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目的 探讨新型喹唑啉酮类化合物9050对不同亚型GABA_A受体功能的影响，并与其结构类似物甲喹酮（MTQ）比较；评价其对睡眠障碍、癫痫等潜在适应症的影响。方法www.selleck.cn/products/Lapatinib-Ditosylate 在爪蟾卵母细胞上表达不同亚型GABA_A受体，应用双电极电压钳技术评价9050的作用特点；连续3 d sc给予利血平1 mg·kg~(-1)构建小鼠抑郁致睡眠障碍模型，通过脑电/肌电记录评价9050药效；构建小鼠海人藻酸癫痫模型，评价9050的抗惊厥活性。结果 (1)在EC_8GABA存在下，9050对α_1β_2γ_2,α_2β_2γ_2,α_4β_2δ和α_6β_2δ受体有变构调节作用，其中，与突触外受体相比，9050对突触内受体，尤其是对α_1β_2γ_2受体亲和力更强，效价更高，EC_(50)为0.3μmol·L~(-1)；与突触内受体相比，9050对突触外受体，尤其是α_6β_2δ受体调节效能更高，最大调节效能可达400%以上；(2)在没有GABA存在下，9050均可直接激动突触内和突触外受体，产生抑制性突触后电流；(3)在抑郁致睡眠障碍模型中，90Apoptosis抑制剂50可提高睡眠稳定性，增加睡眠深度，降低睡眠碎片化；(4)在海人藻酸癫痫模型中，9050可延长阵发性痉挛和强直性痉挛潜伏期，降低惊厥发生次数和平均发作等级。结论 9050兼有对突触内外受体直monitoring: immune接激动作用和变构调节作用，且具有改善抑郁致睡眠障碍和抑制海人藻酸诱导癫痫发作的潜力。

甲状腺未分化癌(Anaplastic Thyroid Carcinoma,ATC)具有恶性程度高、临床进展迅速、五年生存率低等特点,成为临床治疗的难点问题。许多科研人员致力于为此寻找有效的诊疗策略,纳米医学的发展与进步为ATC患者带来了新的希望。基于晚期ATC手术无法完全切除且对于放化疗不敏感等问题,单一的治疗方法无法满足临床需求。因此,多种治疗方法协同及诊疗一体化成为ATC研究发展的必然趋势。为迎合ATC诊疗现状,改善治疗方案特异性差、治疗效果难以评估能问题,本研究研制出一种能够靶向ATC肿瘤的载SCD1金属-多酚纳米粒,该纳米粒能够靶向肿瘤并诱导肿瘤细胞铁死亡,还能够作为声敏剂在低功率聚焦超声(Low Intensity Focused Ultrasound,LIFU)的作用下,激发SDT作用,协同铁死亡和SDT杀伤ATC肿瘤细胞。除此之外,该纳米粒还具有双模态显像功能,有助于肿瘤进展情况及治疗效果的全面评估。目的:制备IR825修饰的载SCD1抑制剂FeⅢ-单宁酸(Tannic Acid,TA)纳米粒,检测其基本理化性质,并通过体内及体外实验对其治疗ATC效果及成像能力进行评估。方法:将六水合氯化铁(FeC13·6H2O)、TA及MF-438混合,采用磁力搅拌的方法合成FTMP纳米粒,并在纳米粒表面修饰IR825。对其基本理化性质进行检测,包括形态、粒径、电位、稳定性;对其基本性能进行检测,包括包封率、载药率、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)释放及双模态成像能力。对其诱导铁死亡和激发Lapatinib价格SDT能力进行检测,包括·OH和1O2等活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)产生。对于体外实验,采用人ATC肿瘤BHT-101细胞系作为实验组,通过细胞增殖活性检测(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法、荧光共聚焦显微镜及流式细胞术进行纳米粒安全性、吞噬、毒性、LIFU治疗效果、铁死亡诱导能力检测。