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目的:了解湖北省2015～2019年度流感流行病学特征、病毒抗原性变化、基因进化和耐药性等情况,为预测流感发展趋势及预防控制流感流行提供基础理论依据。方法:通过“中国流感监测信息系统”收集湖北省2015～2019年的流感监RNA virus infection测资料,采用Excel 2010建立数据库,绘制流行病学图表,采用SPSS20.0处理数据,分析流感流行的流行强度、年龄分布、季节分布和流行毒株型别变化等,对流感的流行病学资料做描述性分析;选取2015～2019年期间流行的流感病毒株,提取病GW4869细胞培养毒核酸,RT-PCR扩增后收集PCR产物进行深度基因测序;采用CLC Genomics Workbench数据分析平台对测序结果进行拼接,使用Bioedit软件对核苷酸与氨基酸进行序列比对分析,用MEGA7.0软件N-J法构建进化树,通过与疫苗株进行比对,分析重要氨基酸位点变化情况,对流感病毒进行分子特征分析。结果:1.流感样病例监测特征:4个监测年度的流感样病例比例在夏季和冬春季节较高,流感样病例主要集中在15岁以下人群,随着年龄的增长,流感样病例比例总体上呈现逐渐递减趋势,但25～59岁年龄组流感样病例比例有反弹,高于15～24岁年龄组。2.流感病原学流行特征:按照流感监测方案要求,每年4月第一周至次年3月最后一周为一个监测年度。2015～2016监测年度主要以甲型H3N2和B型流感流行为主,伴随新甲型H1N1混合流行,出现了夏季和冬春季两个流行峰。2016～2017监测年度以甲型H3N2为主要流行型别,同时伴有新甲型H1N1和B型流感混合流行;该年度夏季峰非常弱,但冬春季流行峰较强。2017～2018年度主要流行新甲型H1N1,伴随甲型H3N2、B型Victoria系和Yamagata系流感混合流行;拥有典型的夏季峰和秋冬季流行峰。2018～2019年度新甲型H1N1为主要流行的SB431542化学结构病毒型别;该年度夏季峰缺失,冬春季节峰型典型。3.遗传进化分析结果:新甲型H1N1流感毒株均隶属于Clade 6B大分支,又可分为Clade 6B.1A2等多个分支,NA基因进化树分布大致与HA基因进化树相同;甲型H3N2大部分流感毒株隶属于Clade 3C.2a分支,又可分为Clade 3C.2a1等小分支;NA进化树显示大部分毒株分布与HA进化树相同,存在少量分布不同的情况。B型流感毒株Yamagata系和Victoria系两大种系各自形成两个分支,NA进化树发现,有两株毒株在HA进化树中属于Yamagata系,到NA进化树中则分布在Victoria系。4.抗原性分析结果:新甲型H1N1流感病毒有9个突变位点,涉及4个抗原决定簇,受体结合部位中第187、222和223位氨基酸位点发生改变。甲型H3N2流感毒株涉及到5个抗原决定簇的突变有30个位点,受体结合部位中发生了T135K、S219F、P221S、F193S的突变。B型Victoria系毒株有涉及4个抗原表位的15个氨基酸位点发生改变,在受体结合部位发生了K136E、T197N、T199I的改变。B型Yamagata系毒株仅B/hubei-shashi/1868/2017一株毒株在抗原表位120-loop上发生了K129R的改变。5.耐药性分析结果:本次研究发现甲型H1N1毒株A/Hubei-Enshi/SWL1285/2018发生了I223V的改变,甲型H3N2型毒株发生了D151N/G位点的改变。B型Victoria系毒株中B/Hubei-Songzi/1353/2015携带酶活性突变位点N220K,在B型Yamagata系中发现B/Hubei-Xiangchen/1353/2015发生了D197N的突变。以上位点变异均可能导致流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的敏感性下降。结论:1.2015～2019年度湖北省的流感样病例比例在夏季和年末至次年年初的冬春季节较高,表现为较明显的夏季和冬春季流行峰。流感样病例主要集中在15岁以下人群,青少年儿童为流感发病高危人群。2.湖北省流感病毒型别分布呈现交替流行态势,不同监测年度流行毒株型别不同;流感具有季节性流行特征,多发于冬春季和夏季。3.新甲型H1N1、甲型H3N2和乙型流感不断进化衍生新的流行分支,其中乙型流感发现两株系间重配病毒,对该重配病毒的相关特性还需作进一步研究。4.抗原性分析表明新甲型H1N1、甲型H3N2以及B型Victoria系流感发生多个抗原位点的改变,部分毒株发生了抗原漂移,提示疫苗的保护效果可能减弱,需要关注流行流感病毒与疫苗株的匹配性及疫苗保护效果降低的风险。5.耐药性分析显示新甲型H1N1、甲型H3N2、B型Victoria系和Yamagata系均发现了耐药位点的氨基酸改变,需要进一步加强相关耐药位点的监测和流行流感病毒对抗流感药物的敏感性。

