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目的：观察健脾活骨方（JPHGF）对酒精致血管内www.selleck.cn/products/amg510皮细胞功能损伤的保护作用，并基于蛋白激酶B/c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶（Akt/JNK/p38）信号通路探索相关作用机制。方法：通过鸡胚尿囊膜实验、胸主动脉环实验和人脐静脉内皮asthma medication细胞（HUVEC）的迁移、侵袭、粘附和管腔形成实验，在有或无酒精（Alcohol，4.6 μg·mL~(-1)）诱导条件下，观察JPHGF不同质量浓度（8、16、32 ng·mL~(-1)）对血管新生的影响；进一步，采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HUVEC中Akt、JNK、p38等磷酸化表达水平。结果：与正常组比较，JPHGF（16、32 ng·mL~(-1)）作用后能显著升高鸡胚尿囊膜新生血管长度（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，JPHGF（8、16、32 ng·mL~(-1)）能浓度依赖地增加酒精诱导降低的胸主动脉环周围微血管数量（P<0.05，P<0.01），JPHGF32 ng·mL~(-1)能增加酒精诱导降低的胸主动脉环周围微Regorafenib分子式血管长度（P<0.05）；JPHGF（16、32 ng·mL~(-1)）均能增强酒精诱导降低的HUVEC的迁移、侵袭、和管腔形成能力，JPHGF（8、16、32 ng·mL~(-1)）A值呈浓度依赖性升高（P<0.05，P<0.01）；进一步，JPHGF（8、16、32 ng·mL~(-1)）均能上调酒精诱导降低的p-p38/p38、p-Akt/Akt蛋白表达水平（P<0.01），JPHGF（16、32 ng·mL~(-1)）均能上调酒精诱导降低的p-JNK/JNK的蛋白表达水平（P<0.01）。结论：JPHGF对酒精致血管内皮细胞功能损伤具有保护作用，其机制可能与激活Akt/JNK/p38信号通路有关，相关研究结果将为JPHGF“健脾活血”功效阐明提供一定的科学依据。

目的 探究模拟失重下EphrinB2/EphB4通路对共培养体系中血管平滑肌细胞的增殖及凋亡的影响，为探索失重环境下航天员心血管功能失调的机制提供思路。方法 利用细胞回转器对人主动脉内皮细胞(HAECs)和人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)的共培养体系进行模拟失重处理，分为正常重力(Control)组、模拟失重(MG)组，培养48 h后，采用qRT-PCR和Western blotting检测HASMCs中EphB4、EphrinB2的表达变化情况，加入EphB4抑制剂NVP-BHG712,观察其对模拟失重下共培养体系中HASMCs的α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、HASMCs增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)等表达的影响；采用免疫荧光检测尾悬吊28 d大鼠颈动脉平滑肌细胞中EphB4的表达情况。结果 HAECs和HASMCs共培养48 h后，与Contro寻找更多l组相比，MG组HASMCs中EphB4和EphrinB2水平明显升高(Pavian immune response<0.05),α-SMA及Bax表达显著下降(P<0.05),PCNA与Bcl-2表达显著增高(P<0.05);与MG组相比，共培养体系中加入EphB4通路抑制剂NVP-BHG712可以使模拟失重下的HASMCs中Bax和α-SMA表达显著升高(P<0.05),PCNA和Bcl-2表达显著下降(P<0.05)。结论 模拟失重效应通过EphrinB2/EphB4通路促进共培养体系中HASMselleckCs的增殖，促进HAECs和HASMCs共培养体系中HASMCs向合成表型转换，并抑制凋亡。