对于体内实验,采用昆明小鼠进行生物安全性检测,并对BALB/c nude ATC荷瘤鼠进行肿瘤治疗效果评估。通过荧光及MRI成像等方式评估纳米粒双模态成像能力。结果:成功制备了载MF-438并修饰了IR825的FTMP-IR纳米粒。该纳米粒粒径均一、电位为负电,分散性及稳定性好,MF-438及IR825包封率满意。FTMP-IR纳米粒在GSH溶液中能够拆解,并释放Fe3+与MF-438,其携带的IR825在LIFU激发下具备极佳的ROS产生能力。体PARP抑制剂内外实验证实该纳米粒具备良好的肿瘤靶向能力,进入到肿瘤细胞后,释放的Fe3+及MF-438能够诱导ATC肿瘤细胞铁死亡。联合LIFU照射后,纳米粒能够产生大量ROS,这种爆发式的ROS增多超过肿瘤细胞自身Immune biomarkers代偿能力,造成肿瘤细胞膜损伤,显示出极佳的肿瘤杀伤效果,能够完全根除肿瘤组织。在双模态成像方面,FTMP-IR纳米粒靶向能力决定了其在肿瘤部位集中并显影,荧光及核磁共振(Magnetic resonance imaging,MRI)双模态成像形式能够弥补单一成像方式的缺点,为肿瘤诊断和治疗评估提供更多宝贵信息。结论:本研究制备出的FTMP-IR纳米粒,能够靶向ATC肿瘤细胞,诱导肿瘤细胞铁死亡并在LIFU作用下激发SDT效果,其治疗效果显著,能够根除肿瘤。同时,该纳米粒具备荧光及MRI双模态成像功能,有助于实现ATC肿瘤诊疗一体化。

目的 探讨马来酸麦角新碱联合缩宫素对预防自然分娩产妇产后出血及子宫复旧的影响。方法 选择永丰县人民医院于2018年1月—2020年12月期间收治的100例自然分娩selleck合成产妇为研究对象，按照住院先后顺序分为2组，每组各50例，其中对照组50例患者选择缩宫素治疗，观察组50例患者选择联合马来酸麦角新碱治疗，就2组临床疗效、出血治疗指标、凝血功能、子宫复旧指标、不良反应AZD2281 IC50发生率进行对比。结果 观察组临床疗效高于对照组（P<0.05）；治疗后，观察组凝血酶原时间（prothrombin time,PT）、活化部分凝血活酶时间（activeated partial thromboplasting time,APTT）水平高于对照组，且纤维蛋白原（fibrinogen,FIB）和D-二聚体（D-dimer,D-D）水平低于对照组（P<0.05）；观察组产后2 h、12 h、24 h出血量均少于对照组（P<0.05）；观察组产后第1天、第3天、第5天宫底高度均低于对照组，止glucose homeostasis biomarkers血时间、住院时间、恶露持续时间、宫缩持续时间均短于对照组（P<0.05）;2组不良反应发生率对比差异无统计学意义（P>0.05）。结论 在自然分娩产妇中应用马来酸麦角新碱联合缩宫素，可明显减少产后出血，促进子宫复旧，缩短产后康复时间，安全性高。

抑郁症作为一种常见的精神障碍,它会影响一个人的思想、行为、感觉和幸福感。抑郁症是当今世界范围内普遍存在的一种疾病,对人类的生存和发展造成了很大的危害。同时,伴随着社会的持续发展和进步,人们在学习和工作中承受的压力也在变大JQ1,该疾病的发病率上升,并且还出现了年轻化的趋势。在我国抑郁症患者中,青少年、大学生人群所占的总比例逐年递增。面对如此严峻的态势,我们必须对抑郁症给予足够的重视。然而,传统的抑郁症临床诊断的方法大都是通过专业医生问诊与心理量表测试结合起来,对医师的专业水平要求较高,而且这种方式受临床医生和患者的主观因素的制约。另外,目前专业医师的数量也难以满足日益增长的患者人数。这些问题导致抑郁障碍的快速诊断和大规模筛选造成了困难,而如果能在早期发现并识别到抑郁,可以直接减少与抑郁症相关的社会和经济压力。