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为研究白灵菇(Pleurotus tuoliensis)的化学成分及其生物活性，Liraglutide使用方法运用ODS、硅胶柱柱色谱、半制备高效液相色谱等方法对其进行分离纯化，结合现代波谱技术与理ventilation and disinfection化性质鉴定化合物结构，从白灵菇提取物中分离得到11个化合物，分别鉴定为镰刀吡酮A(1)、5-羟基二氢镰刀红素C(2)、3-甲基醚镰刀红素(3)、2-acetonyl-3-methyl-7-methoxynaphthazarin(4)、(-)-cyclonerodiol(5)、2-isopropanol-3-methyl-7-methoxy-naphthazarin(6)、1,2-二羟基薄荷内酯(7)、6,7-dihydroxy-3,6-dimethyl-2-isovaleroyl-4,5,6,7-tetrahydrobenzo furan(8)、二氢-3-外胸膜内酯(9)、5-羟甲基糠醛(10)、6,7-dihydroxy-3,6-dimethyl-2-isovaleroyl-4,5,6,7-tetrahydrobenzofuran(11),所有化合物均为首次从白灵菇中分离。对所得化合物进行抗宫颈癌细胞Hela活性筛选，除化合物5、9、10的活性较弱外，其它化合物均显示出较强的抗宫颈癌细胞活性，其中化合物3的活性最强，IC_(50)为3.7Alpelisib说明书8μmol/L,具有进一步开发的价值。

宿主防御肽(抗菌肽)是生物体产生的一种小分子多肽,通过直接杀死病原体或调节宿主免疫反应来控制感染。宿主防御肽主要分为两个家族,即cathelicidin家族和defensin家族。鸡源抗菌肽cathelicidin-2(CATH-2)是cathelicidin家族抗菌肽,具有广谱的抗菌活性和免疫调节活性。先天免疫是宿主抵御病原微生物感染的第一道防线,依靠于细胞表面和细胞质中的模式识别受体。NLRP3蛋白是位于胞质的模式识别受体,识别病原体和应激因素,通过形成炎症小体来调节细胞因子IL-1β分泌。研究表明,CATH-2具有调节炎性反应的能力,而NLRP3炎症小体的活化是炎症发生的关键,但是CATH-2调控NLRP3炎症小体活化的机制尚不清楚。本实验以脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞为刺激模型,首先探究CATH-2调控NLRP3炎症小体的作用,然后通过研究钾离子外流、NEK7和溶酶体渗漏阐明CATH-2诱导巨噬细胞NLRP3炎症小体激活的机制。1.CATH-2在NLRP3炎症小体激活中的作用为了探究CATH-2是否作用于NLRP3炎症小体,本章采用LPS刺激WT和NLRP3炎症小体相关组分敲除小鼠(NLRP3~(-/-)、caspase-1~(-/-)、ASC~(-/-))腹腔巨噬细胞,然后加入CATH-2处理细胞,通过ELISA、Western blot和q PCR检测相关蛋白表达情况。结果显示,在CATH-2处理下,脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞产生了IL-1β和IL-1α,说明CATH-2作用于IL-1β信号通路。另外,在LPS刺激的NLRP3~(-/-)、ASC~(-/-)、和caspase-1~(-/-)巨噬细胞中,CATH-2诱导的IL-1β分泌显著下降,表明CATH-2通过NLRP3炎症小体通路诱导IL-1β分泌。而且,加入CATH-2后,能够检测到caspase-1和IL-1β活性形式及ASC寡聚化,说明CATH-2可以活化caspase-1及诱导ASC寡聚化从而使IL-1β分泌。有趣的是,加入CATH-2后,NLRP3和IL-1βm RNA无明显变化,说明CAT购买AM-2282H-2不影响第一信号通路。综上所述,这些结果说明CATH-2作为第二信号激活NLRP3炎症小体,导致ASC的寡聚化和caspMedical errorase-1活化,从而促进IL-1β成熟与分泌。2.钾离子外流在CATH-2诱导NLRP3炎症小体激活中的作用研究表明,NLRP3炎症小体激活需要第二信号,包括ATP、线粒体氧化DNA的释放、钾离子外流等。其中,钾离子外流作为NLRP3炎症小体激活过程中的上游事件,受到广泛研究。然而,CATH-2是否通过钾离子外流来激活NLRP3炎症小体还不清楚。为了探究CATH-2是否引起钾离子外流,本章使用KCl溶液抑制钾离子外流,同时使用ATP受体(P2X7)抑制剂作为对照,通过ELISA和Western blot检测相关蛋白表达。结果显示,LPS+CATH-2组的细胞有较高IL-1β和caspase-1成熟分泌,抑制P2X7受体后,LPS+CATH-2组的细胞仍有较高IL-1β和caspase-1成熟分泌,说明CATH-2不依赖于P2X7诱导NLRP3炎症小体的激活。