析同期该院收治的80例非钙化性老年心脏瓣膜病患者的临床资料,设为非钙化组,统计两组一般资料,分析老年钙化性心脏瓣膜病的影响因素。结果:两组性别、合并高血压、合并糖尿病、骨钙素>46 ng/mL、降钙素<17.5 pmol/L、钙≤2.25 mmol/L、磷>1.45 mmol/L、镁<1.15 mmol/L、超敏C反应蛋白<10 mg/L、三酰甘油≥1.7 mmol/L占比比较,差异均无统计学意义(P>0.05);两组年龄>65岁、体质量指数≤23 kg/m2、吸烟史、合并冠心病、合并慢性阻塞性肺疾病、甲状旁腺激素(PTH)>87.1 pg/mL、25羟基维生素D<20 ng/mL、血肌酐>120μmol/L、尿素氮>7.14 mmol/L、尿酸>420μmol/L、同型半胱氨酸(Hcy)>15μmol/L、胱抑素C≤1.09 mg/L、总胆固醇≤5.2 mmol/L、低密度脂蛋白胆固醇>3.6 mmol/L占比比较,差异均有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,年龄>65岁、PTH>87.1 pg/mL、Hcy>15μmol/L均为老年钙化性心脏瓣膜病发生的危险因素(OR>1,P<0.05)。结论:年龄>65岁、PTH>87.1 pg/mL、Hcy>15μmol/L均为老年钙化性心脏瓣hepatoma-derived growth factor膜病发生的危险因素。
基于乳腺癌类器官放射损伤模型的DNA损伤修复分子标志物研究
研究目的:放射治疗在乳腺癌局部治疗和全身综合治疗中发挥重要作用,在早期术后和晚期复发与转移情况下广泛应用。乳Compound 3腺癌的高度异质性使个体间和个体不同阶段的放射敏感性存在差异,因此,能够检测放射损伤反应并预测乳腺癌放射敏感性的体外乳腺癌类器官模型具有重要意义。本研究旨在构建乳腺癌类器官,建立放射损伤评估模型,检测照射损伤后相关DNA损伤修复分子标志物的表达情况,为探讨通过该模型预测放疗效果提供依据。方法:构建乳腺癌类器官培养体系,对乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和患者来源的乳腺癌组织进行培养;通过组织学与乳腺癌相关标志物的免疫组化检测乳腺癌类器官与原始组织的匹配情况;对构建的乳腺癌类器官进行2、4、8、16Gy的照射剂量处理,在光镜下记录各组的平均直径变化,通过ATP酶活性检测评估细胞活力绘制辐射生存SF曲线;通过流式细胞术评估照射损伤修复后的细胞凋亡和增殖情况;通过Western Blot和RT-qPCR检测照射后不同时间内乳腺癌类器官DNA双链断裂损伤修复蛋白的表达变化。SCRAM biosensor结果:HE染色显示乳腺癌类器官形成微组织结构,具有明显的细胞异型性和病理性核分裂象。免疫组化结果显示MCF-7类器官呈现ER、PR阳性表达,HER2阴性表达,符合luminalA型分子分型;MDA-MB-231类器官呈现ER、PR、HER2阴性表达,符合三阴性分子分型;且患者来源MLN8237浓度的类器官与其原始肿瘤组织的分子分型保持一致。流式细胞术和ATP酶活性检测显示从8Gy开始,类器官存活率呈剂量依赖性下降,12Gy时,类器官活力完全丧失。Western Blot和RT-q PCR结果显示类器官模型在照射后γ-H2AX、P53明显上调,DNA损伤相关激活蛋白p-ATM在照射早期48h内表达上调,96h修复完成后下调。结论:乳腺癌类器官与原始肿瘤的形态学,组织病理学,激素受体状态相匹配且维持了肿瘤的遗传异质性。乳腺癌类器官模型下的肿瘤细胞较普通二维培养下的肿瘤细胞更耐照射,结合DNA修复标志物分析提示该模型下利于肿瘤细胞完成损伤修复过程。乳腺癌类器官模型是更接近体内的放射生物学体外研究模型。