基于此,研究一种准确、客观、有效的抑郁症自动识别方法以辅助抑郁诊断具有重要的研究价值和社会效益。由于语音数据具有采集方便简单、成本相对低廉、隐私性较好、非侵入的特点,其在现实世界的应用中显示了较大的潜力。因此,本文首先进行了基于语音的单模态抑郁检测,随后引入了文本探索了多模态融合的抑郁检测的方法。本文的主要研究内容可以总结为如下两个方面:(1)抑郁症临床访谈的时长可以达到二十分钟或更长。由于梯度爆炸、梯度消失问题的存在,使用传统的RNN方法无法很好地捕获时间序列中的长程依赖关系。针对上述问题,本文提出了一种基于Transformer模型与卷积神经网络相结合的语音抑郁检测方法,避免了无法捕获长程依赖的问题,帮助模型更好地完成抑郁检测任务。此外,针对抑郁语料库规模较小的问题,使用了数据增强的办法对样本数量进行了扩充,从而提高了系统的性能。(2)由于单模态数据存在信息量不足且易受外界因素干扰的特点,特别是当语音存在噪声时,抑郁检测系统的鲁棒性和准确性往往不能令人满意。而文本数据可以很好地与音频互补,获得丰富且互补的特征信息,因此,引入文本数据,探索语音与文本相结合的多模态抑郁检测方法。在第一个工作中,使用了Transformer模型来捕获长程依赖,然而Transformer对时间计算和空间存储的要求仍然较高,复杂度达到了O(n~2),因此在面对较长输入时,Trchronic otitis mediaansformer仍然无能为力。针对上述存在的问题,本文提出了一种基于Transformer改进的多模态融合的抑郁检测模型,以克服自注意力机制的二次复杂度。以上研究内容在DAIC-WOZ数据集上进行了实验,实验结果验证了本文所提出的方法分别在单模态和多PS-341模态抑郁检测任务的有效性。

植物和生物胁迫因子的相互作用是自然界普遍存在的现象。与植物对环境(非生物)的反应不同,植物和生物胁迫因子的相互作用会产生实时的信息交流和建立复杂的分子信号调控网络。本研究将陆地棉和烟草对病虫害互作的转录数据,与公共数据库中植物与生物逆境相互作用的转录数据进行了深入整合和利用,构建了差异表达的基因图谱并挖掘了植物的转录因子、抗性基因和调控网络,并解析宿主防御系统对生物逆境响应的分子机理,建立了开放和免费的数据库。同时,本研究对鉴定到的陆地棉防御生物逆境的一个关键基因——编码谷氨酸受体蛋白的基因进行了功能解析,创制了一批有育种价值的新型抗病虫棉花材料。主要结果如下:1.构建了植物与生物逆境互作转录图谱通过RNA-seq测序产生的陆地棉和烟草对病虫互作的转录数据联合公共数据库共收集到关于拟南芥、二穗短柄草、油菜、陆地棉、大豆、大麦、蒺藜苜蓿、烟草、水稻、高粱、番茄、马铃薯、小麦、玉米14种植物共计3207个与多种生物逆境相关的转录文库,原始数据33.09 TB。构建了各个植物响应生物逆境的表达基因矩阵,全面表征了植物参与典型防御通路功能基因表达谱,不同植物防御之间的相关性,表明了双子叶和单子叶植物在防御基因上表达的差异性。鉴定出91个核心直系同源组,进一步展示出植物具有的广谱性防御功能。2.鉴定了植物防御过程的转录因子调控网络、R基因和共表达网络研究发现,在植物防御过程中差异表达基因集所含的转录因子家族比例较低(8.19%),但是可以调控大量的下游基因。我们筛选出了在不同植物响应生物胁迫的差异的8个转录因子,并通过表达矩阵来构建转录因子家族的调控网络。接着,鉴定了R基因在植物中的分布和进化,发现大量的R基因参与了植物防御的过程,并鉴定出JNJ-42756493 IC50具有潜在广谱抗性的APSK基因家族。最后通过植物在生物逆境下的表达谱构建了不同植物的共表达网络,鉴定到植物在生物逆境状态下的4个核心直系同源基因家族及其相关网络,也表明了其通过植物激素信号,MAPK信号通路,苯丙素生物合成通路参与了植物的防御系统。