目的:系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一种慢性、复杂的自身免疫性疾病,常常会影响多个器官和系统,其中以肾脏损伤最严重,常并发狼疮肾炎。狼疮肾炎(Lupus nephritis,LN)通常表现为蛋白尿、血尿、肾功能不全等症状,治疗的主要目的之一是减轻肾脏损害,早期诊断治疗可以改善预后。足细胞属于终末上皮细胞,是肾脏肾小球滤过的重要组成部分,足细胞损伤可导致蛋白尿的产生,防止足细胞损伤对Y-27632使用方法LN的治疗和预后具有重要意义。白介素17B受体(Interleukin 17B Receptor,IL-17RB)属于白介素17受体家族,其异常表达与多种自身免疫病有关。IL-17RB可以在多种细胞上表达,包括免疫细胞,内皮细胞和上皮细胞,但IL-17RB是否在LN足细胞上表达以及发挥何种作用尚不清楚。为了探讨IL-17RB在LN足细胞表达情况以及是否对足细胞损伤发挥作用,我们进行了一项研究,为IL-17RB能否成为LN潜在的治疗靶点提供了基础实验依据。方法:1.收集符合临床诊断标准的3名LN患者的肾穿标本,用HE、马松(Masson)、六胺银(PASM)染色的方法观察患者肾穿标本的肾脏病理学改变,肾细胞癌患者癌旁正常组织作为正常对照组。采用免疫组织化学的方法,检测LN患者肾脏肾小球以及足细胞IL-17RB的表达情况。2.观察MRL/lpr模型小鼠状态。用考马斯亮蓝方法(CBB)检测小鼠尿液中尿蛋白浓度,用尿酶法检测小鼠血浆中尿素氮浓度。用电镜观察模型小鼠肾脏及足细胞超微结构的病理学改变。采用免疫组织化学的方法,检测MRL/lpr模型小鼠肾脏中肾小球以及足细胞IL-17RB表达的情况。3.用差异过筛法提取MRL/lpr模型小鼠以及健康小鼠的原代足细胞培养观察足细胞的一般形态。用免疫荧光法检测提取的原代足细胞IL-17RB表达情况。4.培养永生化人肾小球足细胞(human glomerulus podocytes,HGPC)系,用IFN-α刺激。选取不同效价(10U/ml、50U/ml、100U/ml、500U/ml、1000U/ml)IFN-α,不同时间梯度(8h、12h、24h)刺激足细胞,用ELISA方法检测足细胞表达IL-6情况,探究足细胞受损程度,以及选取IFN-α最适效价,最适时间,作为足细胞损伤模型条件。5.流式检测最适条件下刺激足细胞损伤后IL-17RB的表达情况。选取最适条件下刺激足细胞,随后进行siRNA转染12h,将足细胞分为无IFN-α刺激的空白对照组、IFN-α刺激的IFN-α组、IFN-α刺激的敲减IL-17RB转染组(IFN-αantibiotic loaded+siRNA组)以及IFN-α刺激的无效转染组(IFN-α+NC组),用PCR法检测刺激以及转染后足细胞IL-17RB m RNA的相对表达量,用Western Blot检测IL-17RB的表达情况。6.用白蛋白内流实验检测不同组足细胞滤过功能情况,用流式检测不同组足细胞凋亡情况。用Western Blot检测不同组足细胞标志蛋白nephrin表达情况。结果:1.与对照组相比,LN患者肾脏肾小球高表达IL-17RB(P<0.01)。IL-17RB在LN患者肾小球足细胞表达。2.14周MRL/lpr模型小鼠尿液中尿蛋白浓度增高,血浆中尿素氮浓度增高(P<0.05)。电镜下观察模型小鼠足细胞数量减少、足突广泛融合,系膜增生,基底膜增厚。与健康小鼠相比,模型小鼠肾小球高表达IL-17RB以及原代足细胞高表达IL-17RB(P<0.05)。3.不同效价IFN-α在不同时间刺激足细胞,ELISA检测在500U/ml IFN-α,12h刺激下足细胞分泌IL-6最多(P<0.05),所以将500U/ml IFN-α,12h作为刺激足细胞损伤最适条件。4.与对照组相比,IFN-α刺激组足细胞IL-17RB表达增加,与IFN-α组相比,siRNA转染后足细胞IL-17JNJ-42756493小鼠RB表达降低(P<0.05)。5.白蛋白内流实验检测足细胞滤过功能,与对照组相比,IFN-α组和IFN-α+NC组培养基中白蛋白浓度增加(P<0.01)。与IFN-α组相比,IFN-α+siRNA组培养基中白蛋白浓度降低(P<0.01),与空白对照组相比,IFN-α+siRNA组培养基中白蛋白浓度升高(P<0.05)。流式检测足细胞凋亡率,结果显示4组足细胞凋亡率差别不大,无统计学意义。6.与空白对照组相比,IFN-α组和IFN-α+NC组足细胞标志物nephrin表达降低,IL-17RB表达增高,且差异具有统计学意义(P<0.05)。与IFN-α组相比,IFN-α+siRNA组足细胞标志物nephrin表达升高,IL-17RB表达降低(P<0.05)。结论:1.LN患者和MRL/lpr小鼠肾脏足细胞高表达IL-17RB。2.体外IFN-α刺激足细胞系HGPC,IL-17RB表达增加。IL-17RB可促进足细胞滤过功能的损伤,对足细胞凋亡能力没有影响,可降低足细胞标志蛋白的表达。