FADD基因对宫颈癌细胞凋亡和侵袭及NF-κB信号通路的影响

目的 探讨Fas相关死亡结构域(FADD)基因对宫颈癌细胞凋亡和侵袭及NF-κB信号通路的影响。方法 qRT-PCR检测60例宫颈鳞癌患者的癌组织及配对癌旁组织,人宫颈鳞癌细胞系SiHa及人宫颈上皮永生化细胞系H8中FADD mRNA水平。将SiHa细胞分为对照组、NC-sh组、FADD-sh组、NC-OE组和FADD-OE组。对照组SiHa细胞正常培养,不进行转染;NC-sh组ephrin biology、FADD-sh组、NC-OE组和FADD-OE组SiHa细胞分别使用Lipofectamine 2000试剂转染shRNA慢病毒阴性对照(NC-sh)、FADD shRNA慢病毒(FADD-sh)、过表达慢病毒阴性对照(NC-OE)和FADD过表达慢病毒(FADD-OE)。通过MTT法和集落形成实验检测细胞增殖。通过AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡。通过Transwell检测细胞侵袭。通过qRTTezacaftor化学结构-PCR检测FADD mRNA水平。通过Western blot检测cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、核因NSC125066价格子(NF)-κB p65和p-NF-κB p65的表达水平。结果 与配对癌旁组织相比,宫颈鳞癌组织中FADD mRNA水平降低(t=29.333,P<0.001)。与H8细胞相比,SiHa细胞中FADD mRNA水平降低(t=27.219,P<0.001)。与Ⅰ-Ⅱ期相比,Ⅲ-Ⅳ期患者癌组织中FADD mRNA水平降低(t=7.727,P<0.001)。与淋巴结未转移患者相比,淋巴结转移患者癌组织中FADD mRNA水平降低(t=7.618,P<0.001)。与NC-sh组比较,FADD-sh组细胞的FADD mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05),相对细胞活力和集落数量升高(P<0.05),细胞凋亡率、cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-8蛋白相对表达量降低(P<0.05),侵袭细胞数量、MMP2和MMP9蛋白相对表达量升高(P<0.05),NF-κB p65相对磷酸化水平升高(P<0.05)。与NC-OE组比较,FADD-OE组细胞的FADD mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05),相对细胞活力和集落数量降低(P<0.05),细胞凋亡率、cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-8蛋白相对表达量升高(P<0.05),侵袭细胞数量、MMP2和MMP9蛋白相对表达量降低(P<0.05),NF-κB p65相对磷酸化水平降低(P<0.05)。对照组、NC-sh组和NC-OE组上述指标均差异无统计学意义(P>0.05)。结论 FADD在宫颈癌中下调,并且与TNM分期和淋巴结转移有关,宫颈癌中FADD的表达缺失可能通过激活NF-κB信号通路抑制癌细胞的凋亡并促进侵袭。