M2型巨噬细胞通过MIF/ERK/FBXW7通路影响乳腺癌的增殖和迁移
背景及目的:近年来,我国乳腺癌发病率呈逐年上升趋势,据相关数据统计,我国乳腺癌的发病率已位居女性癌症的首位。乳腺癌的发生发展是一个多种因素相互调控的过程。乳腺癌组织中浸润的多种免疫细胞和基质细胞及各种细胞分泌的细胞因子都参与其中。肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)作为乳腺癌微环境中的重要组分,通过分泌细胞因子来介导其与肿瘤细胞之间的相互作用,在乳腺癌细胞增殖迁移、逃避免疫反应及产生耐药性等方面起到促进作用。巨噬细胞迁移抑制因子(Macrophage migration-inhibitory factors,MIF)是一种促瘤细胞因子,在肿瘤组织中高表达。研究发现TAMs可以分泌MIF,二者均与肿瘤的不良进展相关。然而,TAMs分dilation pathologic泌的MIF在乳腺癌中的作用尚未见相关报道。因此TAMs是否通过分泌MIF促进乳腺癌的进展值得深入研究。本课题旨在研究M2巨噬细胞来源的MIF对乳腺癌细胞的影响,并探究MIF影响乳腺癌的具体机制,从而为乳腺癌的临床治疗提供一个新的靶点。方法:利用PMA诱导THP-1细胞分化为M0巨噬细胞、IL更多-4和IL-13将M0巨噬细胞极化为M2型巨噬细胞;Western-blot检测M1巨噬细胞和M2巨噬细胞表型标志物的表达和M2型巨噬细胞中MIF的蛋白表达情况;ELISA法检测M2型巨噬细胞上清液中MIF的分泌量;沉默或过表达M2型巨噬细胞中的MIF,使用Western-blot和ELISA验证转染效果;收集经过不同处理后的M2型巨噬细胞的上清液制备条件培养基,用于培养乳腺癌细胞BT-549和MCF-7,CCK-8实验检测乳腺癌细胞的增殖,划痕实验和transwell实验用于检测细胞迁移;利用共培养小室将转染MIF的M2型巨噬细胞与BT-549或MCF-7细胞共培养,Western-blot检测BT-549和MCF-7细胞中E-cadherin、Vimentin、P-ERK1/2、FBXW7(F框/WD-40域蛋白7)的表达;向乳腺癌细胞中加入ERK通道阻断剂U0126,然后将其与过表达MIF的M2型巨噬细胞共培养,Western-blot检测BT-549和MCF-7细胞中FBXW7、P-ERK1/2、E-cadherin、Vimentin的表达,CCK-8检测细胞增殖,划痕实验和transwell实验检测细胞迁移。结果:M2型巨噬细胞比M0型巨噬细胞分泌MIF增多。当与M2型巨噬细胞共培养后,BT-549和MCF-7细胞的增殖和迁移增加,细胞中EMT相关蛋白E-caErdafitinibdherin表达减少,Vimentin表达增加。当沉默M2型巨噬细胞中的MIF后,其促进BT-549和MCF-7细胞增殖迁移和EMT的能力被抑制;而过表达MIF的M2型巨噬细胞进一步促进BT-549和MCF-7细胞的增殖迁移和EMT。沉默MIF后乳腺癌细胞中FBXW7的表达升高,过表达MIF后FBXW7的表达下降,而P-ERK1/2的变化与FBXW7相反。ERK阻断剂可逆转MIF对FBXW7的抑制作用,恢复乳腺癌细胞中FBXW7的表达,并抑制乳腺癌细胞增殖迁移及EMT。结论:M2型极化的巨噬细胞分泌MIF增多;MIF通过激活乳腺癌细胞中ERK信号通路抑制FBXW7的表达,促进乳腺癌的增殖和迁移。
肿瘤整形技术联合保留乳房术在早期乳腺癌患者中的应用效果