目的 探究基于人跨膜受体蛋白(Notch)-1信号通路研究上调微小RNA-191(miR-191)对甲状腺癌Naporafenib半抑制浓度细胞的干预作用。方法 购买甲状腺癌8505C细胞株，常规培养后分为空白组、下调组、上调组，空白组加入常规细胞培养液做空白处理，下调组加入miR-191 inhibitor行下调转染，上调组加入miR-191 mimics行上调转染。检测各组细胞转染情况，细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力及PF-02341066 MWNotch-1信号通路蛋白表达量。结果 与下调组相比，上调组miR-191表达量显著较高(P<0.05)。与下调组相比，上调组24、48、72 h细胞增殖率显著较低，72 h细胞凋亡率显著较高(P<0.05)。与下调组相比，上调组细胞迁移、侵袭数量显著较少(P<0.05)。与下调组相比，上调组Notch-1、Split多毛增强子(Cell AnalysisHES)5、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)表达量显著较高，Bcl-2表达量显著较低(P<0.05)。结论 上调miR-191可能通过活化Notch-1信号通路，上调Notch-1、HES5、Bax表达量，下调Bcl-2表达量，从而起到抑制细胞增殖、迁移、侵袭活动，促进细胞凋亡。

目的 探讨疏肝健脾法对肝郁脾虚型功能性消化不良(FD)大鼠胃窦组织Osteogenic biomimetic porous scaffolds中胃肠激素的影响。方法 将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、柴术理胃饮低剂量组、柴术理胃饮中剂量组、柴术理胃饮高剂量组和多潘立酮组，每组10只。除正常组外，其余组均采用复合因素方法制备肝郁脾虚型FD模型。造模成功后，柴术理胃饮低、中、高剂量组分别给予13.5 g/kg、27 g/kg、54 g/kg柴术理胃饮灌胃，多潘立酮组给予3.125 mg/kg多潘立酮溶液灌胃，正常组、模型组给予等量生理盐水灌胃，均1次/d,连续21 d。记录各组大鼠末次灌胃当天体重及进食量，计算各组大鼠末次灌胃后胃排空率和小肠推进率，HE染色观察胃窦病理形态变化，蛋白质印迹法检测胃窦组织中P物质(SP)、胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)及血管活性肠肽(VIP)蛋白表达情况，Real Time PCR法检测胃窦组织中SP mRNA表达情况。结果 模型组大鼠末次灌胃当天体重、进食量及末次灌胃后胃排空率、小肠推进率均明显低于模型组(P均<0.05),柴术理胃饮各组和多潘立酮组大鼠体重、进食量、胃排空率及小肠推进率均明显高于模型组(P均<0.05)。HE染色显示模型组大鼠胃窦黏膜层有轻度淋巴细胞浸润，柴术理胃饮各组和多潘立酮组大鼠胃窦黏膜层淋巴细胞浸润程度轻于模型组。与正常组比较，模型组大鼠胃窦组织中SP、GAS、Ceralasertib使用方法MTL蛋白表达量及SP mRNA表达量均明显降低(P均<0.05),VIP蛋白表达量明显增高(P<0.05);柴术理胃饮中、高剂量组大鼠胃窦组织中SP、GAS、MTL蛋白表达量和柴术理胃饮各组、多潘立酮组SP mRNA表达量均明显高于模型组(P均<0.05),柴术理胃饮各组和多潘立酮组大鼠胃窦组织中VIP蛋白表达量Dinaciclib抑制剂均明显低于模型组(P均<0.05)。结论 疏肝健脾法可以促进肝郁脾虚型FD大鼠胃肠蠕动，上调胃窦组织中SP、GAS、MTL表达和下调VIP表达可能是其治疗FD的重要机制之一。

在“脾-肌肉-线粒体”研究基础上，从重症肌无力(MS-275 IC50Myasthenia gravis, MG)病理以线粒体功能失常为关键点，基于“脾主肌肉”,结合中医学“痿证”以脾虚为本、虚实夹杂的病机特点，延伸研究“脾-肌肉-线粒体质量控制”,而线购买Ferrostatin-1粒体质量控制源于骨骼肌干细胞，受制于线粒体自身动态调节，故探讨葛根及其配伍可能通过两个层次调节线粒体质量，治疗MG:其一，在形成更多优质线粒体层面，从骨骼肌干细胞为切入，通过肌肉转录调节因子(myoblastdetermining, Myod)与Pax7动态调节以及Azo dye remediationP38 MAPK、AMPK信号通路激活，保护正常MSCs增殖，保障骨骼肌再生修复，使优质线粒体生成有源；其二，在线粒体自身动态调节层面，以线粒体生物合成、融合与分裂、自噬以及细胞内钙调节为主，形成线粒体活力的高度动态的可塑性网络，保证优质线粒体充满生机。