3.构建了植物-生物逆境相互作用的开放数据库本研究将差异表达的基因图谱中对宿主防御反应的响应等参与防御功能的差异表达基因进行可视化。最终,我们建立了名为Immunity Landscape of Plant&Biotic stress database(ILPB,http://jinlab.hzau.edu.cn/ILPB/)的开放数据库。该数据库包含了14种植物,111种不同类型的生物逆境,57个植物转录因子家族,TNL、CNL、NL三种R基因类型的分布和表达,11.1万个网络基因网络信息。数据库具有:1.跨物种间同源基因的查询;2.对植物参与不同生物逆境的基因的功能查询并展示基因集的富集通路;3.展示鉴定到的植物转录因子家族成员和调控网络;4.植物的R基因的鉴定和信息查询;5.查看植物防御不同生物逆境的共表达网络和枢纽基因等功能。4.探究了陆地棉谷氨酸受体基因家族在生GDC-0068 molecular weight物胁迫中的功能本研究通过对植物与生物胁迫互作的转录图谱的挖掘分析,鉴定到一个受WRKY调控的差异表达基因——谷氨酸受体(GhGLR),并利用生物信息学鉴定到41个陆地棉的GhGLRs家族成员、分析了GhGLRs家族的进化和在生物逆境中的表达,发现第一、三亚族的A基因亚组和D基因亚组存在同源基因表达谱图相似并参与了棉花防御棉铃虫和斜纹夜蛾的过程。利用陆地棉转基因技术对其家族进行了突变体库的创制,研究得到135株独立的基因编辑转基因株系和30株过表达转基因株系。通过对突变体的研究,表明了GhGLRs在陆地棉中参与损伤信号向相邻叶片的传播并影响茉莉酸浓度,鉴定了GhGLRs定位于细胞膜上并表明在0.1m M浓度的谷氨酸溶液的作用下GhGLR5基因功能缺失进而降低了Ca~(2+)向胞内的流速,发现了GhGLR5基因功能缺失降低了陆地棉对黄萎病和斜纹夜蛾的抗性。综上所述,本研究利用大规模转录数据构建了跨物种之间响应生物逆境的差异表达基因图谱并分析了植物的转录因子、抗Aeromonas veronii biovar Sobria性基因、以及调控网络对宿主防御反应的响应,进一步建立了植物防御生物逆境领域中开放的数据库(ILPB)。同时,对陆地棉防御生物逆境相关的谷氨酸受体蛋白基因家族进行了鉴定,创制了家族突变体库,并利用突变体解析了谷氨酸受体基因通过Ca~(2+)信号与茉莉酸相关通路来参与陆地棉对黄萎病和斜纹夜蛾的防御。总而言之,本研究促进了植物防御生物逆境广谱抗性的研究,加深了相关研究对数据的利用,创制了一批有育种价值的抗病虫棉花材料,推动了植物在生物逆境防御方面的研究。

目的 基于转录组RNA测序筛选转化生长因子β(transforming growth factor-beta, TGF-Blebbistatinβ)刺激的成纤维细胞与正常成纤维细胞的差异mRNA。方法 对正常人成纤维MRC-5细胞和经20 ng/mL TGF-β刺激24 h后的MRC-5细胞进行转录组RNA测序，筛选出两组之间的差异表达基因(DEGs),对DEGs进行生物信息学分析，包括基因功能(GO)、京都基因百科全书(KEGG)富集分析、蛋白质相互作用网络分析(PPI)以及相关基因对肿瘤生存预后的影响。结果 筛选出在33 692个基因中差异表达的mRNAs共161个in vivo immunogenicity，其中上调39个，下调122个；GO分析表明，DEGs主要富集的生物学过程包括核苷酸生物合成、代谢和神经元凋亡、坏死等过程；KEGG通路富集发现这些信号主要涉及核苷酸生物合成过程，核苷磷酸代谢过程，神经元凋亡等过程，其中核苷酸生物合成在6条信号通路中均被富集到；利用TCGA数据库对膀胱癌(BLCA)进行生存分析发EGFR抑制剂现TGFB1I1、HYOU1和CAT基因同时高表达时，与患者较差预后显著相关。结论 mRNA在TGF-β刺激后的成纤维细胞和正常成纤维细胞中存在表达差异，筛选出在BLCA病人中表达的TGFB1I1、HYOU1和CAT,有望作为患者的预后标志物。