然而,随着氯化钾浓度提升,LPS+CATH-2组的IL-1β和caspase-1分泌量减少,说明CATH-2通过钾离子外流来诱导NLRP3炎症小体活化,从而促进IL-1β分泌。3.NEK7在CATH-2诱导NLRP3炎症小体激活中的作用NEK7在NLRP3炎症小体激活过程中发挥至关重要的作用,它作用于钾离子外流的下游,并能与NLRP3蛋白相互作用,调控NLRP3蛋白的寡聚化,这对ASC斑点形成和caspase-1激活至关重要。然而,CATH-2是否通过调控NEK7来激活NLRP3炎症小体还不清楚。本章通过基因沉默技术敲低NEK7蛋白表达,探究CATH-2是否通过NEK7来激活NLRP3炎症小体。过ELISA和Western blot检测相关蛋白表达。结果显示,NEK7敲低后,LPS+CATH-2组IDN-6556试剂细胞上清中IL-1β和caspase-1分泌量显著降低,说明CATH-2通过NEK7通路来激活NLRP3炎症小体,从而促进IL-1β分泌。4.溶酶体在CATH-2诱导NLRP3炎症小体激活中的作用自身来源的颗粒物及外源颗粒物被吞噬后,会导致溶酶体破裂并释放组织蛋白酶到细胞质中,以上过程对NLRP3炎症小体激活至关重要。然而,CATH-2激活NLRP3炎症小体是否依赖于溶酶体途径还不清楚。本章对溶酶体进行标记并且使用了组织蛋白酶抑制剂,通过荧光观察溶酶体以研究CATH-2是否通过溶酶体和组织蛋白酶激活NLRP3炎症小体。结果显示,LPS+CATH-2组绿色荧光减弱,绿色斑点减少,说明CATH-2可以引起溶酶体泄漏。此外,抑制了组织蛋白酶B(CTSB)后,IL-1β和caspase-1分泌量完全消失,提示CATH-2通过组织蛋白酶B途径来激活NLRP3炎症小体。类似的,LPS+CATH-2组检测到大量ASC斑点,而加入CTSB抑制剂后,ASC斑点显著减少,说明CATH-2通过CTSB途径来诱导ASC斑点形成。总之,我们的研究表明,CATH-2通过破坏溶酶体来释放CTSB,随后促进ASC斑点形成和caspase-1活化。在本研究中,我们探究了CATH-2调节LPS诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞NLRP3活化的机制。我们的结果表明,CATH-2通过NLRP3通路促进IL-1β的成熟和分泌。我们的研究揭示了CATH-2新的免疫调节作用,并为从宿主角度开发新的治疗性免疫调节策略提供了基础,以对抗抗生素耐药病原体。

背景胶质瘤(Glioma)是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,占大脑及其他中枢神经系统恶性肿瘤的80%左右。胶质瘤通常起源于神经干细胞、星形胶质细胞以及神经胶质细胞等。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)将成人型胶质瘤分为低级别胶质瘤(Low Grade Glioma,LGG)和胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM)。目前,胶质瘤的标准治疗方案仍以外科手术切除为主,术Thermal Cyclers后辅以放射治疗和替莫唑胺化学治疗。然而,由于胶质瘤高度的侵袭性和分子异质性、血脑屏障的存在以及免疫抑制的肿瘤微环境(Tumor Microenvironment,TME)等因素,使胶质瘤的现有治疗手段的治疗效果有限。因此,亟待深入探索胶质瘤的分子异质性机制,为制定新的治疗策略提供理论基础。白细胞分化抗原36(Cluster of Differentiation 36,CD36)是一种跨膜糖蛋白,又称为脂肪酸转位酶和清道夫受体B2,在多种细胞的胞膜上均有表达。CD36可与不同的配体结合从而发挥不同的生物学功能,包括脂质代谢和信号转导等。在肿瘤领域,CD36表达上调可促进胃癌、卵巢癌等肿瘤的进展。而CD36在胶质瘤中发挥的生物学功能尚未有相关报道。因此,本研究拟探讨CD36在胶质瘤进展中所发挥的作用及其潜在机制,为指导胶质瘤治疗提供新的干预措施。目的探索CD36与胶质瘤患者预后的关系,并阐明其在胶质瘤进展中的潜在机制,为胶质瘤的治疗策略提供理论依据。方法和结果1.CD36高表达与胶质瘤患者较差的临床病理特征相关在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和中国胶质瘤基因组图谱(Chinese Glioma Genome Atlas,CGGA)数据库中下载胶质瘤患者的转录组数据和临床信息。利用生物信息学方法分析,与正常脑组织相比,胶质瘤中CD36的表达水平显著升高。利用Wilcoxon秩和检验和Kruskal-Wallis检验方法分析了胶质瘤患者不同的临床特征组间CD36的表达情况。