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真空冷冻干燥作为最常用的菌种保藏方法,已被广泛应用于乳酸菌发酵剂的工业化生产中,但干燥过程中菌体仍不可避免的受到低温、酸、脱水和氧化等多种不利因素的影响,造成菌体损伤甚至死亡。目前,对真空冷冻干燥过程中氧化应激导致细胞损伤和活力降低的研究鲜有报道。本研究以乳双歧杆菌Probio-M8作为研究对象,从乳清蛋白水解物中分离得到的抗氧化肽HP3-2作为冻干保护剂,探究真空冷冻干燥过程中氧化应激对细胞膜结构和生物学特性的影响,以及在不同冻干保护剂作用下乳双歧杆菌Probio-M8的差异蛋白表达,从细胞分子水平和生理变化上共同揭示抗氧化肽HP3-2在真空冷冻干燥过程中对乳双歧杆菌Probio-M8细胞的保护机制。具体研究结果如下:(1)相较于中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶,碱性蛋白酶对乳清蛋白的水解度较高(31.74%),且水解产物具有较强的抗氧化活性。将水解产物作为冻干保护剂可使乳双歧杆菌Probio-M8在真空冷冻干燥及贮藏过程中具有较高的菌种存活率(>72%),能够降低细胞内活性氧的积累和氧化产物丙二醛的含量,减少贮藏过程中温度和时间的变化对菌体失活速率的影响,提高菌种的贮藏稳定性。(2)使用超滤、离子交换层析、反向高效液相色谱以及液相色谱质谱联用技术对乳清蛋白水解物中的抗氧化肽进行分离、纯化和鉴定。结果发现,分子量<2k Da并且由丙氨酸(Ala)、脯氨酸(Pro)等多种疏水性氨基酸组成的抗氧化肽HP3-2,具有较高的DPPH清除率(88.11±0.38%)、氧自由基吸收能力(2.73±0.10μmol TE/g)和超氧阴离子吸收能力(62.54±3.16U/L),相较于乳清蛋白水解物,分离纯化后所获得的抗氧化肽HP3-2在真空冷冻干燥过程中对乳双歧杆菌Probio-M8具有更强的保护作用。(3)通过平板计数、气相色谱CL 318952作用质谱联用和流式细胞术等技术,对乳双歧杆菌Probio-M8的细胞膜结构、细胞膜内外离子浓度以及细胞活力进行测定。结果发现,抗氧化肽HP3-2能够降低真空冷冻干燥过程中细胞的内活性氧及丙二醛含量(2.14±0.06nmol/m L),使细胞膜中的不饱和脂肪酸维持较高的相对含量(51.49±1.26%),维持细胞膜流动性、细胞膜电位以及跨膜离子浓度(Na~+、H~+),保护F6PPK(50.41±1.68IU/g)和K~+Na~+-ATPase(5.26±0.08U/g)酶的活性,维持细胞内环境的稳态,使乳双歧杆菌Medical sciencesProbio-M8在真空冷冻干燥过程中具有较高的菌种存活GNE-140率(80.40%±3.34)以及细胞活力。(4)使用TMT定量蛋白质组学技术对乳双歧杆菌Probio-M8在真空冷冻干燥过程中的蛋白质表达进行分析,结果发现,添加冻干保护剂能够保护细胞内核糖体蛋白,刺激蛋白质的翻译合成,其中,抗氧化肽HP3-2还能够提高细胞内烟酰胺核苷酸氨基水解酶家族蛋白、磷酸核酮糖3-差向异构酶和Ppx/Gpp A家族磷酸酶的表达,促进核苷酸代谢和碳水化合物代谢,提高乳双歧杆菌Probio-M8的抗逆性以及抗氧化能力,降低氧化应激对细胞的损伤。本研究的开展为真空冷冻干燥过程中氧化应激反应对乳双歧杆菌Probio-M8的细胞损伤机制提供理论依据,为新型冻干保护剂的开发以及发酵剂和乳酸菌制品的工业化生产提供新的方法与思路。