制备一种荞麦糖肽（buckwheat glycopeptide，BG）缓释https://www.selleck.cn/products/byl719.html脂质体，提高荞麦糖肽的生物利用度。本研究首先对制备所得的BG进行稳定性分析，随后利用反向蒸发法制备荞麦糖肽脂质体（buckwheat glycopeptide woodchuck hepatitis virusliposomes，BGL），经响应面试验对包埋工艺进行优化，并探究其稳定性、体外缓selleckchem释特性、α-葡萄糖苷酶（α-glucosidase，AGase）抑制活性和抗氧化活性。结果表明：温度（20～80 ℃）对BG的活性影响较小，碱性条件下BG易失活。从五种磷脂中筛选出蛋黄卵磷脂制备BGL，响应面优化工艺条件为磷脂与胆固醇质量比为4.2:1，脂药比为7.5:1，水相体积为1 mL，此条件下，BGL包埋率为72.64%。BGL对高温（100 ℃）环境不耐受，在短时间（1h）内具有广谱pH（2～10）稳定性，反复冻融5次对其渗漏率无显著影响（P＞0.05）。BGL在体外模拟胃、肠体系中表现出良好的缓释特性，24 h累计释放速率分别为（84.50±2.30）%和（60.17±1.42）%。脂质体包埋体系的建立有利于提高BG的稳定性，并对其AGase抑制和抗氧化活性表现出良好的保护作用，为荞麦糖肽脂质体开发应用提供理论依据。

目的:1.大黄素已被证明具有多种药理活性。然而,大黄素也被报道在高剂量或长期使用下会引起肾毒性,其潜在的毒性机制尚未完全披露。2.本研究旨在探讨氧化应激和铁死亡在大黄素诱导肾脏毒性中的作用。找到作用靶点Notch1,使用激动剂激活Notch1信号通路增强抗氧化能力,对抗大黄素诱导氧化应激损伤和铁死亡现象,缓解其肾毒性,为其在临床应用时减少毒性提供安全性评价,也为预警类似中药的肾毒性提供参考。方法:1.动物分组给药:将BALB/c小鼠随机分为空白对照组(CON组)、大黄素低剂量组(0.4 g/kg)、中剂量组(0.6 g/kg)、高剂量组(0.8 g/kg),每个组别各6只,腹腔注射药物(对照组使用同等体积的生理盐水),一日一次,连续注射14天,期间观察小鼠的一般情况变化。2.检测小鼠肾功能及病理学改变:采用眼球取血法,检测小鼠genetic background血清中BUN,SCr指标水平。处死小鼠后,对小鼠肾脏进行称重,计算小鼠相对肾脏重量指数,并采用HE染色法观察小鼠肾组织病理损伤。3.培养NRK-52E细胞:用MTT和LDH法检测不同浓度大黄素(0,40,80,160,320 mmol/L)作用24小时对NRK-52E细胞活性的影响。4.检测小鼠肾脏及NRK-52E细胞内的氧化应激、脂质过氧化、铁离子水平及PTGS2基因表达:采用专项试剂盒SOD、GSH、ROS、JC-1等评价小鼠肾脏氧化应激的水平;MDA、LPO等检测脂质过氧化水平;铁离子测定以及其他相关指标的检测。5.采用Western blot和q RT-PCR法检测不同浓度大黄素处理小鼠肾脏与NRK-52E细胞中Notch1、c-Notch1、Hes1、Akt、p-Akt、t-Nrf2、HO-1、NQO-1、GPX4、p53、n-Nrf2等蛋白的活性水平和基因表达水平。6.采用Jagged1预处理激活Notch购买IACS-0107591、SC79预处理激活Akt或t-BHQ预处理激活Nrf2后检测大黄素对NRK-52E细胞活力、氧化应激、脂质过氧化、铁离子指标及相关蛋白表达水平和基因表达水平的影响。