结果表明,与低龄(≤60岁)患者相比,高龄(>60岁)胶质瘤患者的预后更差;与WHO Ⅱ级和Ⅲ级的胶质瘤患者相比,WHO Ⅳ级的患者具有更短的生存期;与此同时,在胶质瘤患者中CD36表达上调与异柠檬酸脱氢酶(Isocitrate Dehydrogenase,IDH)野生型和lp/19q非共缺失型等恶性表型呈现正相关的关系。2.CD36高表达可能预示胶质瘤患者预后不良对胶质瘤患者进行Kaplan-Meier生存分析,CD36表达上调的胶质瘤患者较低表达患者的预后更差。单因素和多因素Cox回归分析结果表明,CD36高表达是影响胶质瘤患者预后的独立危险因素。此外,建立列线图(Nomogram)预测每个胶质瘤患者1年、3年和5年总生存期(Overall Survival,OS)的概率,校准图和ROC曲线结果表明该预后模型对胶质瘤患者1年、3年和5年的OS具有较好的预测能力。3.CD36在体外促进胶质瘤细胞的增殖和迁移能力在U87、U251和LN229细胞系中瞬时转染CD36的小干扰RNA(Small Interfering RNA,siRNA),利用实时定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)和 Western blot 实验检测敲低效率。通过 CCK-8、克隆形成及EdU实验证明,敲低CD36明显抑制了胶质瘤细胞的增殖能力。划痕实验和transwell实验结果均表明,CD36表达下调后胶质瘤细胞的迁移能力显著减弱。4.CD36可能对胶质瘤免疫微环境有重要影响利用“DESeq2”R包在CD36高表达和低表达的胶质瘤患者之间筛选出了共1791个差异基因,对这些差异基因进行了基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因及基因集百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)功能富集分析。随后,分别选取GeneMANIA数据库和STRING在线数据库中与CD36最相关的前20位的基因和蛋白,并对这些基因和蛋白进行了功能富集分析。以上功能富集分析结果显示,CD36可能在调控胶质瘤免疫微环境方面发挥着重要作用。5.CD36表达上调可能预示胶质瘤TME中巨噬细胞和中性粒细胞的免疫浸润水平升高利用表达谱数据估测恶性肿瘤组织中间质细胞和免疫细胞(Estimation of Stromal and Immune Cells in Malignant Tumor Tissues Using Expression Data,ESTIMATE)算法发现,与CD36低表达组胶质瘤的患者相比,CD36高表达组的患者具有更高的免疫评分和基质评分。使用CIBERSOR寻找更多T算法和单样本基因集合富集分析(Single-sample Gene set Enrichment Analysis,ssGSEA)方法分析发现,CD36高表达组的胶质瘤患者,其免疫浸润的巨噬细胞和中性粒细胞的数量显著升高。6.CD36可能促进髓系巨噬细胞和中性粒细胞向胶质瘤TME的迁移和浸润通过Spearman’s相关性分析发现,CD36的表达与单核细胞趋化因子C-C基序趋化因子配体2(C-C motif Chemokine Ligand 2,CCL2)和C-C基序趋化因子配体5(C-C motif Chemokine Ligand 5,CCL5)以及中性粒细胞趋化因子C-X-C基序趋化因子配体6(C-X-C motif Chemokine Ligand 6,CXCL6)和 C-X-C 基序趋化因子配体 8(C-X-C motif Chemokine Ligand 8,CXCL8)的表达呈正相关。利用 qRT-PCR 实验证实,CD36敲低组的胶质瘤细胞分泌单核细胞和中性粒细胞的趋化因子的能力明显下降。此外,通过Spearman’s相关性分析发现,CD36与M0-和M2-巨噬细胞以及N2-中性粒细胞典型标记物的表达呈正相关,同时也发现,敲低CD36的胶质瘤细胞系分泌M2-巨噬细胞相关极化因子转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β1)和集落刺激因子1(Colony-stimulating Factor 1,CSF-1)以及N2-中性粒细胞相关极化因子集落刺激因子 2(Colony-stimulating Factor 2,CSF-2)和集落刺激因子 3(Colony-stimulating Factor获悉更多 3,CSF-3)的能力均明显下降。结论CD36不仅是影响胶质瘤进展和预后的生物标志物,而且可能在重塑胶质瘤TME方面发挥重要作用,促进了免疫抑制性TME的形成。