目的 分析肿瘤整形技术联合保留乳房术在早期乳腺癌(BC)患者中的应用效果。方法 选取2018年1月-2021年1月我院收治的60例早期BC患者作为研究对象,采用随机数字表法分为对照组与观察组,各30例。对照组采用传统保留乳房术治疗,观察组采用肿瘤整形技术联合保留乳房术治疗,比较两组手术切除指标、术后乳房美容效果、术后并发症、预后生存情况及生活质量。结果 观察组切除肿瘤组织重量与手术切缘宽度大于对照组(P<0.05)确认细节;观察组SOMA-LNET量表各项评分均高于对照组(P<0.05);观察组术后并发症Biomass fuel发生率为16.67%,低于对照组的43.33%(P<0.05);两组局部复发率、再次手术率、无病生存率比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组情感维度评分低于对照组,社会/家庭维度评分高于对照组(P<0.05),而两组FACT-B评分中生理与功能维度评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 肿瘤整形技术联合保留乳房术的乳腺切除范围更大,可通过术后乳房缺陷的修复,优Fulvestrant化其外形美观度,降低术后并发症发生风险,保证患者预后生存效果的同时,提升其生活质量。
莫高组合对环磷酰胺致小鼠免疫功能低下的影响
本试验主要验证了莫高组合对环磷酰胺致小鼠免疫力低下的调节作用。取80只小鼠随机分为对照组、模型组和莫高不同剂量(0.5g/kg、1g/kg、1.5g/kg、2g/kg、2.5g/kg、3g/kg)处理组,每组10只。除对照组外其余各组小鼠连续3d腹腔注射环磷酰胺(80mg/kg),第6d同更多剂量加强一次,第7~16d莫高各处理组每天primary endodontic infection分别给予相应浓度莫高灌胃1次,对照组和模型组灌胃等体积生理盐水。计算各组小鼠平均采食量、体质量变化率、免疫器官指数,采用酶联免疫吸附法测定血清溶菌酶活性。结果是模型组小鼠的体质量变化率、胸腺指数、脾脏指数、血清溶菌酶活性均显著低于对照组(P<0.05)。与模型组相比,不同剂量莫高组小鼠采食量、体质量变寻找更多化率、胸腺指数、脾脏指数均有所升高,并且在低剂量(0.5g/kg)时显著提高(P<0.05)。不同剂量莫高组合小鼠溶菌酶活性明升高(P<0.05)。说明莫高组合能提高小鼠免疫器官指数,增强溶菌酶活性,对环磷酰胺致免疫力低下小鼠的免疫功能具有改善作用。
磁珠法结合实时定量PCR检测新型冠状病毒灭活疫苗中宿主细胞残留DNA的验证及应用
目的 对磁珠法结合实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测新型冠状病毒(简称新冠)灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞残留DNA(residual cell DNA,rcDNA)进行验证及应用。方法 利用磁珠与溶液中DNA的特异性结合来提取样品中rcDNA。将已知浓度的细胞DNA标准品系列稀释后,根据DNA标准品的循环阈值与浓度之间的线性关系,对未知样品中的rcDNA进行定量分析。对方法进行线性和范围、专属性、准确度、精密度验证,并使用该方法对新冠灭活疫苗(Vero细胞)生产过程样品进行rcDNA及其片段大小检测。结果 标准品检测mTOR抑制剂范围为0.000 3~30 pg/μL,该方法的标准曲线决定multiple HPV infection系数(R~2)> 0.99,扩增效率为90%~110%。质控样品回收率为50%~1D-Lin-MC3-DMA浓度50%,相对标准偏差(RSD)均小于30%。试验结果的各项参数均符合标准。结论 磁珠法可解决rcDNA检测中样品前处理提取DNA的技术难点,qPCR能够简便、快速、准确地对新冠疫苗生产过程中的rcDNA进行定量测定。该方法适用于新冠疫苗中rcDNA的检测及疫苗生产过程和成品的质量控制,对其他采用同样细胞基质的病毒性疫苗质量控制也具有借鉴意义。