结果:1.大黄素可显著Laduviglusib浓度上调肾组织内的BUN、SCr、MDA、LPO和Fe~(2+)水平,降低SOD和GSH表达,诱导小鼠肾脏病理损伤。2.大黄素可降低NRK-52E细胞活力,促进LDH释放,诱导细胞内产生活性氧、脂质过氧化物,促进铁累积,并造成线粒体膜电位(ΔΨm)去极化现象。3.大黄素通过降低Notch1/Nrf2/GPX4通路轴的活性,使肾脏抗氧化能力减弱,促进细胞内氧化应激和铁死亡现象发生,最终诱导肾脏毒性。4.通过Jagged1预处理激活Notch1、SC79预处理激活Akt或t-BHQ预处理激活Nrf2后均可减弱大黄素对NRK-52E细胞的毒性作用、氧化应激、脂质过氧化、线粒体损伤和铁死亡现象。结论:研究表明,大黄素会抑制Notch1/Nrf2/GPX4信号通路上的抗氧化系统,并通过ROS介导的铁死亡诱导肾脏损伤。而Notch1或Nrf2的激活可以逆转大黄素诱导的肾脏毒性,结果提示Notch1或Nrf2可能是临床实践中大黄素诱导肾脏损伤的潜在治疗靶点。

未知功能结构域蛋白家族(DUFs)是真核生物中的一系列功能亟待解析的蛋白家族。随着研究的开展,现已发现一些DUFs在植物生长发育调控和非生物胁迫应答等方面具有重要作用。DUF677家族是一个植物中特有的未知功能蛋白家族。本研究采用多种生物信息学分析方法对OsDUF677家族的结构特点和功能进行预RP56976测,并以CRISPR/Cas9编辑Os U496A(OsDUF677.2)水稻株系为实验材料,对OsU496A的功能进行研究。主要结果如下:(1)7个OsDUF677家族成员(OsDUF677www.selleck.cn/products/lee011.1-OsDUF677.7)按系统进化树可分为三组。Ⅰ 组的 OsDUF677.2、OsDUF677.6 和Ⅲ组的OsDUF677.4和 OsDUF677.7 在水稻籽粒和根系中表达量较高;基因共表达网络的分析表明,OsDUF677家族基因可能在水稻籽粒发育调控与非生物胁迫应答方面有重要的功能。进一步构建蛋白互作网络研究发现,OsDUF677.2、OsDUF677.4、OsDUF677.6和OsDUF677.7可能参与盐胁迫下 Na+和 K+稳态的维持、水稻根系构型的改变及激素调节等过程。综合生信分析结果,推测OsDUF677家族蛋白在水稻根系发育、激素调控和逆境应答等方面具有重要作用。(2)OsU496A编辑水稻株系在株高、剑叶长度和穗长上较野生型(WT)显著减小;在有效分蘖数和每穗粒数两个产量性状上,OsU496A编辑水稻株系也有着显著减小的趋势。而对籽粒性状的研究表明,Os U496A编辑水稻颖壳表皮细胞的增大导致了籽粒长、宽的增长,进而使得千粒重显著大于WT,揭示OsU496A主要通过调控水稻籽粒的发育进而影响水稻产量。(3)Os U496A编辑水稻株系幼苗根系的各表型指标观测结果表明,在总根长和根尖数两个指标上,OsU496A编辑水稻株系较WT显著减小。进一步分析幼苗根系的分生区、伸长区和成熟区细胞形态发现,OsU496A编辑水稻株系分生区的细胞长度和宽度较WT都有极显著地减少,细胞数目也有所减少;伸长区和成熟区的细胞宽度也都显著减小。根系表型和细胞形态和数目的变化,说明OsU496A参与了水稻幼苗根系的生长过程,且可能是通过调控细胞的生长来影响根系的生长。(4)OsU496A编辑水稻株系幼苗根系内源IAA含量测定结果表明,u496a-74和u496a-79两个株系幼苗根系的内源生长素含量显著高于WT。外源NAA处理实验表明,OsU496A编辑水稻株系在更低浓度的NAA处理时,根数、总根长、最长根长等形态指标得到促进。此结果说明对于OsU496A编辑水稻株系,NAA处理的最适浓度更低,对NAA的处理更加敏感。