目的:探讨微小RNA(miRNA)miR-6771-3p在子宫内膜异位组织中的表达及其通过靶向调控AXIN2对异位子宫内膜间质细胞增殖和迁移LXH254的影响。方法:收集因子宫内膜异位症行手术治疗的患者子宫在位内膜组织和异位内膜组织34例，采用实时聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测组织中miR-6771-3p的表达水平。将异位子宫内膜间质细胞分为沉默组(转染靶向沉默miR-6771-3p的短发夹RNA载体)和空载体组(转染对照载体)。噻唑蓝(MTT)法分析转染后各组异位子宫内膜间质细胞的增殖能力，细胞划痕愈合实验分析转染后各组异位子宫内膜间质细胞的迁移能力，生物信息学技术和双荧光素酶报告基因实验验证miR-6771-3p和轴抑制蛋白2(AXIN2)的靶向关系，RT-qPCR检测转染后各组细胞AXIN2 mRNA表达水平。Western blot检测转染后各组细胞AXIN2蛋白和Wnt信号通路蛋白的表达水平。结果:子宫异位内膜组织中miR-6771-3p表达显著高于子宫在位内膜组织(P<0.01)。与空载体组异位子宫内膜间质细胞比较，沉默组异位子宫内膜间质细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞划痕愈合率显著降低(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-6771-3p与AXIN2存在靶向关系(P<0.01),miR-6771-3p能够负调控AXIN2 mRNA表达(P<0.01)。与空载体组相比，沉默组细胞中AXIN2蛋白表达显著升高，Wnt信号通路蛋白表达显著降低R428生产商(均P<0.01)。结论:在子宫异位内膜组织中miR-6771-3p呈高表达，miR-6771-3p通过靶向AXIN2基因影响WntImmune reaction信号通路转导，进而调控异位子宫内膜间质细胞的增殖和迁移。

目的:初步探究姜黄素(curcumin)抑制奥希替尼(Osimertinib)耐药的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer cells,NSCLC)细胞增殖和迁移的作用及机制,以及姜黄素对奥希替尼的增敏作用,为姜黄素与奥希替尼联合治疗奥希替尼耐药的非小细胞肺癌提供理论和实验依据。方法:采用浓度递增法在HCC827细胞系中构建奥希替尼耐药细胞株;采用MTT、平板克隆和TraBiogenesis of secondary tumornswell观察姜黄素与奥希替尼联用对奥希替尼耐药细胞株增selleck产品殖和迁移的影响;将姜黄素处理和不处理的奥希替尼耐药细胞株分别提取总RNA,RNA seq比较姜黄素处理和未处理细胞中的差异基因;RT-q PCR和Western blot检测姜黄素与奥希替尼联合作用于奥希替尼耐药细胞后铁死亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化;通过流式细胞术检测姜黄素与奥希替尼联合作用于奥希替尼耐药细胞后细胞内活性氧(ROS)水平的变化;通过透射电镜观察姜黄素与奥希替尼联合作用于奥希替尼耐药细胞后亚细胞结构的形态变化。结果:MTT结果显示,亲本敏感HCC827细胞奥希替尼的IC50为2.234×10~(-2)μM,奥希替尼耐药细胞的IC50为19.1μM,RI指数为854.97,提示成功构建奥希替尼耐药细胞株,命名为HCC827-OR;MTT实验、平板克隆实验和Transwell实验结果显示姜黄素与奥希替尼联用可显著抑制奥希替尼耐药HCC827-OR的增殖和迁移;RNA seq分析结果显示,与对照组相比较,姜黄素处理后可见189基因下调,79个基因上调,差异基因主要富集在铁死亡通路、MAPK signaling pathway、Protein digestion absorption和Flow shear stress and atherosclerosis四个信号通路;RT-q PCR和WeCX-5461采购stern blot验证结果显示,姜黄素显著上调HMOX-1(血红素加氧酶1)的表达,抑制铁死亡的关键基因GPX4(谷胱甘肽过氧化物酶)的表达,且呈浓度依赖性;与敏感株相比较,奥希替尼耐药细胞GPX4表达升高;姜黄素与奥希替尼联合后,HMOX-1、SAT1(精脒/精胺N1-乙酰基转移酶1)、FTL(轻肽铁蛋白)和SLC3A2(溶质载体家族3成员2)的转录水平升高,HMOX-1的蛋白表达水平升高,GPX4的蛋白表达水平降低;与空白对照组相比较,姜黄素与奥希替尼联合作用于奥希替尼耐药HCC827-OR后,细胞内ROS水平升高,电镜亚细胞结构显示线粒体体积明显减小,线粒体膜破坏,线粒体嵴减少或消失。结论:姜黄素可以增强奥希替尼耐药非小细胞肺癌细胞株对奥希替尼的敏感性;姜黄素能够调控铁死亡信号路;姜黄素通过调控铁死亡与奥希替尼协同抑制奥希替尼耐药非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移。