目的 探讨极速脉搏波传导速度(UFPWV)技术在评估冠心病心绞痛患者颈动脉urine biomarker粥样硬化中的Belnacasan分子量应用价值。方法 选择2020年6月至2021年6月黑龙江中医药大学附属第一医院收治的冠心病心绞痛患者64例为研究对象，按照心绞痛的类型将患者分为稳定组(稳定型心绞痛，34例)和不稳定组(不稳定型心绞痛，30例)；选取同期30名健康志愿者作为健康对照组。收集研究对象的一般资料，二维灰阶超声记录颈总动脉内中膜厚度(IMT)、左心室射血分数，采用UFPWV技术检测颈总动脉收缩期开始时脉搏波传导速度(PWV-BS)、收缩期结束时脉搏波传导速度(PWV-ES)，采用ELISA检测斑块稳定性指标血清基质金属蛋白酶 3(MMP-3)、蛋白酶K的水平。结果 稳定组和不稳定组患者的吸烟史、收缩压及颈总动脉IMT均高于健康对照组(P均<0.05)；心绞痛患者(稳定组和不稳定组患者)颈总动脉PWV-BS、PWV-ES均高于健康对照组(P均<0.001)；不稳定组患者颈总动脉PWV-ES及血清MMP-3、蛋白酶K水平均高于稳定组(P均<0.05)；以PWV-ES 水平中位数为分界值，PWV-ES 高水平者血清MMP-3 和蛋白酶K水平均高于PWV-ES 低水平者(PR-171研究购买P均<0.01)。结论 利用UFPWV 技术测得的PWV-ES 能够用于评估冠心病心绞痛患者的颈动脉粥样硬化风险，值得推广应用。

目的 观察盐酸氨溴索联合抗生素治疗慢性支气管炎的临床效果及药学分析。方法 回顾性分析2selleckchem Gefitinib020年6月—2021年4月广东省大埔县人民医院收治的63例慢性支气管炎患者病历资料，根据用药方案不同分为观察组(nPF-6463922研究购买=33)和对照组(n=30)。2组均行抗生素治疗，观察组在上述基础上加用盐酸氨溴索治疗，2组均连续治疗14 d。比较2组治疗效果，治疗前后肺功能指标、免疫球蛋白水平、血清炎性细胞因子水平变化。结果 观察组治疗总有效率为90.91%,高于对照组的70.00%(χ~2=4.456,P=0.035);治疗14 d后，观察组患者FVC、FEV_1、FEV_1/FVC及IgA、IgM、IgG水平均较治疗前升高，且均高于对照组(P<0.05或P<0.01);2组患者血清TNF-α、IL-8水平均较治疗前降低，IFN-γ、IL-10水平较治疗前升高，且观察组降低/升高幅度大于对照组(P均<0.01)。结论 盐酸氨溴索联合抗生素治疗慢性支气管炎的效果明显，有利于患者肺功能指标的改善，有效调整各项客观指标miR-106b biogenesis，具有重要临床意义。

木薯(Manihot esculenta Crantz)作为世界第六大粮食作物,广泛种植于我国华南地区。随着农业生产的技术创新和木薯产量的提高,木薯的相关产业在我国农业Spatiotemporal biomechanics经济中占据重要地位。但木薯病毒病始终是农业生产中危害最为严重的病害,木薯普通花叶病毒(Ca-ssava common mosaic virus,Cs CMV,genus Potexvirus,famiselleck HPLCly Alphaflexiviridae)作为我国新近报道的一种潜在威胁木薯产业的病毒,在东南亚等国家发病率逐年递增,已呈现出全球蔓延的趋势。植物病毒侵染性克隆作为研究病毒复制、运动等机制的重要工具,有助于了解植物-病毒-载体相互作用的复杂过程。本研究以前期在我国首次报道发现的Cs CMV海南儋州Hainan-DZ分离物(Cs CMV-HN)为基础,采用一步法构建其全长c DNA侵染性克隆,并将其改造成能够系统性表达外源报告基因GFP的植物病毒表达载体,为后续开展Cs CMV病毒基因功能及其致病机制的研究奠定了基础,主要研究结果如下:(1)成功构建农杆菌介导的侵染性克隆p Cs CMV-HN本研究采用In-Fusion无缝克隆方法,将Cs CMV-HN的全长基因组序列克隆到p Green II-35S载体上,成功构建了其全长c DNA侵染性克隆p Cs CMV-HN。通过农杆菌注射接种本生烟和木薯扦插苗,3次重复试验结果显示,在接种第10-14天,本生烟和木薯扦插苗系统叶均出现褪绿等病症;在接种第45天,本生烟和木薯扦插苗的新生嫩叶均有明显的褪绿,叶皱等症状。经RT-PCR检测和病症观察统计,侵染性克隆p Cs CMV-HN在本生烟和木薯扦插苗中的侵染效率达100%。(2)采用重复的CP亚基因组启动子(SGP)表达外源基因策略,成功构建了2种可通过系统性侵染本寻找更多生烟和木薯植株过表达GFP的Cs CMV表达载体本研究成功构建了分别包括90 bp和171 bp重复Cs CMV的CP亚基因启动子(SGP)序列的植物病毒表达载体p Cs CMV-GFP和p Cs CMV-GFP-m1,通过农杆菌注射接种本生烟和木薯植株,经荧光观测,RT-PCR和Western blot检测分析,结果显示:p Cs CMV-GFP和p Cs CMVGFP-m1均可以介导GFP在本生烟和木薯植株中系统过表达GFP,且p Cs CMV-GFP-m1检测到的GFP荧光信号更强,GFP表达更高。(3)利用口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)2A多肽与Cs CMV的CP融合串联表达外源基因策略,成功构建了可通过系统性侵染本生烟植株过表达GFP的Cs CMV表达载体为进一步提高Cs CMV表达载体的稳定性,本研究采用FMDV编码2A多肽与Cs CMV CP融合串联表达外源基因的策略,成功构建了表达GFP的Cs CMV表达载体p Cs CMV-GFP-2A。接种本生烟第7-10天,在紫外灯照射下可以观察到非接种叶有强烈的绿色荧光,第25天绿色荧光强度达到最强。进一步经RT-PCR和Western blot分析验证了p Cs CMV-GFP-2A可通过感染本生烟系统性过表达GFP,但p Cs CMV-GFP-2A接种木薯植株并未检测到GFP表达。