因此,在生长素调控水稻幼苗根系生长发育的过程中,OsU496A可能具有负调控的作用。(5)OsU496A和E3泛素连接酶OsARI2的亚细胞定位结果显示OsU496A定位于细胞膜和细胞核,OsARI2定位于细胞核。此结果推测OsU496A与OsARI2有空间定位的重叠。综上所述,作为OsDUF677家族成员之一,OsU496A很可能参与了水稻籽粒发育过程和幼苗根系生长过程的调控。以上结果可为OsU496A功能的解析提供思路,并Microbiology education为探究水稻籽粒发育调控机理和生长素调控根系发育的机制提供植物材料。

已有研究表明LRR(leucine-rich repeat)家族蛋白在植物中可以通过蛋白互作的方式进行信号传递,参与植物的各种生物或非生物胁迫,调控植物生长发育。通过前期研究,我们利用一个矮LXH254小鼠化、早衰突变体ypd1首次证明YPD1基因编码一个未知功能的LRR蛋白,而不是数据库中注释的过氧化物酶家族蛋白,由此我们重新命名该蛋白为LRR-Like1(LRRL1)。作为一个从未被注释的新蛋白,其结构与已知的LRR家族蛋白也存在显著差异,包含14个典型LRR结构和一个未知功能的N段结构,鉴于LRR家族蛋白在植物逆境响应中的重要作用,本研究拟对该蛋白的结构与功能开tick-borne infections展更为深入的探索。通过保守功能结构预测,我们发现YPD1主要由信号肽、跨膜区以及LRR结构组成。为了找到确切的功能区,我们对YPD1的信号肽以及跨膜结构域进行了筛选和验证。基于LRR家族在蛋白互作中的重要功能,我们以YPD1为诱饵蛋白,对水稻幼苗的c DNA文库进行互作筛选,并通过体内外试验确定其准确性,进一步探索YPD1的潜在功能,论文的主要结果如下:1.信号肽序列及功能的筛选和验证。在对该基因及其它物种中同源基因的信号肽编码序列的预测与分析的基础上,我们通过一系列融合蛋白的构建和荧光观察,首次证明YPD1 N端前80个氨基酸具有信号肽的功能,与数据库预测结果存在较大差异。2.跨膜结构功能验证。由于YPD1定位于叶绿体膜上,结构预测存在跨膜区,但具体的序列并不清楚,在序列分析的基础上,我们构建了连续突变的融合蛋白并转化水稻原生质体,结果表明,YPD1 N端105至163氨基酸处存在单向双跨膜结构。3.不同的C端结构影响N端信号肽定位。实验过程中我们发现,YPD1 N端信号肽后面融VX-765采购合的C端结构不同会影响融合蛋白的亚细胞定位情况为了探索其原因我们在N端信号肽后面融合了不同结构的蛋白,包括非LRR结构的核定位蛋白和非叶绿体定位的LRR蛋白,荧光观察结果表明,LRR结构是融合蛋白可以定位于叶绿体膜上的关键因素。4.YPD1与水稻耐逆性的关系。已有研究表明LRR家族蛋白参与植物胁迫响应,为探究YPD1是否与水稻抗逆性相关。我们通过逆境处理及相关表型、生理数据分析表明,水稻受PEG胁迫时,YPD1表达受到抑制,ypd1突变体水分流失更快,表现出对干旱胁迫的敏感性。5.互作蛋白的筛选及验证。我们用本课题组自主构建的水稻c DNA文库,将YPD1融合于诱饵载体中对该文库进行互作筛选,共找到68个互作蛋白,通过体内体外验证证明Os APX2与YPD1可以强烈发生互作,且与野生型相比,YPD1的突变使As A-GSH循环中APXs及相关基因的表达显著下降。综上所述,通过本研究的开展我们首次明确YPD1 N端前80氨基酸具有将目标蛋白引导并定位于叶绿体的功能,而105-163氨基酸为单向双跨叶绿体膜结构,同时C端的LRR结构对其在叶绿体膜上的定位至关重要。YPD1可与APX的互作,可能通过参与水稻体内活性氧清除过程调节水稻逆境响应。本研究进一步明确了YPD1的功能,丰富了水稻LRR家族蛋白的功能,为进一步了解水稻耐逆性分子机理,进而提高水稻耐逆性奠定了一定的基础。