PLC-γ1的多克隆抗体制备及对绵羊早期胚胎发育作用的初步研究
旨在通过构建PLC-γ1真核过表达载体并制备其多克隆抗体,为探索绵羊PLC-γ1基因对卵母细胞激活作用及早期胚胎发育的影响提供基础数据。本研究以实验室保存的Puc57-P2Asport and exercise medicine-Flag-PLC-GW4869小鼠γ1菌株为模板设计引物并引入HindⅢ、AgeⅠ酶切位点,利用PCR扩增并纯化P2A-Flag-PLC-γ1基因,将其连入pcDNA3.1-EGFP载体,进行转化,通过菌液PCR、双酶切及测序鉴定后提取质粒。随后将构建好的重组质粒转染HEK-293T细胞24 h,分为control组、空载组和PLC-γ1过表达组,通过显微镜观察细胞荧光,实时荧光定量PCR(qPCR)及Western blot(WB)检测转染后细胞中PLC-γ1的表达情况;Anti-Flag免疫磁珠纯化PLC-γ1蛋白;以10月龄的新西兰大白兔(健康状态良好,体重约50 kg,n=2)为对象制备多克隆抗体,间接ELISA法测定多克隆抗体效价,WB鉴定其特异性。通过显微注射重组质粒及离子霉素(Ion)结合6-DMAP孤雌激活卵母细胞,qPCR及WABT-263B检测PLC-γ1在卵裂后不同时期(2细胞期、4细胞期、8细胞期、桑椹胚期)的绵羊早期胚胎细胞中的表达情况。结果显示,成功构建真核过表达载体;转染24 h后,与空白对照及阴性对照相比,过表达组PLC-γ1表达量明显升高(P<0.01);WB结果显示成功获得并纯化PLC-γ1蛋白,大小为149 ku;测得PLC-γ1多克隆抗体效价为1∶12 800,并可与PLC-γ1蛋白发生免疫反应。将重组质粒注射到绵羊MⅡ期卵母细胞胞质中,qPCR及WB结果显示PLC-γ1在绵羊早期胚胎发育各时期均有表达。综上所述,本研究成功构建了PLC-γ1真核过表达载体并制备了其多克隆抗体,通过显微注射技术将重组质粒注入卵母细胞并实现表达,证明PLC-γ1在绵羊早期胚胎发育各时期均有表达,且具有作为新的卵母细胞激活因子的潜能。既为探索绵羊PLC-γ1基因对卵母细胞激活作用及早期胚胎发育的影响提供了科学依据,也为进一步提升绵羊的繁殖性能奠定基础。
新生儿胎膜早破感染给予不同抗生素的疗效及高危因素分析
目的 不同抗生素治疗新生儿胎膜早破(premature rupture of membranes, PROM)感染的效果,并分析其危险因素。方法 选择2019年2~12月收治的215例PROM新生儿,对其临床资料进行回顾性分析,根据不同抗生素治疗方案分为2组,对照组130例依照入院风险评估结构实施治疗,观察组85例依照入院后PLX-4720价格感染筛查结果与风险评估结果实施治疗,对比2组PROM新生儿治KPT-330研究购买疗效果。另将215例PROM新生儿根据是否发生感染分为正常组(n=178)和感染组(n=37),整理2组患儿基本信息,分析影响新生儿PROM感染的高危因素。结果 观察组总感染发生率为14.12%略低于对照组的19.23%;但差异无统计学意义(P>0.05)。观察组新生儿抗生素使用时间低于对照组(P<0.05);观察组败血症/可疑败血症占比为3.53%低于对照组的11.54%(P<0.05)。单因素分析显示,出生体重、是否足月、分娩方式、PROM时间、抗生素使用、发热与新生儿PROM感染的发生存在密切关系(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,剖宫产、未足月儿、出生体重<2.5 kg是影响新生儿PROM感染的高危因素(P<0.05)。结论 新生儿PROM患儿使用抗生素治疗时,需根据患儿感染筛查结果与风险评估合理用药,确保药物疗效同时,减少抗生素药物使用;影响新生儿PROM感染的主要危险因素是低体重、早产与剖宫产,此类高风险新生儿,需高度重视,加Molecular Biology强早期预防管理工作。
