目的与背景随着社会医疗水平的发展,个体化精准医疗逐渐成为大众关注的焦点,主要指从基因角度对疾病进行筛查、诊断、预后评估和用药指导等,日渐成熟的分子诊断技术在其中占据重要组成部分。通过基于PCR扩增技术的分子诊断技术对重大传染性疾病进行早筛、对肿瘤特异性标志物进行筛查等,我们可以进行大规模的流行病学调查和分析以及制定个性化的治疗方案,这对提高我国整体人口健康水平影响深远。但是现阶段基于PCR的核酸扩增技术仍存在一定问题,样本处理后的大规模核酸提取费时费力,且RNA靶标在提BMS-907351使用方法取过程中易发生降解或者断裂,一定程度上限制了检测的灵敏度;受仪器荧光检测通道的制约,PCR扩增重数受到限制等。综上所述,一种灵敏特异的无需核酸提取的核酸检测技术可以解决分子诊断现存的一些问题,本研究将一种高特异性、高灵敏度、基于捕获和连接的核酸检测方法加以创新改进,应用到儿童白血病融合基因和人体免疫缺陷病毒的检测中,成功的实现了这两种疾病的高通量核酸检测及定量研究。方法本研究将免提核酸的、灵敏特异的基于捕获和连接的PCR核酸检测技术方法应用到儿童白血病中融合基因的定性定量检测,同时我们用市面上现有的普通RT-PCR试剂盒对融合基因体外转录合成RNA(in vitro translation RNA,IVT-RNA)和病人血液样品进行平行检测,通过方法学的比较评估了此方法的灵敏度和特异性,然后对来自首都医科大学附属北京儿童医院的50例急性淋巴细胞白血病患儿样本,进行检测验证。在PCR的基础之上,我们运用MALDI-TOF质谱分析初步建立了一种基于捕获和连接的多重融合基因质谱分析技术,随后用IVskin immunityT-RNA对方法的可行性进行评估。此外,本研究将一种基于捕获和连接的核酸检测技术方法应用到链霉亲和素包裹的磁珠上,结合LAMP(loop-mediated isothermal amplif-ication)恒温扩增建立起了一种免核酸提取的、灵敏高效的基于磁珠捕获和连接的环介导恒温扩增(capture and ligation probe-LAMP,CLIP-LAMP)方法体系,该体系用于传染性疾病HIV IVT-RNA的定性及定量检测,同时评估该体系的灵敏度和特异性。结果本研究成功将基于96孔板的CLIP-PCR核酸检测技术应用到儿童急性淋巴细胞白血病中融合基因的检测,针对两种种常见的融合基因BCR-ABL1和ETV6-RUNX1进行定性定量和双重检测,BCR-ABL1可以稳定检测到192 copies,ETV6-AUNX1可以稳定检测到24.24 copies,用普通RT-PCR试剂盒进行方法学比较可以得到相同的检出限。我们还进一步联合CLIP-PCR和核酸质谱方法对BCR-ABL1和ETV6-RUNX1这两种融合基因进行多重检测初步可行性分析,实验结果证明,该方法成功应用于多重融合基因的检测,检测结果良好。除此之外,本研究构建的基于磁珠捕获和连接的环介导恒温扩增方法体系成功的应用到重大传染性疾病HIV的定性与定量检测中,并且可以稳定检测到32 CPs/μL的病毒载量,检测方法具有良好的特异性,且具有处理>1 mL的大体积样本的可能,整个反应可以控制在2h内完成。结论本研究在基于捕获和连接的核酸检测技术基础上,将其与磁珠上的恒温扩增及捕获板里的PCR扩增方法体系相结合,成功建立起了免核酸提取的RNA为靶标的定性与定量检测技术,并应用于血液肿瘤里融合基因和HIV的检测。通过对结果分析证明,基于96孔板捕获和连接selleck合成的PCR扩增和核酸质谱方法体系,应用于融合基因的定性定量检测,取得了较高的灵敏度和特异性;基于磁珠捕获和连接的环介导恒温扩增方法体系可以特异性的捕获RNA靶标并进行高效扩增,有潜力成为一种灵敏高效、简便快捷的边境地区HIV筛查技术。综上所述,基于捕获和连接的核酸检测方法在儿童血液肿瘤里融合基因和人体免疫缺陷病毒上的应用取得成功,同时为其他疾病的检测提供了新的方法和思路。
Author: admin
PD-1抑制剂对非小细胞肺癌的近期疗效与安全性观察