目的:探讨血浆脂蛋白(a)[Lp(a)]联合欧洲心脏手术风险评估系统(EuroSCORE II)评分对老年冠心病(CHD)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法:选取116例行PAG-221使用方法CI治疗的老年CHD患者为研究对象，根据术后1年MACE情况分为MACE组(n=22)和无MACE组(n=94)。比较两组患者一般资料、实验室检测指标及EuroSCORE II评分；ROC曲线分析血浆Lp(a)联合EuroSCORE II评分对PCI术后发生MACE的预测价值。结果:MACE组患者EuroSCORE II评分、血浆Lp(a)水平高于无MACE组(P<0.05Salmonella infection);二者用于预测PCI术后MACE发生的曲线下面积AUC值分别为0.615、0.708,联合预SAHA体内实验剂量测为0.801,高于各单一指标(P<0.05)。血浆Lp(a)及EuroSCORE II评分升高是影响老年CHD患者PCI术后MACE发生的独立危险因素(P<0.05)。结论:联合血浆Lp(a)、EuroSCORE II评分对预测老年CHD患者PCI术后MACCE发生有重要价值。

近年来,抗生素的过度使用导致水体严重污染,威胁着生态环境安全和人体健康.太阳光驱动的半导体光催化技术被认为是一种有效去除污染物的手段.由于单一半导体光催化剂的多种缺陷,构建具有可见光响应和强氧化/还原能力的异质结光催化剂是去除有机污染物的有效途径.Bi_8(CrO_4)O_(11)(BCO)作为一种新发现的可见光响应半导体,由于较正的价带位,使得其在光催化Physiology and biochemistry污染物降解和水氧化方面显示了潜在的应用价值.然而,快速的载流子复合抑制了其活性.石墨相氮化碳(g-C_3N_4,CN)作为不含金属的半导体备受关注,其不仅具有可见光响应、环境友好和电子结构可调等优点,而且二维结构和较负的导带位使得CN更容易与其它半导体形成异质结光催化剂.因此,氧化型的BCO和还原型的CN结合构成异质结,有望形成S型载流子转移,从而提CL13900核磁高光生电子-空穴对的分离效率,进而提高光催化降解污染物的活性.本文通过自组装方法制备了一系列新型CN基异质结CN/BCO.CN/BCO异质结光催化降解诺氟沙星(NOR)和双酚A(BPA)的最优比为10%.相对于单体BCO和CN,10%CN/BCO对NOR的降解率分别提高了1.38倍和2.33倍;10%CN/BCO对BPA的降解活性亦得到明显增强,其对BPA的降解率分别是纯BCO和CN的1.35倍和9.11倍.光电流、电化学阻抗谱、稳态荧光和时间分辨瞬态荧光光谱证实了CN/BCO异质结可以显著提升BCO和CN的光生电子-空穴对的分离和迁移效率.原位X射线光电子能谱、电子顺磁共振和自由基捕获实验结果表明,CN/BCO异质结的光催化机制是S型转移.紫外光电子能谱、价带XPS光谱以及载流子浓度等数据进一步揭示了CN/BCO异质结中光生载流子符RP56976纯度合S型转移机理的原因.CN作为还原型光催化剂具有较高的费米能级,而BCO作为氧化型光催化剂具有较低的费米能级.此外,CN的载流子浓度大于BCO的载流子浓度.当CN和BCO接触,多子(电子)很容易从CN迁移到BCO,直到它们的费米能级相等.因此,在CN和BCO之间形成了交错的能带结构和由CN指向BCO的内电场,而且在空间电荷区CN的能带向上弯曲,而BCO的能带向下弯曲.当可见光激发CN和BCO产生光生载流子时,在内电场驱动下,BCO导带的电子向CN迁移,CN价带的空穴向BCO迁移;而能带的弯曲和库仑斥力的作用,使得BCO价带的空穴和CN导带的电子各自留在原地.氧化还原能力弱的电子-空穴复合,而保留了空间分离的氧化还原能力强的电子和空穴,形成S型机制,从而显著提高了光催化活性.