目的:穿支皮瓣已经成为修复各种原因造成的口腔颌面部大范围复杂组织缺损的主要手段。在临床实践中所需的皮瓣范围往往超过单一穿支血管所能达到的解剖分布区域,需要制备成包含多个穿支体区的跨区穿支皮瓣。而导致大型跨区穿支皮瓣远端出现部分坏死的最主要因素是皮瓣内部固有的血管结构局限,即choke血管。Choke血管区存在于供给皮肤血供的相邻穿支血管体之间,是相邻血管体的血管末梢形成的网络连接,其有效开放AG-221试剂的程度,是决定大型跨区穿支皮瓣远端能否获得充足血供的最为重要的因素。精准了解跨区穿支皮瓣不同choke区的开放程度及有效的血供支配范围,可以避免由于穿支皮瓣远端血供不足造成的组织坏死而导致的灾难性后果,进而提高移植皮瓣成活率。近年来,有关跨区穿支皮瓣choke血管区的研究主要集中在局部组织形态学的观察和部分细胞因子对choke区微小血管的生成和改建的影响。但对于制备移植后的跨区穿支皮瓣整体有效血供范围进行实时监测,以及从整体水平对不同choke区血管随时间变化而改建的基因转录与调控机制还没有明确认识。本研究通过建立大鼠背部跨区穿支皮瓣动物模型,应用便携式内窥镜、组织学及吲哚菁绿荧光造影等方法,对皮瓣有效供血区域以及choke区血管随时间变化的改建情况进行组织形态学及血流动力学研究;并利用转录组测序技术从整体水平上对不同时间点、不同choke区的基因转录情况和调控规律进行转录组学分析,进而揭示跨区穿支皮瓣制备后,可能参与不同choke区血管改建过程的相关分子生物学机制。研究方法:1、建立跨穿支体区皮瓣动物模型。于大鼠一侧背部保留髂腰动脉,切断并结扎肋间后动脉及胸背动脉,制备以髂腰动脉为血供的跨区穿支皮瓣。髂腰动脉与肋间后动脉相吻合区域为chokeⅠ区,肋间后动脉与胸背动脉相吻合区域为chokeⅡ区。2、利用便携式内窥镜对活体动物模型在不同时间点、不同choke区的血管生成及改建的变化趋势特点进行研究。3、分别在皮瓣制备后的第0、1、3、5天对chokeⅠNavitoclax纯度区和chokeⅡ区组织取材,进行HE染色,研究不同时间点、不同choke区血管生成及改建情况。进行CD34免疫组化染色,研究不同时间点、不同choke区血管管径及内皮细胞增殖变化情况;对不同时间点的chokeⅠ及chokeⅡ区血管密度进行单因素方差分析。4、跨区穿支皮瓣可视化有效血供范围及血流动力学研究。通过对跨区皮瓣动物模型建立后第0、1、3、5天进行颈内静脉插管,注入吲哚菁绿荧光造影,利用近红外手术荧光影像系统,对各组跨区穿支皮瓣有效血供范围动态变化进行可视化评价,对皮瓣在不同时间点的荧光造影显像面积进行重复测量方差分析。5、不同时间点的跨区穿支皮瓣chokeⅡ血管区的转录组学研究。利用Illumina高通量测序技术,对跨区穿支皮瓣制备后的0、1、3、5天,chokeⅡ区组织进行转录组测序,通过数据过滤,基因组映射,获得差异表达基因,并进行GO、KEGG富集分析及蛋白互作网络分析。6、不同时间点的跨区穿支皮瓣chokeⅠ血管区的转录组学研究。利用Illumina高通量测序技术,对跨区穿支皮瓣制备后的0、1、3、5天,chokeⅠ区组织进行转录组测序,通过数据过滤,基因组映射,获得差异表达基因,并进行GO、KEGG富集分析及蛋白互作网络分析。结果:1、成功建立以髂腰动脉为供血穿支的跨区穿支皮瓣动物模型。2、通过便携式内窥镜对活体动物模型不同choke区的血管进行观察,在术后早期chokeⅠ区血管管径出现扩张,而后出现迂曲并改建,与相邻穿支体区血管联通。这种扩张随观察时间延长而增强,同时伴有一定程度的血管生成。而chokeⅡ区在术后早期表现为大量毛细血管生成,随时间推移逐渐增强并相互吻合。ChokeⅠ区以血管扩张为主并伴有血管生成。ChokeⅡ区以血管生成为主。3、组织形态学研究HE染色组织学观察到chokeⅠ区的毛细血管在术后主要表现为血管扩张,随着观察时间的推移,其扩张程度呈上升趋势,并伴有血管生成。ChokeⅡ区的毛细血管在术后主要以出芽或套叠的形式表现为血管生成,随着观察时间的推移,新生血管密度逐渐增加。ChokeⅠ区血管扩张程度高于chokeⅡ区。通过CD34免疫组化染色研究发现,chokeⅠ区增殖的血管内皮细胞主要分布在扩张的血管壁上,血管密度随时间延长而增加。对chokeⅠ区不同时间点的血管密度进行方差分析统计分析,结果显示呈逐渐上升趋势,这种趋势在第1天和第3天之间更为明显。第0天与第1天结果比较P=0.035,第1天与第3天结果比较P<0.001,第3天与第5天结果比较P=0.002;差异都具有统计学意义。ChokeⅡ区血管内皮细胞的增殖主要体现在新生血管以及成管结构,且随观察时间的延长呈上升趋势。对chokeⅡ区血管密度进行方差分析,结果显示:第0天与第1天之间比较P=0.148,差异没有统计学意义。第1天和第3天结果比较P<0.001,第3天和第5天比较结果比较P<0.001,差异均有统计学意义。4、吲哚菁绿荧光造影对血流动力学的可视化研究髂腰动脉穿支血管在皮瓣内的供血方向由垂直皮瓣方向变为沿皮瓣长轴方向,且此种改变在术后第1天就出现,并随着观察时间的推移,沿皮瓣长轴的主要供血血管的数量及管径逐渐增加。