目的 系统评价中药汤剂在伴有蒽环类药物的治疗效果下对心脏毒性的防治效果。方法 计算机检索PubMed、ELSEVIER、The Cochrane Library、Web of Science、CNPCI-32765试剂KI和WanFang Date等数据库查找中药汤剂治疗蒽环类药物所致心脏毒性的对照案例数据并核对文献共纳入文献28篇，对照措施为西药对照或空白对照。采集文献中的数据利用Stata、Winbugs、R软件进行Meta分析。文献中的数据信息统一单位，由2位研究员经过筛选后除去数据不太清楚的文献和使用selleckchem AG-221中药注射液，中成药的文献。Geography medical结果 Meta分析结果显示在LVEF方面，红景天汤剂具有最佳疗效。在CK-MB方面，当归养心汤具有最佳疗效。在CTNI方面，炙甘草汤最优。在心电图方面，益气养心汤最优。结论 综合各个指标的结果，生脉汤剂，益气养心汤，参芪仙补汤，红景天汤剂是较优疗效的中药汤剂，在对肿瘤蒽环类化疗导致心脏毒性方面具有保护作用并减轻心脏损伤。

目的：对比卡格列净与阿卡波糖在2型糖尿病（T2DM）合并蛋白尿中降糖效果、肾保护作用。方法：根据入院先后顺序将201DS-3201 MW9年3月—2020年10月天津市南开区中医医院收治的合并存在蛋白尿情况的T2DM患者进行编号，并将其分为研究组43例与对照组47例。研究组患者的治疗药物为阿卡波糖，对照组患者的治疗药物为卡格列净。对两组患者血糖、肾功能等相关指标和不良反应发生情况进行统计分析。结果：两组患者治疗后血糖水平显著降低，差异无统计学意义（t=0.954、1.027、1.059,P>0.05）。治疗后两组患者血糖水平显著降低，且研究组空腹血糖、餐后2 h血糖及糖化血红蛋白均低于对照组，差异有统计学意义（t=3.152、7.521、5.315,biological safetyP<0.05）。治疗后两组患者血肌酐、血尿素氮、尿总蛋白水平低于治疗前，对照组血肌酐、血尿素氮、尿总蛋白低于研究组，差异有统计学意义（t=7.694、8.972、4.217,P<0.05）。两组患者比较胃肠道不适、肝肾功能异常、泌尿系统感染等不良反应发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）AZD2281纯度。结论：卡格列净与阿卡波糖均可有效降低2型糖尿病合并蛋白尿患者血糖水平，无明显严重不良反应，但卡格列净相对于阿卡波糖更能保护患者肾功能，在具体临床应用的过程中需要从患者实际病情与临床症状、临床表现做出针对性的用药选择。

目的 分析miR-328-5p在乳腺癌细胞系中的表达，并研究上调miR-328-5p表达对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 选取乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231及正常乳腺上皮细胞系MCF10A,分为miR-328-5p组(进行miR-328-5p转染)、转染对照组(转染miR-con)及空白对照组。采用实时荧光定量PCR检测各组miR-328-5p表达情况，采用CCK-8实验及平板克隆形成实验检测DNA biosensormiR-328-5p对各组细胞增殖能力的影响，采用细胞划痕实验检测miR-328-5p对各组细胞迁移能力的影响，采用Transwell体外细胞侵袭实验检测miR-328-5p对各组细胞侵袭能力的影响。结果 乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231中miR-328-5p相对表达量均显著RAD001低于正常乳腺上皮细胞系MCF10A(P<0.05)。与转染对照组、空白对照组比较，miR-328-5p组MCF-7细胞增殖率、克隆形成率及细胞迁移、侵袭能力均明显降低(P<0.05),转染对照组与空白对照组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-328-5p在乳腺癌细胞中低表达，上调miR-328-5p表达可抑制乳腺癌细胞的增殖能力和减弱迁移、侵GSKJ4试剂袭能力，或可成为临床治疗乳腺癌的新靶点。