【目的】建立一种猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的IgA抗体ELISA检测方法。【方法】以PEDV流行株CH/HNPJ/2017(MF152604.1)为生物材料,通过RT-PCR扩增出S2基因(2 368—4 170 bp),并将其插入到原核表达载体pET-24a中,转化大Alpelisib生产商肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达,经镍柱纯化。Western blotting验证重组蛋白S2与PEDV阳性血清的反应原性和特异性。将其作为包被抗原,建立一种基于PEDV变异毒株重组全长S2蛋白的IgA抗体ELISA方法,用棋盘法确定该方法的最优检测条件,对其敏感性、特异性和重复性进行测定,并初步应用于130份猪血清和40份猪口腔黏液的检测。【结果】通过RT-PCR方法扩增出S2基因,成功构建重组表达载体pET-24a-S2,转化大肠杆菌经诱导表达纯化后获得重组S2蛋白。SDS-PAGE结果显示,纯化的S2蛋白条带特异且无杂带;Western blotting试验表明该蛋白与PEDV阳性猪血清具有良好的反应性。ELISA方法反应条件优化结果显示,重组S2蛋白的最佳包被条件为每孔0.5μg、4℃过夜包被;血清最佳反应条件为1∶160稀释,37℃孵育60 min;酶标二抗最佳反应条件为1∶5 000稀释,37℃反应30 min;TMB最佳显色时间为室温下10 min。待检样品S/P值≥0.04时为阳性,S/P值≤0.02时为阴性,S/P值介于0.02～0.04之间为可疑。利用本试验建立的ELISA方法检测猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪德尔塔冠状病毒标准阳性血清,S/P值均<0.02,显示为阴性,说明该方法具有良好的特异性;将PEDV阳性血清进行640倍稀释时利用该方法检测仍为阳性,说明该方法具有良好的敏感性;利用该方法进行批间批内试验,变异系数均小于8%(在10%以内),表明该方法具有良好的重复性。利用该方法检测保存的130份猪血清,结果与IDEXX IgA抗体检测试剂盒CB-839体内的符合率为90.77%;该方法对40份猪口腔黏液的Catalyst mediated synthesis检测结果表明,阳性检出率为90.0%,阴性检出率为为93.3%。【结论】本研究成功构建pET-24a-S2重组质粒,获得纯度较高的重组S2蛋白,并以此作为包被蛋白建立了基于全长S2蛋白IgA抗体ELISA检测方法。该方法能同时有效检测血清和口腔黏液样本,且敏感性强、特异性高、稳定、重复性好,该方法对PEDV的临床诊断及防控具有重要临床实践意义。

【目的】探究猪精子体外获能前后顶体酶抑制剂(AI)表达量以及AI的泛素化水平的变化，了解AI与泛素-蛋白酶体系统(UPS)间的联系，为深入研究泛素-蛋白酶体途径(UPP)在猪精子获能过程中的作用提供参考。【方法】选择18～24月龄的成年健康长白公猪，使用手握法采集公猪精液，将一部分精子进行获能处理，一部分作为对照(鲜精),使用计算机辅selleck合成助精子分析系统(CASA)、低渗肿胀法(HOST)、考马斯亮蓝染色、Western blotting和锌离子(Zn~(2+))标记检测获能前后精子的动力学参数、质量参数、酪氨酸磷酸化水平和Zn~(2+)含量；Western blotti获悉更多ng检测获能前后精子中AI和泛素(Ub)的表达量；免疫荧光法检测AI和Ub在精子中的定位；免疫共沉淀分析AI和Ub的结合情况。【结果】与新鲜精子相比，获能精子动力学参数VSL和BCF极显著升高(P<0.01),获能精子的活力、质膜完整性、顶体膜完整性、活率均极显著降低(P<0.01);获能精子蛋白酪氨酸磷酸化水平极显著升高(P<0.01),Zn~(2+)极显著外流(P<0.01)。Western blotting检测结果表明，与新鲜精子相比，获能精子AI表达量极显著降低(P<0.01),Ub表达量显著升高(P<0.05);免疫荧光结果表明，AI和Ub均定位于Genetic map精子头部顶体区域；免疫共沉淀分析结果显示，获能精子AI发生了泛素化，在抑制泛素激活酶(E1)后，泛素化的AI极显著减少(P<0.01)。【结论】在猪精子体外获能期间，精子蛋白酪氨酸磷酸化水平极显著提高、泛素化水平增强，且AI被降解，从而释放有活性的顶体酶，为后续精子穿透透明带(ZP)与卵母细胞结合完成受精做准备。