目的 分析程序性死亡受体-1(PD-1)抑制剂在非小细胞肺癌(NSCLC)中的疗效及安全性。方法 回顾性收集2020-01-01-2021-06-30在嘉兴市第一医院接受PD-1抑制剂治疗的NSCLC患者149例，对用药信息、免疫治疗相关不良反应(irAEs)、客观缓解率(ORR)和疾病控制率(DCR)进行分析，采用χ~2检验比较组间差异，二分类logistic回归分析与irAEs发生有关的独立危险因素。结果 6种PD-1抑制剂中信迪利单抗占比最高(48例，32.2%);联合化疗是最主要的治疗方式(86例，57.7%)。irAEs发生率为47.7%(71/149),其中≥3级的irAEs发生率为6.7%(10/149),且单药治疗高于联合治疗(14.3%vs 3.7%),χ~2=5.359,P=0.021;二分类log获悉更多istic回归分selleck Naporafenib析结果显示，吸烟史是发生irAEs的独立危险因素，OR=2.521,95%CI:1.235～5.146,P=0.011。总人群的ORR为23.5%,DCR为83.2%,其中PD-L1肿瘤细胞阳性比例分数(TPS)≥1%较PD-L1 TPS<1%者具有较高的DCR(90.3%vs 66.7%),χ~2=4.814,P=0.028;一线治疗的DCR高于后线治疗(90.4%vs 74.2%),χ~2=6.841,P=0.009;irAEs组较无irAEs组有较高的ORR(33.8%vs 14.1%,χ~2=8.026,P=0.005)和DCR(93.0%vs 74.4%,χ~2=9.208,P=0immune thrombocytopenia.002)。结论 PD-1抑制剂治疗晚期NSCLC疗效尚可，irAEs发生率与疗效相关。
特应性皮炎相关生物制剂研究进展
<正>特应性皮炎（atopic dermatitis,AD)是一种慢性、复发性、炎症性皮肤疾病，全球约有2.3亿人受到AD困扰，其中包括VP-16纯度20%的儿童和1%～3%的成人，其特征是瘙痒、炎症性皮损，以及皮肤屏障缺损~([1])。反复抓挠会引起瘙痒-抓挠循环，严重影响患者生活质量~([2])，所以，控制瘙痒是其治疗目标之一。AD的疾病机制与遗传、环境、皮肤屏障和免疫等因素等均有关。Th2型炎症是AD的基本特征，不同年龄阶段AD的炎症表现也不尽相同，儿童期主要表现为Th2型炎症，而成人期却表现为Th2/Th22型混合炎症，亚裔则以Th2/Th17混合型炎症为主。AD的治疗方式有：基础治疗，包括洗浴、食物干预、改善环境、脱离变应原等；外用药物治疗，如一线用药糖皮质激素、钙调神经磷酸酶抑制剂；抗葡萄球菌抗生素可以有效治疗继发性皮肤感染；由于口服抗组胺药不能减轻瘙痒，故不推荐使用；对于一线治疗不充分的中重度特应性皮biotic index炎，紫外线光疗是一种安全有效的治疗方法；还可系统应用糖皮质激素、selleck NMR免疫抑制剂、Janus激酶抑制剂、生物制剂等方法治疗AD。
乳腺癌新辅助化疗后MRI退缩模式及与病理反应的相关性探讨
目的 探讨乳腺癌新辅助化疗后退缩模式的MRI评估及与病理反应的相关性。方法 选取169例确诊乳腺癌并行新辅助化疗(neoadjuvant chemotherapy,NAC)的患者治疗前后的MRI资料，评估基线MRI肿瘤形态、治疗后MRI退缩模式，并与NAC后病理反应对照。结果 最常见的基线MRI形态是孤立性肿块占58.0%(Compound 3浓度98/169)，此类型以向心Biosynthetic bacterial 6-phytase性退缩为主(53.1%,52/98)，其次是碎裂成多结节(24.5%,24/98);第二常见MRI基线形态是成组病变(16.6%,2selleck化学8/169)，并以碎裂成多结节为主(89.3%,25/28)。最常见的病理反应是Miller-Payne分级3级(约49.7%,84/169),MRI退缩模式呈向心性退缩为主。病理完全缓解((pathological complete response,p CR)占24.9%(42/169)，但其中只有13例术前影像学诊断完全缓解(radiologic complete response,r CR),29例(占69.0%) p CR术前MRI误诊残余癌，其中2例为向心性退缩，27例为碎裂型退缩。分析29例患者中13例可见不同程度原位癌，其余还有炎症或炎性肉芽肿5例，增生或其他良性肿瘤4例。结论 MRI提示r CR与病理p CR一致性较高，其特异性较高但敏感性较低，仍有一部分p CR病例因病变区域内不同程度原位癌、炎性反应/肉芽肿或者其他良性病变强化而误诊为肿瘤残留。向心性退缩病变MRI能较准确检测肿瘤残留强化灶;而非向心性退缩病变对残余肿瘤的判断及大小检测方面存在一定混淆因素。