目的 探讨末端岩藻糖基化抑制剂2-脱氧-D-半乳糖（2-D-gal）对环孢素（CsA）诱导的肾脏上皮-间充质转化（EMT）的影响及其机制。方法 将15只8～10周的雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组（Ctrl组）、CsA组和CsA+2-D-gal组，每组各5只。通过蛋白质印迹法检测Ctrl组和CsA组小鼠肾脏组织岩藻糖基转移酶1(FUT1)和EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达，免疫荧光法检测Ctrl组和CsA组小鼠肾脏组织末Medicolegal autopsy端岩藻糖的表达，Masson染色检测各组小鼠肾脏组织纤维化情况，并检测各组小鼠血尿素氮和血清肌酐水平。体外建立CsA诱导肾小管上皮HK2细胞EMT模型，分别用0、2.5、5.0和10.0μmol/L的CsA刺激HK2细胞24 h，另将HK2细胞分为Ctrl组、2-D-gal组、CsA组和CsA+2-D-gal组，观察不同浓度CsA刺激后及各组HK2细胞形态，通过蛋白质印迹法检测不同浓度CsA刺激后及各组HK2细胞FUT1、E-cadherin、Vimentin和α-SMA的表达，免疫荧光法检测Ctrl组和CsA组HK2细胞末端岩藻糖的表达。结果 与Ctrl组比较，CsA组小鼠肾脏组织E-cadheselleck HPLCrin的蛋白相对表达量下降，FUT1、Vimentin和α-SMA蛋白相对表达量均升高（均为P<0.05），小鼠肾脏组织末端岩藻糖表达增多。与Ctrl组比较，CsA组和CsA+2-Dgal组小鼠的血尿素氮和血清肌酐水平均升高，与CsA组比较，CsA+2-D-gal组小鼠的血尿素氮和血清肌酐水平均降低（均为P<0.05）。与Ctrl组比较，CsA组和CsA+2-D-gal组小鼠肾脏组织胶原纤维沉积均增多，α-SMA蛋白相对表达量均升高；与CsA组比较，CsA+2-D-gal组小鼠肾脏组织胶原纤维沉积减少，α-SMA蛋白相对表达量下降（均为P<0.05）。随着CsA的浓度增加，HK2细胞的形态由正常的鹅卵石样逐渐变长变细，HK2细胞FUT1、Vimentin和α-SMA蛋白相对表达量升高，E-cadherin蛋白相对表达量下降，呈浓度依赖性。与Ctrl组比较，CsA组HK2细胞末端岩藻糖表达增多。CsA处理的基础上联合2-D-gal干预后，CsA+2-D-gal组的HK2细胞形态恢复到与正常HK2细胞形态相Glutaminase抑制剂似。与CsA组比较，CsA+2-D-gal组的HK2细胞E-cadherin蛋白相对表达量升高，Vimentin和α-SMA蛋白相对表达量均下降（均为P<0.05）。结论 CsA在体内和体外均可诱导EMT发生，并且伴有末端岩藻糖基化水平增加。2-D-gal可以通过抑制末端岩藻糖基化来抑制CsA诱导的EMT。