皮瓣制备完成的即刻,choke I、chokeⅡ区的亮度均降低,choke I区的显像范围无明显变化,chokeⅡ区亮度及范围减弱程度比choke I区更为显著。第1天时,choke I区的亮度及热度较之前有所增加,chokeⅡ区显像仍微弱且范围较小。第3天时,通过chokeⅠ区的血流荧光显像程度明显增强,已经接近髂腰动脉分布区域;chokeⅡ显像范围增大,显像亮度有所改善,局部出现点片状热区。第5天时,chokeⅡ区亮度及热度基本与髂腰动脉分布区域一致。但chokeⅡ区远端仍不显像。对不同时间点皮瓣显像范围进行重复测量设计的方差分析,皮瓣显像面积百分比随观察时间的延长总体呈逐渐上升的趋势。第0天与第1天比较P=0.023,第1天与第3天比较P=0.001,差异均具有统计学意义。第3天和第5天比较P=1.00,差异无统计学意义。5、不同时间点chokeⅡ区的转录组分析。第1天组与对照组共有3721个差异表达基因,其中上调基因1851个,下调基因1870个;GO富集分析结果主要富集于前30个条目,主要包括:细胞外部分、细胞外间隙、炎症反应、白细胞迁移和趋化、中性粒细胞迁移和趋化、对细胞因子的反应、免疫反应等;KEGG富集分析结果主要集中在前30个通路,主要包括:细胞因子及其受体相互作用、PI3K-AKT、趋化因子、缬氨酸亮氨酸和异亮氨酸降解、细胞黏附分子(CAMs)、RAP1、JAK-STAT、造血细胞系、ECM受体相互作用、RAS、TNF、谷胱medial cortical pedicle screws甘肽代谢等信号通路。蛋白互作网络分析中Hub基因共84个。第3天组与对照组差异表达基因共有2292个,其中上调基因为1296个,下调基因为996个;GO富集分析结果主要富集于前30个条目,主要包括:细胞增殖及调节、细胞迁移、炎症反应、趋化、免疫反应及调节、血管生成、细胞表面、血管形态发生、血管发育等;KEGG富集分析结果主要集中在前30个通路,主要包括:细胞因子及其受体相互作用、破骨细胞分化、趋化因子、细胞分子黏附、PI3K-AKT、类风湿性关节炎、癌症途径、RAP1、TNF、白细胞经内皮细胞迁移、B细胞受体、RAS、Toll样受体等信号通路;Hub基因共有71个。第5天组与对照组的差异表达基因共有2818个,其中上调基因为1512个,下调基因为1306个;GO富集分析结果主要富集于前30个条目,主要包括:解剖结构发育、免疫反应及调节、生长发育、细胞外基质及间隙、炎症反应、细胞生物过程调节、细胞分化、对细胞因子的反应等;KEGG富集分析结果主要集中在前30个通路,主要包括:细胞黏附分子、细胞因子及其受体相互作用、PI3K-AKT、抗原处理和呈递、趋化因子、破骨细胞分化、造血细胞系、细胞外基质受体相互作用、多种微生物感染、细胞凋亡等信号通路;共有Hub基因73个。三个时间点共有的Hub基因为:Cxcl3、Aplnr、C5ar1、Cxcl9、Cxcl10及Cxcl11。三个时间点共有的差异表达基因为962个;相对表达量均位于前20的共有基因为:Hba-a3、Cxcl6、Ankrd1、Cxcxl3、Il-6及Obp2a。三个时间点显著富集排名前30位的共有GO条目为:细胞对化学刺激的反应、炎症反应、对外界刺激反应、生物过程正向调节及免疫系统过程,所涉及的基因包括:Cxcl3、Cxcl9、Cxcl11、Cxcl10、C5ar1等,共34个。6、不同时间点chokeⅠ区的转录组分析。术后第1天组chokeⅠ区与对照组相比较,共有2002个差异表达基因,其中上调基因1072个,下调基因930个;GO富集分析结果主要富集于前30个条目,主要包括:对脂质的反应、炎症反应、免疫反应、生物过程调节、对细胞因子的反应、细胞因子分泌调节、对含氧化合物的反应、对外部刺激的反应、免疫系统过程、细胞因子产生等;KEGG富集分析结果主要集中在前30个通路,主要包括:NF-κB、细胞因子与细胞因子受体相互作用、TNF、JAK-STAT、补体和凝血级联、RAP1、Toll样受体、Fox O、造血细胞系等通路;共有Hub基因51个。术后第3天组与对照组差异表达基因共有2369个,其中上调基因1173个,下调基因1196个;GO富集分析结果主要富集于前30个条目,主要包括:细胞生物黏附、质膜部分、免疫过程、细胞迁移、炎症反应、细胞增殖和调节等;KEGG富集分析结果主要集中在前30个通路,主要包括:细胞黏附分子、细胞因子-细胞因子受体相互作用、补体和凝血级联、RAP1、白细胞经内皮细胞迁移、趋化因子、PI3K-AKT、造血细胞系、B细胞受体、缬氨酸亮氨酸和异亮氨酸降解、cAMP、TNF信号通路等;共有Hub基因71个;术后第5天组与对照组差异表达基因共有1600个,其中上调基因为754个,下调基因为846个;GO富集分析结果主要富集于前30个条目,主要包括:生物过程调控、细胞及生物黏附、多种组织和细胞生长发育、免疫反应、炎症反应、细胞外部分及细胞分化等;KEGG富集分析结果主要集中在前30个通路,主要包括:细胞黏附分子、抗原处理和呈递、缬氨酸亮氨酸和异亮氨酸降解、细胞因子及其受体相互作用、多种微生物感染、自身免疫性疾病、TNF等信号通路;共有Hub基因73个。