1265例HIV快检可疑样本的酶联免疫吸附试验和免疫印迹试验结果分析
目的 分析1 265例人类免疫缺陷病毒（HIV）快速检测可疑样本的酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹试验（WB）结果，了解胶体金、ELISA和WB 3种实验方法的一致性和相关性。方法 选取2018年1月—2021年6月平顶山市疾病预防控制中心艾滋病确证实验室购买Berzosertib检测的1 265例HIV快检可疑样本为研究对象，分析其一般信息和3种实验结果。设置ELISA结果 S/CO≥6.0、1.0≤S/CO <6.0、0.0 MDV310042例，占比98.18%;WB实验HIV抗体阳性1 098例，占比86.80%。WB带型统计，gp160、 p24和gp41的检出率最高，分别为90.67%、84.35%和82.21%。按照3组ELISA实验不同S/CO值区间和WB条带检出情况统计，单个条带检出率差异均有统计学意义（P<0.01）,S/CO值越高，条带检出率越高；全带和未检出特异条带发生率差异有统计学意义（PBrucella species and biovars<0.01）,S/CO值越高，WB全带发生率越高，S/CO值越低，无特异性条带发生率最高。结论 综合分析3种HIV实验方法和结果，快速检测、ELISA和WB 3种实验的一致性依次降低；随着快检样本S/CO值增高，各WB条带检出率和全带发生率增加。
冠心病患者疾病相关指标水平变化及其与冠脉病变程度的相关性探讨
目的 探讨冠心病患者疾病相关指标水平变化及其与冠脉病变程度的相关性。方法 回顾性选取本院收治的ICI 46474说明书冠心病患者80例，分析整理临床资料，依据Gensini评分将其分为低危组30例，中危组25例，高危组25例，另选取同期于本院进行健康体检的人员80例作为非冠心病组。所有研究对象均进行血浆Apo AI/Apo B、Hcy、hs-CRP水平、baPWV及血脂指标水平的检测，比较各组上述指标的水平变化情况，并分析冠脉病变程度与相关指标水平的相关性。结果 较非冠心病组比，冠心病组血浆Apo AI/Apo By水平较低，血浆Hcy、血清LDL-C、TC、TG、hs-CRP水平、baPWV值则Technology assessment Biomedical较高；高危组血浆Apo AI/Apo B水平低于低危组，血清TC、TG水平则高于低危组，高危组血浆Hcy、血清LDL-C、hs-CRP水平、baPWV值均高于中危组，且中危组高于低危组；冠心病患者Gensini评分与血清Apo AI/Apo B水平呈负相关，与血清Hcy、hs-CRP、LDL-C水平、baPWV均呈正相关(均P<0.05)。结论 血清Apo AI/Apo B水平越低，血清Hcy、hs-CRP、LDL-C水平、baPWV则越高，冠心病患者冠脉病变程Tofacitinib生产商度越严重，预后情况越差。
自动乳腺全容积扫描结合机器学习在乳腺癌HER-2状态术前预测中的价值
目的 探讨自动乳腺全容积扫描(ABVS)结合不同机器学习(ML)算法术前预测人表皮生长因子受体2(HER-2)状态的价值。方法 收集乳腺癌患者202例，HER-2阳性组68例，HER-2阴性组134例，按7∶3将患者随机分为训练组(141例)、测试组(61例)。采用最小绝对收缩和选择算子(LASSO)回归降维筛选最优特征，多因素Logistic回归筛选独立危险因素，并利用支持向量机(SVM)、最近邻算法(KNN)、决策树(DT)、随机森林(RF)selleck产品、极端梯度推进(XGBoost)5种不同ML算法构建预测模型。结果 肿块边界、微分叶、微钙化、血流分级、冠状面汇聚征及虫噬征、腋窝淋巴结状态为最优特征，多因素分析微钙化、血流分selleckchem IACS-10759级、冠状面汇聚征、腋窝淋巴结状态为独立危险因素，测试组SVM、KNN、DT、RF、XGBoost的曲线下面积(area under curve, AUC)分别为0.767、0.768、0.783、0.768、0.805。结论 ABVS超声特征结合机器学习术前能够有效预测乳腺癌HER-2状态，其中XGBoost表现最突medical acupuncture出。
2009-2018年湖北省南漳县血吸虫病监测结果