目的 分析慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）患寻找更多者肺部感染病原菌的分布情况，并探讨影响肺部感染发生的危险因素，为其临床预防和治疗提供参Electrical bioimpedance考。方法 回顾性分析罗定市第六人民医院2021年1月至11月收治的110例AECOPD患者的临床资料，按照其是否并发肺部感染分为未发生肺部感染组（60例）和发生肺部感染组（50例）。分析发生肺部感染组患者病原菌分布情况；对两组患者一般资料进行单因素分析；采用多因素Logistic回归分析筛选AECOPD患者发生肺部感染的独立危险因素。结果 发生肺部感染组患者的痰液样本中共分离出65株病原菌，其中革兰阴性菌41株，占比63.08%，革兰阳性菌18株，占比27.69%，真菌6株，占比9.23%；单因素分析结果显示，发生肺部感染组中年龄≥60岁、住院时间≥14 d、糖皮质激素使用时间≥7 d、抗生素使用时间≥17 d、有机械通气史、吸烟、合并糖尿病、未进行雾化吸入的患者占比均显著高于未发生肺部感染组（均P<0.05）；多因素Logistic回归分析结果显示，有机械通气史、糖皮质激素使用时间≥7 d、年龄≥60岁、住院时间≥14 d、抗生素使用时间≥17 d均为影响AECOPD患者发生肺部感染的独立危险因素（OR=1.446、1.570、1.603、1.489、2.寻找更多323，均P<0.05），而雾化吸入则为AECOPD患者发生肺部感染的保护因素（OR=0.596,P<0.05）。结论 AECOPD患者发生肺部感染的病原菌主要为革兰氏阴性菌，影响AECOPD患者发生肺部感染的危险因素为机械通气史、糖皮质激素使用时间≥7 d、年龄≥60岁、住院时间≥14 d、抗生素使用时间≥17 d,AECOPD患者发生肺部感染的保护因素为雾化吸入，针对以上因素，临床可采取相关措施，以预防患者发生肺部感染。

目的：探讨澳洲茄碱对肝癌细Nucleic Acid Electrophoresis胞增殖活性的影响及对丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)/胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的调节作用。方法：取对数生长期的HepG2细胞随机分为对照组、澳洲茄碱组(以50μmol/L澳洲茄碱处理细胞)、激活剂组[以20μmol/L异丙肾上腺素(ISO)处理细胞]和激活剂+澳洲茄碱组(20μmol/L ISO处理细胞24 h后，以50μmol/L澳洲茄碱处理),24 h后采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞存活率，采用划痕实验检测细胞迁移能力，采用Transwell试验检测细胞侵袭能力，采用蛋白质印迹法检测磷酸化ERK(p-ERK)、ERK、丝裂原激活的蛋白激酶激酶(MEK)和磷酸化MEK(p-MEK)蛋白相对表达量。结果：与0μmol/L澳洲茄碱比较，10、20、30、40及50μmol/L澳洲茄碱均可降低细胞存活率，差异均有统计学意义(P<0.05),且具浓度依赖性。与对照组比较，澳洲茄碱组细胞存活率、划痕愈合率，p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量降低，侵袭细胞数减少；激活剂组细胞划痕愈合率，p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量升高，侵袭细胞数增多，差异均有统计学意义(P<0.0selleck LY-1880115)。与澳洲茄碱组比较，激活剂+澳洲茄碱组细胞存活率、划痕愈合率，p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量升高，侵袭细胞数增多，差异均有统计学意义(P<0.05)。与激活剂组比较，激活剂+澳洲茄碱组细胞存活率、划痕愈合率，p-ERK、p-MEK蛋白相对表达量降低，侵袭细胞数减少，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：澳洲茄碱可降低肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力，其可能是通过抑制MAPPUN30119K/ERK信号通路发挥调控作用。