利用蛋白组学技术探讨骨肉瘤肺转移患儿血清中蛋白表达情况
目的 利用iTRAQ标记的蛋白组学技术探讨骨肉瘤肺转移患儿血清中蛋白的表达。方法 纳入10例骨肉瘤患儿和10例骨肉瘤肺转移患儿作为研究对象,收集AG-221抑制剂所有研究对象血清5 ml,采用iTRAQ标记的蛋白组学技术分析2组血清中的差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行GO富集分析、KEGG通路富集及蛋白-蛋白互作分析。外科手术后获取2例骨肉瘤肺转移患儿及2例骨肉瘤患儿瘤体组织,采用Western blot验证2组患儿癌组织中CDK1、hnRNP A2/B1、ITGAV和SRSF10的蛋白表达水平。结果 与骨肉瘤患儿相比,骨肉瘤肺转移患儿血清中高表达的蛋白共477种,低表达的蛋白共235种。KEGG通路富集显示,ECM及受体的相互作用、黏着力及PI3K-Akt信号通路等可能是骨肉瘤肺转移的主要发病机制。骨肉瘤肺转移患儿血清中差异蛋白前10种为CDK1、CTNNB1、ITGB1、SNRPE、SNRPG、HNRNPH1、SNRPD3、HNRNPC、ITGAV和SRSF1。与骨肉瘤患儿的癌组织相比,骨肉瘤肺转移患儿癌组织中CDK1、hnRNP A2/B1、ITGAV和SRSF10蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 与骨肉瘤患儿相比,BYL719临床试验骨肉瘤肺转移immunostimulant OK-432患儿血清中存在多种差异表达蛋白,采用iTRAQ标记的蛋白组学技术能很好地筛选出差异蛋白,为骨肉瘤发生肺转移的分子机制研究提供了潜在的血清学标志物。
稳定表达ABCG2细胞模型的建立及其在筛选ABCG2抑制剂中的应用
本研究构建了一种稳定表达ATP结合盒转运蛋白2 (ATP binding cassette subfamily G member 2, ABCG2)并可用于筛选ABCG2抑制剂的细胞模型。首先,利用脂质体lipo3000将表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2转染至HEK293细胞,经G418Dibutyryl-cAMP临床试验筛选阳性克隆株后,采用q RT-PCR与Western-blot方法进行ABCCRG 81045生产商CG2稳转细胞株(稳转株)pediatric infection的鉴定;随后,利用差速离心法提取膜囊泡,通过14C-尿酸同位素摄取实验筛选ABCG2抑制剂。结果表明, ABCG2稳转株的mRNA及蛋白质表达水平分别为野生型的1 717.5倍和2.64倍;经其提取的囊泡摄取14C-尿酸的能力为对照囊泡的3.73倍。利用上述工具细胞,研究评价了临床常用的降尿酸药物对ABCG2的抑制活性。结果显示,苯溴马隆抑制ABCG2的IC50值为(3.45±1.09)μmol/L, RDEA3170抑制ABCG2的IC50为(9.90±2.11)μmol/L。综上所述,本实验成功构建了ABCG2抑制剂体外筛选模型,并首次发现RDEA3170具有ABCG2抑制作用。