N-钙黏连蛋白和层黏连蛋白在小鼠胚胎心流出道的时空表达及作用

目的:探讨N-钙黏连蛋白(N-cadherin,N-CAD)和层黏连蛋白(Laminin,LN)在小鼠胚胎心流出道(R428溶解度Outflow tract,OFT)发育早期的时空表达及其在心OFT发育中的可能作用。方法:对E8~13小鼠心石蜡连续切片行免疫组织化学SABC法染色并对E9~12的心连续切片进行三维重建。选部分心切片行免疫荧光染色。结果:E8,左右心管尚未愈合。N-CAD表达较α-SMA和α-SCA表达强且范围广。NCAD于心管心肌细胞间呈线状强阳性表达,α-SMA和α-SCA表达位于肌膜下。E9,OFT与原始心室直接相连。E10~11,近OFT的ISL-1阳性鳃弓间充质细胞、背侧心包上皮和动脉囊壁细胞进入OFT远端,逐渐表达α-SMA和α-SCA,OFT逐渐增长;添加至心包腔背侧壁的ISL-1阳性细胞逐渐表达LN,LN至OFT远段达高峰,随着向近心端延伸又逐渐减弱,与ISL-1表达型一致。E12,OFT变短,OFT远段心肌ISL-1和LN表达消失。E10~13,右心室出现并逐渐扩大,近段OFT从近端向远端逐渐小梁化改建为右心室。E10~12,OFT近段嵴内间充质细胞逐渐增多,靠近心肌的细胞逐渐表达α-SMA和α-SCA,荧光双染示心内膜细胞来源的间充质细胞标记SOX9与心肌细胞标记α-SCA共定位于OFT嵴内近间充质细胞处的小梁心肌细胞。E10~13,从近端至远端,OFT近段心肌细胞LN表达逐渐减弱,LN表达于E11达高峰。Nbiosafety guidelines-CAD表达于E11达高峰,E12~13逐渐下降。结论:1.心肌分化过程中,N-钙黏连蛋白表达早于α-SMA、α-SCA,层黏连蛋白表达晚于α-SMA、α-SCA。2.层黏连蛋白与添加在流出道远段的第二生心区来源细胞的迁移、增殖和分化有关。3.流出道近段右心室化使流出道变短。心室化过程中小梁心肌细胞来源包括流出道心肌、EMT来源的间充质细胞。4.N-钙黏连蛋白与层黏连蛋白参与了流出道近段的小更多梁化过程。