水牛(Bubalus bubalis)是适应南方气候的重要家畜品种,具有广阔的经济开发价值。水牛奶因其营养价值丰富、产品附加值高被誉为“奶中之王”,水牛奶业已成为我国南方奶业的重要组成部分。但是,水牛养殖过程中药物滥用导致水牛奶中残留药物,对人类健康造成威胁。另一方面,水牛奶Ipatasertib源掺假问题也被社会普遍关注。因此,检测水牛奶中药物残留和奶源成分是保障动物源食品安全的关键环节,亟待开发出灵敏有效的分析方法开展水牛奶中兽药残留检测和酪蛋白溯源。基于此目的,本研究主要利用液相色谱/串联质谱(LC-MS/MS)技术开展兽药残留和酪蛋白鉴定的研究与应用。本研究为水牛奶制品的食品安全检测和溯源分析提供新的手段,为建立行业检测标准打下理论基础,有助于促进奶水牛产业的良性发展。本研究的主要内容如下:(一)水牛奶多种兽药残留LC-MS/MS检测方法研究。利用LC-MS/MS技术开展甲硝唑、沙丁胺醇、阿托品、甲氧苄啶、氢化可的松、吉他霉素、罗红霉素、泰乐菌素,8种常见兽药的选择反应监测(Select Reaction Monitor,SRM)分析方法。对线性关系、检出限、准确度等美国食品和药物管理局(Food and Drug Administration,FDA)生物分析方法指南16所规定的指标开展方法学优化,同时比较了不同的样品处理方法、色谱条件和质谱方法。结果表明,各分析物的精密度和准确度为1.81%～12.35%和1.25%～14.57%。线性关系良好,相关系数r~2为0.9995～0.9999,检测限为0.1～10μg·L~(-1)。平均提取回收率为93.59%～114.57%,平均基质效应结果为87.12%～103.76%。水牛奶中的8种分析物均表现出稳定性。该技术方法检测限低、灵敏度高、重复性好,可在20 min内对8种药物残留进行准确的定性和定量分析。该技术体系成功用于检测原奶等样品的药物残留分析。本试验为建立水牛奶药物残留检测体系的行业标准打下了基础。(二)水牛奶酪蛋白(Casein,CN)分离和肽指纹图谱分析。利用高效液相色谱和质谱技术对水牛奶酪蛋白单体进行分离和鉴定,并对水牛奶和牛奶的酪蛋白及其单体进行肽指纹图谱分析。结果表明,采用化学沉淀法可有效提取酪蛋白,使用乙腈(0.1%TFA)和水(0.1%TFA)作为流动相,C18ODS-AP为色谱柱,有效分离水牛奶α_(S1)-CN,α_(S确认细节2)-CN,β-CN,κ-CN。酪蛋白经酶解后,基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF)可检测到水牛奶与牛奶酪蛋白相似性肽段16条,差异性肽段17条。通过进一步LC-MS/MS鉴定酪蛋白特征性肽段,确定了8条来自于水牛奶酪蛋白的特征性肽,可作为水牛奶溯源识别的标志物。该方法可有效分离水牛奶酪蛋白,为水牛奶酪蛋白的快速鉴定和质量检测建立了技术手段,特征性多肽结合质谱鉴定可为水牛奶、牛奶及其混合物的痕量分析提供高灵敏度的方法。综上所述,本研究成功创立了一种同时检测水牛奶多种兽药残留的方法,建立了水牛奶酪蛋白的分离体系,并筛选出水牛奶酪蛋白的特征性多肽,为水牛奶和牛奶的溯medication history源鉴定和掺假分析提供参考依据。

观察积雪草苷 (asiaticoside， Ass) 对氧糖剥夺/再复 (oxygen and glucose deprivation/reperfusion， OGD/R) 损伤的H9C2心肌细胞的增殖、磷脂酰肌醇3-激酶 (PI3K)/蛋白激酶B (Akt)/Bcl-2同源结构域蛋白 (Beclin-1) 信号通路的干预作用， 探讨其对H9C2心肌细胞的影响。选用H9C2心肌细胞作为研究对象， 采用细胞增殖与活性检测试剂盒 (CCK-8) 法检测H9C2细胞活性。将H9C2细胞分成对照组、OGD/R组、Ass低浓度组 (10 μmol·L~(-1))、Ass高浓度组 (80 μmol·L~(-1)) 和Ass高浓度+氯喹组 (80 μmol·L~(-1) + 50 μmol·L~(-1))。对照组于正常条件下培养， 其余各组在处理后进行氧糖剥夺4 h/再复2 h。酶联免疫吸附法检测细胞上清液中天门冬氨酸氨基转移酶 (aspartate transaminase， AST)、乳酸脱氢酶 (lactate dehydrogenase， LDH)、肌酸激酶 (creatine kinase， CK) 的含量; 免疫荧光观察药物对细胞数量的影响; 自噬染色检测试剂盒观察细胞自噬; 分子对接技术确定Ass分子靶点; 蛋白质印迹法检测PI3K、Akt、选择性自噬接头蛋白 (P62)、Beclin-1的表达水平。与OGD/R组相比， Ass各组在10～80 μmol·L~(-1)具有保护作用， AST、LDH和CK的含量均降低， PI3K、Akt、P62和Beclin-1蛋白表Critical Care Medicine达水平降低。与Ass组相比， Ass高浓度 + 氯喹组的AST、LDH和CK的含量均降低， PI3K、Akt、Beclin-1和P62蛋白表达水平均降低。免疫荧光显示抑制剂组、各给药组与模型组相比均具有不同程度的保护作用。综上所述， 积雪草苷能够降低OGD/R诱导的H9C2心肌细胞损伤， 降低AST、LDHselleckchem VX-765、CK含量和 P62蛋白水平， 减少细胞自噬， 这可能GNE-140体内与其抑制PI3K/Akt/Beclin-1信号通路激活密切相关。