背景：葛根素是葛根中含有的一种黄酮类衍生物，其可以预防骨质疏松、促进新骨生成，有望成为治疗骨质破坏相关疾病的潜在药物。目的：观察葛根素对RAW264.7细胞破骨分化能力的影响，探究Notch信号通路在其中的调控作用。方法：将RAW264.7细胞分5组干预培养：对照组加入DMEM高糖培养基；破骨诱导组加入破骨诱导培养基(含巨噬细胞集落刺激因子与核因子κB受体活化因子配体的DMEM高糖培养基)；低、中、高浓度葛根素组分别加入含10,25,50μmol/L葛根素的骨诱导培Tibetan medicine养基。培养7 d后，采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色及F-actin染色评估破骨细胞形成情况，RT-PCR检测破骨细胞形成相关基因的表达，Western blot及RT-PCR检测Notch信号通路相关指标表达。结果与结论：(1)抗酒石酸酸性磷酸酶染色显示，与对照组比较，破骨诱导组破骨细胞形成能力升高(P <0.01)；与破骨诱导组比较，低、中、高剂量葛根素组破骨细胞形成能力降低(P <0.05,P <0.01)，且呈浓度依赖性；(2)F-actin染色显示，与对照组比较，破骨诱导组出现边界清晰的F-actin环；与破骨诱导组比较，各浓度葛根素组细胞F-actin环变小，且呈浓度依赖性；(3)RT-PCR检测显示，与对照组比较，破骨诱导组抗酒石酸酸性磷酸酶、组织蛋白酶K、C-fos mRNA表达升高(P <0.01)；与破骨诱导组比较，各浓度葛根素组酒石酸酸性磷酸酶、组织蛋白酶K、C-fos mRNA表达降低(P <0.01)，且呈浓度依赖性；(4)Western blot及RT-PCR检测显示，与对照组比较，破骨诱导组Notch1、Notch2、Hes1、Jagged1、Jagged2的表达升高(P <0.01)；与破骨诱导组比较，各浓度葛根素组Notch1、Notch2、Hes1、Jagged1、Jagged2的NN2211表达降MLN8237低(P <0.01)，且呈浓度依赖性；(5)结果表明，葛根素通过抑制Notch信号通路来抑制RAW264.7细胞的破骨分化能力。

靶向降解技术是一类利用真核细胞内天然存在的降解机制对胞内有害物质进行特异降解、以维持和改善细胞稳态的重要技术。该技术主要通过泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system,UPS)和自噬-溶酶体途径(Aselleckchem Compound 3utophagy-lysosome pathway)，特异性清除细胞内错误折叠或聚集的蛋白质gynaecological oncology、大分子复合物、受损或老化的细胞器及INCB018424价格一些非蛋白类物质。其中基于细胞自噬的靶向降解技术具有专一性强、底物种类广泛等诸多特征，使其成为一备受期待的技术，有望应用于神经退行性疾病、代谢性疾病等多种疾病的治疗。目前这一技术的应用潜能还远未被完全开发，特别是在植物研究领域。本综述首先详细介绍了各类基于自噬-溶酶体途径的靶向降解技术的作用机制、特点以及优势；并且结合华南农业大学李发强教授课题组的研究工作，着重介绍了设计和改造植物选择性自噬衔接蛋白方面的研究和设想，以期达到将对植物生长发育不利的因子经由细胞自噬转运并区室化隔离于液泡的目的，进而开发能够抵御病毒侵染或抵抗有害物质的农作物新品种；最后展望了靶向自噬的降解技术在植物科学研究和农业生产中的潜在应用前景和所面临的挑战。

[目的]探讨扶正胶囊提取物对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用。[方法]将60只昆明小鼠进行随机分组，每组10只，分为空白组、模型组、阳性对endodontic infections照组以及扶正胶囊提取物低、中、高剂量组。采用环磷酰胺腹腔注射建立小鼠免疫功能低下模型，检测各组小鼠的胸腺指数和脾脏指数、单核细胞吞噬能力、血清中白细胞介素-4(IL-4）、白细胞介素10(IL-10）、白细胞介素-17(IL-17）、肿瘤坏死因子-α（Regorafenib核磁TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）水平和脾T淋巴细胞亚群CD3~+T淋巴细胞（CD3~+）、CD4~+T淋巴细胞（CD4~+）、CD8~+T淋巴细胞（CD8~+）的分布与比例。[结果]扶正胶囊点击此处提取物能提升由环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠的胸腺指数和脾脏指数，增强单核细胞吞噬功能，显著提高小鼠细胞免疫因子IL-4、IL-10、IFN-γ含量，降低IL-17、TNF-α含量，上调脾淋巴细胞亚群CD3~+CD4~+的表达程度和提升CD3~+CD4~+/CD3~+CD8~+比值。[结论]扶正胶囊提取物能够提升环磷酰胺所致的免疫抑制小鼠的免疫功能。