三个时间点共有的Hub基因为:Ccl19、Cxcl13、Cxcl10、Cck、Ptgfr。三个时间点共有的差异表达基因为289个;相对表达量均位于前20的共有基因为:Hba-a3、LOC103689996、Cyp2e1、RF00001、Myl2、Rnase12及Chga。三个时间点显著富集排名前30位的共有GO条目为:炎症反应、生物过程正向调节、对外界刺激的反应、免疫系统过程及防御反应,所涉及的基因包括:Ccl19、Cxcl10、Ngfr等,共12个。结论:1、大鼠跨区穿支皮瓣模型中,chokeⅠ区及chokeⅡ区血管病理生理变化不同:chokeⅠ区血管主要表现为扩张,并伴有一定程度的血管生成;chokeⅡ区血管主要表现为血管生成,在第3天已获得了基本的血运重建。2、通过对chokeⅠ区的转录组分析,Cck及Ptfgr可能对chokeⅠ区血管扩张的调节起到重要作用;Ccl19及Cxcl13可能在chokeⅠ区的血管生成起到重要作用;Cxcl10可能对血管生成的调节及血管结构改建重塑方面起到重要作用。3、通过对chokeⅡ区的转录组分析,Cxcl3和Aplnr对跨区穿支皮瓣chokeⅡ区的血管生成与改建可能起到重要的正向调节作用;Cxcl9、Cxcl10、Cxcl11及C5ar1对跨区穿支皮瓣chokeⅡ区的血管生成与改建可能起到负向调节作用。

目的 运用网络药理学研究复方金果胃康散治疗胃癌前病变（PLGC）的作用机制。方法 借助TCMSP数据库筛选复方金果胃康散的活性化selleck化学学成分，并通过Swiss Target Prediction数据库检索各成分并预测靶点。E-616452通过GenCards数据库获取PLGC的靶点。通过String数据库蛋白互作网络（PPI）和Cytoscape3.7.1软件绘制“药物-靶点”网络，采用Metascape平台进行GO、KEGG富集分析，获得复方金果胃康散治疗PLCG作用通路。结果 获得复方金果胃康散活性成分85个，作用靶点338个。主要活性成分为槲皮素、β-谷甾醇等。PPI筛选后得到关键蛋白Egg yolk immunoglobulin Y (IgY)甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（AKT1）等。KEGG通路涉及微小核糖核酸（miRNA）通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶（PI3K/AKt）信号通路等。结论 初步验证了复方金果胃康散治疗PLCG的作用机制。

目的:构建不同剂量单次照射下放射性心脏损伤小鼠模型,观察心脏组织病理形态学变化,测定心脏组织中的TLR4、NF-κB、NLRP3、IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α的表达水平,探讨TLR4、NF-κB、NLRP3调控的细胞焦亡与放射性心脏损伤的关系。方法:建立放射性心脏损伤小鼠模型,同样条件下饲养的C57BL/6小鼠(雌性)30只,随机分成3组,每组10只,为对照组、实验1组和实验2组。对照组不做任何处理,实验组用生物学X射线辐照仪以不同剂量照射小鼠心脏部位(剂量率100 c Gy/min),照射野1 cm×1 cm。实验1组照射剂量为2Gy,实验2组照射剂量为20Gy。单次照射后26周处死所有小鼠取心脏组织进行病理切片染色,用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌细胞、成纤维细胞及细胞间质病理形态学改变。用实时荧光定量聚合酶链式反应(QPCR)法检测心脏组织中炎症因子IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-αm RNA的表达水平;用蛋白质免疫印记法(Western blot)检测心脏组织中TLR4、NF-κB、NLRP3相对表达水平。结果:1、正常心肌细胞长条形排列,排列较整齐,细胞核位于细胞中央,呈椭圆形,淡染,为蓝紫色,细胞质染为红色,染色均匀。成纤维细胞呈梭形,细胞核长条形位于细胞中央,深染,为蓝色,细胞质染为红色,血管结构完整。照射后26周,心肌细胞排列紊乱,欠规整,间隙增宽,心肌细胞核轻度固缩,染色加深,成纤维细胞增多,部分断裂,可见少量炎性细胞,以20Gy照射组最为严重。