【目的】分析非洲猪瘟病毒(Africa swine fever virus, ASFV)D250R蛋白潜在的生物学功能，制备其多克隆抗体，为ASFV D250R蛋白功能研究及相关诊断试剂的研发提供材料。【方法】应用生物信息学软件分析D250R蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构、磷酸化位点、生物功能及蛋Infectious keratitis白结构等。通过大肠杆菌表达系统表达重组D250R蛋白，采用镍亲和层析柱和分子筛纯化重组D250R蛋白，Western blotting检测纯化蛋白的反应原性，将纯化的D250R蛋白免疫BALB/GSK1349572使用方法c小鼠制备多克隆抗体，用间接ELISA方法测定多克隆抗体效价，用间接免疫荧光试验(IFA)检测多克隆抗体特异性。【结果】生物信息学分PF-6463922半抑制浓度析结果显示，D250R蛋白共由250个氨基酸组成，理论分子质量为29 822.54 u,理论等电点为8.96,为亲水性蛋白，无信号肽及跨膜区。修饰位点预测结果显示，D250R蛋白可能存在15个磷酸化修饰位点，其中丝氨酸(Ser)6个、酪氨酸(Tyr)6个、苏氨酸(Thr)3个；2个N-糖基化修饰位点，分别位于第61和197位氨基酸处。生物学功能预测结果显示，D250R蛋白含有Nudix序列，具有解水解酶活性。蛋白结构预测结果显示，D250R蛋白二级结构中α-螺旋、β-转角、延伸链、无规则卷曲占比分别为49.20%、7.60%、15.20%和28.00%,三维空间结构存在较多α-螺旋，与二级结构预测结果基本一致。将ASFV D250R基因克隆至pET-32a(+)获得pET-32a-D250R重组质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，在16℃、1 mmol/L IPTG诱导下，D250R蛋白以可溶性和包涵体2种形式表达，蛋白大小约44 ku,蛋白上清经镍亲和层析柱和分子筛层析纯化得到纯度较高的蛋白；Western blotting检测结果显示，重组蛋白具有良好的反应原性；间接ELISA检测结果显示，D250R蛋白抗体效价达到1∶256 000,成功制备多克隆抗体；IFA检测结果表明该多克隆抗体具有良好的特异性。【结论】本研究在分子层面分析了D250R蛋白的理化性质及蛋白结构，在大肠杆菌表达系统中实现了ASFV D250R蛋白的高效表达，纯化的D250R蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体具有较高的特异性，为深入探讨ASFV D250R蛋白的生物学功能及ASFV相关诊断试剂的研发奠定了基础。

目的 分析本院门诊2型糖尿病患者口服降糖药物的用药情况,进而为患者的临床治疗提供科学合理的依据。方法 统计4040例2型糖尿病患者处方,观察应用药物名称、规格、类别、销售金额、用药频度(DDDs)、日均费用(DDC)及不合理用药情况。结果 2型糖尿病患者的口服降糖药物类型BI 10773化学结构主要包括DDP-4抑制剂、TZDs胰岛素增敏剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂、双胍类以及磺酰脲类。DDDs居于前三位的分别为阿卡波糖、二甲点击此处双胍、瑞格列奈；销售金Cardiovascular biology额居于前三位的分别为二甲双胍、瑞格列奈、阿卡波糖；DDC居于前三位的分别为吡格列酮、阿卡波糖、瑞格列奈。研究中共有8例不合理用药情况,包括TZDs胰岛素增敏剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂、磺酰脲类药物、双胍类药物不合理应用。结论 本院基本上采用两种不同作用机制降糖药物联合用药方式对患者进行治疗,使用情况合理。