目的 对2009-2018年南漳县血吸虫病监测结果进行分析，为进一步巩固血吸虫病防治成果、及时处置相关风险因素提供依据。方法 按照《Protein Analysis全国血吸虫病监测方案》的要求，开展了人群病情监测、家畜病情监测https://www.selleck.cn/products/bmn-673.html和钉螺螺情监测，并对监测数据进行汇总、整理和分析。结果 2009-2018年南漳县无血吸虫病病例报告。共对39 507人开展血清学检测，检出血吸虫病抗体阳性367人，阳性率为0.93%；对抗体阳性的361人进行病原学检测，结果均为阴性。共对200头牛开展血吸虫感染情况监测，均为阴性。累计查螺面积3 797.37万㎡，有钉螺面积105.CHIR-9902100万㎡；2017年钉螺密度出现高峰，达0.31只/框，2018年下降至0.11只/框；压碎镜检法检测3 450只钉螺，未发现阳性。结论 2009-2018年南漳县无血吸虫病疫情，但2017-2018年仍存在钉螺分布，应加强钉螺控制措施，巩固消除血吸虫病成果。
基于多肽药物的混合抗生素联合毒性与联合抗性研究及机制初探
抗生素的使用甚至滥用导致了严峻的细菌耐药性问题。细菌产生耐药性的主要原因是获得抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes,ARGs)。控制ARGs的产生和传播可以减少细菌耐药性问题。目前相关研究表明,多肽类药物(antimicrobial peptide,AMPs)表现出高效的抗菌作用以及较低的生态环境风险,同时不具有明显的耐药性倾向。基于减少耐药性措施,AMPs与传统抗生素氨基糖苷类抗生素联合使用是否能在保证药效的同时减少耐药性?此外,AMPs因其作用机制不同可以分为膜靶向肽(membrane targeting peptide,M-AMPs)和非膜靶向肽(non-membrane targeted peptide,NM-AMPs)两种,那么这两种类型的AMPs联合使用能否减少耐药性以及提高抗菌效果?群体感应抑制剂(Quorum sensing inhibitors,QSIs)是一种被认为不易对细菌产生耐药性的新型抗生素之一,AMPs与QSIs联用是否能提高抗菌效果同时减少ARGs的产生和传播?基于上述关键问题,本文以大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)为模式生物,以7种AMPs(其中5种为M-AMPs,2种为NM-AMPs)为研究对象,以氨基糖苷类抗生素-硫酸卡那霉素(Kanamycin sulfate,KAN)作为传统抗生素代表,以3种QSIs作为新型抗生素的代表,测定AMPs-KAN、AMPs-AMPs和AMPs-QSIs对E.coli的联合毒性、联合突变以及联合接合转移效应。主要研究结果如下:(1)AMPs(M-AMPs、NM-AMPs)和KAN对E.coli的联合毒性和联合抗性研究:结果表明,M-selleckAMPs&KAN、NM-AMPs&KAN混合物抑制细菌生长的剂量效应曲线呈现“S”型。此外,测试混合物能够促进E.cheart-to-mediastinum ratiooli的突变和质粒接合转移,剂量效应曲线呈倒“U”型。利用IA模型判别M-AMPs&KAN和NMAMPs&KAN混合物的联合作用,结果显示其联合毒性作用模式在测定浓度范围内为拮抗,而联合抗性作用模式在测定浓度范围内为拮抗→相加→协同。机制分Ceralasertib使用方法析表明联合毒性和联合抗性均和抗生素与靶蛋白相互作用产生的ROS密切相关。(2)AMPs(M-AMPs、NM-AMPs)对E.coli的联合毒性和联合抗性研究:结果表明,M-AMPs&M-AMPs和M-AMPs&NM-AMPs混合物均抑制了E.coli的生长。突变和质粒接合转移实验显示测试混合物能够显著促进ARGs的产生和传播,相关剂量效应曲线呈现倒“U”型。在测定浓度范围内,IA模型判别MAMPs&M-AMPs和M-AMPs&NM-AMPs的联合毒性作用模式为拮抗,而联合抗性作用模式为拮抗→相加→协同。相关机制分析说明,M-AMPs、NM-AMPs与靶蛋白相互作用产生的ROS参与到测试混合物的联合毒性和联合抗性中。(3)AMPs(M-AMPs、NM-AMPs)和QSIs对E.coli的联合毒性和联合抗性研究:结果显示,M-AMPs&QSIs、NM-AMPs&QSIs混合物能够促进E.coli生长、突变和质粒接合转移,其中联合毒性剂量效应曲线呈现“J”型,而联合抗性剂量效应曲线呈现倒“U”型。基于IA模型,判别M-AMPs&QSIs的联合毒性作用模式的结果为拮抗,而其联合抗性作用模式随浓度变化的结果为协同→相加→拮抗;NM-AMPs&QSIs的联合毒性作用模式表现为拮抗,而其联合抗性作用模式随浓度表现为拮抗→相加→协同。此外,测试混合物联合毒性和联合抗性随浓度的变化规律与细菌体内产生的ROS密切相关。本研究可以为今后AMPs的医学临床使用提供一定数据支撑,为细菌耐药性的研究和源头阻遏细菌耐药性污染提供科学依据和理论指导。