2、与对照组比较:放射线照射后26周各照射组小鼠心肌组织中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的m RNA表达水平均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与2Gy组比较:20Gy组IL-6、TNF-α、IL-10的m RNA表达水平均明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);而两个照射组间IL-1βm RNA的表达无明显差异,无统计学意义(P>0.05)。3、与对照组比较,放射线照射后26周各照射组小鼠心肌组织中TLR4、NF-κB、NLMedial orbital wallRP3的相对表达水平明显升高,以20Gy组为著,差异具有统计学意义(P<0.05)。两个照射组组间比较,2Ipatasertib IC500Gy组TLR4、NF-κB的表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);两个照射组间NLRP3的表达水平无明显差异,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1、不同剂量单次放射线照射小鼠心脏,引起心肌细胞形态学改变,照射剂量越高心肌细胞形态改变越明显,MC3 IC50表明心脏损伤的严重程度与剂量有关。2、放射线照射可引起心肌组织中TLR4、NF-κB、NLRP3、IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α的表达上调,且长时间存在,可能参与了放射性心脏损伤的发生和发展过程。TLR4、NF-κB、NLPR3介导的细胞焦亡与放射性心脏损伤有关,不同剂量照射后的小鼠心脏组织中出现细胞焦亡和炎症反应的程度各不相同。

目的 探究学龄期淋巴瘤患儿父母感知脆弱与患儿心理行为的关系及其影响因素。方法 采用便利抽样法，选择2019年1月-2021年12月我院收治的100例学龄期淋巴瘤患儿及其父母为研究对象。统计一般资料问卷调查基础信息，采用父母感知脆弱程度量表、艾式儿童行为量表评价患儿父母感知脆弱水平、患儿心理行为，采用Pearson相关性分析学龄期淋巴瘤患儿父母感知脆弱与患儿心理行为的相关性，采用单因素分析、多因素Logistic回归分析筛选学龄期淋巴瘤患sex as a biological variable儿父母感知脆弱的影响因素。结果 患儿父母感知脆弱总分为(12.58±3.05)分，感知脆弱一般患儿父母55名，感知脆弱高水平患儿父母45名；患儿心理行为评分为(83.49±17.28)分；Pearson相关性分析结果显示，患儿父母感知脆弱总分、维度评分与患儿心理行为呈正相关性(r=0.269、0.253、0.249,P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示，患儿父母感知脆弱的影响因素为患儿病程<6个月、临床分期Ⅱ～Ⅲ期、独生子女、并发症≥2种、心理行为异常，父母焦虑情绪、未接受护理宣教、社会支持低水平、自我效能感低水平(PGSK126体外<0.05)。结论 学龄期淋巴瘤患Protein Tyrosine Kinase抑制剂儿存在心理行为异常，患儿父母感知脆弱水平偏高，且父母感知脆弱与患儿心理行为呈正相关性，其影响因素复杂，临床应以此优化护理方案。

目的 探索肝细胞生长因子(HGF)联合B型钠尿肽(BNP)对慢性心力衰竭(CHF)患者中长期死亡事件的预测价值。方法 回STM2457作用顾性分析2015年8月至2017年9月就诊安徽医科大学第一附属医院心内科CHF患者131例，根据随访12、24、36个月不同时间节selleck Alpelisib点全因死亡事件是否发生分为12个月生存组119例和12个月死亡组12例；24个月生存组96例和24个月死亡组35例；36个月生存组89例和36个月死亡组42例，采用ROC曲线评估各指标对12、24、36个月死亡危险因素的预测效能。结果 12个月bioactive dyes生存组BNP、HGF明显低于12个月死亡组(P<0.05)。24个月生存组年龄、BNP、HGF明显低于24个月死亡组(P<0.05,P<0.01)。36个月生存组BMI明显高于36个月死亡组，BNP、HGF明显低于36个月死亡组(P<0.01)。HGF、BNP是CHF患者随访12个月死亡的独立危险因素(P<0.05),二者联合预测12个月全因死亡的ROC曲线下面积(AUC)为0.786(95%CI:0.676～0.897)。年龄、HGF、BNP是CHF患者随访24个月死亡的独立危险因素(P<0.05,P<0.01),三者联合预测的AUC为0.754(95%CI:0.654～0.854);HGF、BNP、BMI是CHF患者随访36个月死亡的独立危险因素(P<0.05,P<0.01),三者联合预测的AUC为0.748(95%CI:0.704～0.871)。结论 HGF、BNP是CHF随访12、24、36个月全因死亡事件的独立危险因素。HGF联合BNP对预测CHF患者中长期死亡事件的价值更高。