蛛网膜下腔出血患者TLR4/NF-κB信号通路变化及意义
目的 探究蛛网膜下腔出血患者Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路变化及意义。方法 选取作者医院2018-05/2021-06月收治的60例蛛网膜下腔出血患者作为观察组，另选取同期体检健康者60例作为对照组。比较两组TLR4/NF-κB信号通路相关因子表达，分析蛛网膜下腔出血患者TLR4/NF-κB信号通路相关因子与神经功能损害美国国立卫生院卒中量表(national institutes of health stroke scale, NIHSS)评分的关系。比较不同预后患者发病第1、3、7、14天外周血TLR4/NF-κB信号通路相关因子，绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线，评价TLR4/NF-κB信号通路相关因子对蛛网膜下腔出血患者预后的预测价值，分析TLR4/NF-κB信号通路相关因子与蛛网膜下腔出血患者预后不良风险的关系。结果 观察组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达均高于对照组，组间比较差异有统计学意义(P均<0.05)。蛛网膜下腔出血患者入院当天NIHSS评分为(11.24±3.12)分，根据Pearson相关性模型分析可知，蛛网膜下腔出血患者TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达均与NIHSS评分呈正相关关系(P<0.05)。不同组别间患者TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量差异有统计学意义(F_(组间)=8.037、19.348,P均<0.001)bioactive glass,不同时间点患者TLR4 mRNA相对表达量差异有统计学意义(F_(时间)=5.128、16.207,P均<0.001),且时间与组间存在交互效应(F_(交互)=6.497、18.032,P=0.015、<0.001)。预后不良组患者发病第1天TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量较预后良好组患者差异无统计学意义(P>0.05)。预后不良组患者发病第3天、7天、14天TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均高于预后良好组患者(P均<0.05)。预后不良组患者、预后良好组患者发病第3天TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量升至最高(P均<0.05);发病第7天、14天TLRBelnacasan4 mRNA、NF-κB S63845小鼠mRNA相对表达量均较发病第3天明显下降，且发病第14天降至最低(P均<0.05)。以预后不良作为阳性样本，预后良好作为阴性样本，绘制ROC曲线，结果显示，发病第3、7、14天TLR4 mRNA、NF-κB mRNA联合预测蛛网膜下腔出血患者预后的AUC分别为0.854、0.894、0.915,较各指标单独诊断价值明显提高。Logistic回归分析显示，TLR4 mRNA、NF-κB mRNA仍与蛛网膜下腔出血患者预后不良有关(P均<0.05)。结论 蛛网膜下腔出血后TLR4/NF-κB信号通路被激活，TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达明显上调，且TLR4/NF-κB信号通路与蛛网膜下腔出血患者早期脑损伤有关，为临床治疗提供了新思路，有助于改善患者预后。