目的 探讨程序性死亡受体-1(PD-1)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抑制剂联合抗血管生成药物治疗晚期非wrist biomechanics小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效和不良反应，并探索潜在的预后相关因素。方法 回顾性分析2015年1月至2019年12月于我院接受PD-1/PD-L1抑制剂联合抗血管生成药物治疗的49例晚期NSCLC患者，观察患Bafilomycin A1者的临床疗效、不良反应及生存情况，并探讨治疗前外周血粒淋比(NLR)和乳酸脱氢酶(LDH)与生存预后的相关性。结果 共纳入49例晚期NSCLC患者，其中完全缓解(CR) 0例，部分缓解(PR) 14例，疾病稳定(SD) 22例，总体客观缓解率(ORR)为28.6%，疾病控制率(DCR)为73.5%。至随访截止时间，全组患者的中位无进展生存期(PFS)为5.7个月(95%CI:4.6～6.8个月)，中位总生存期(OS)为12.9个月(95%CI:4.7～21.1个月)。多因素Cox回归分析结果显示，治疗前LDH水平是影响患者PFS (HR=3.020,95%CI:1.539～5.925,P=0.001)和OS (HR=2.403,95%CI:1.157～4.990,P=0.019)的独立预后因素。35例患者发生了药物相关不良反应，其中较常见的为疲劳、皮疹、恶心、腹泻、高血压等。3～4级不良反应的发生率为8.2%(4/49)，分别为腹泻1例、肺炎1例、肝功能损伤1例及中性粒细胞减少1例。结论 PD-1/PD-L1抑制剂联合抗血管生成药物Talazoparib供应商治疗晚期NSCLC显示了良好的临床疗效，且不良反应相对可控。治疗前外周血LDH水平是影响患者PFS和OS的独立预后因素，有助于筛选能从该治疗方案中获益的潜在人群。

红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)作为中国北方的一种重要水产生物,其经济产量深受海水氧含量的影响。近年来随着红鳍东方鲀养殖业的大幅扩增,海水不同溶氧量对红鳍东方鲀养殖的影响成为研究的热点。本研究基于红鳍东方鲀的基因组,对趋化因子及受体进行了鉴定分析;对红鳍东方鲀的三个组织(脑、血液、鳃)在不同溶氧量条件下进行处理和转录组测序分析,了解趋化因子及其受体在不同溶氧条件下的表达水平;进一步利用DNA pull down技术对在低氧胁迫下表现出明显差异表达的趋化因子及其受体进行基因转录调控层面的分析,剖析这些趋化因子及其受体相关的基因调控网络,进而揭示相关趋化因子及其受体与低氧胁迫的关系以及发挥功能的分子机制。其主要结果如下:1、利用生物信息学方法对红鳍东方鲀现有的基因组资源进行数据挖掘,并利用已报道的鲶鱼、斑马鱼和人三个物种的趋化因子序列比对到红鳍东方鲀基因组上,系统地从红鳍东方鲀基因组中鉴定出了9个CXC趋化因子配体(CXCL)基因、11个CXC趋化因子受体(CXCR)基因、22个CC趋化因子配体Javanese medaka(CCL)基因、25个CC趋化因子受体(CCR)基因。系统进化树显示相比于哺乳类、两栖类和鸟类,硬骨鱼之间在进化上的亲缘关系非常近。共线性分析显示红鳍东方鲀趋化因子及其受体所在染色体区域上下游的基因与斑马鱼对应区域基因分布结构保守。蛋白结构域分析显示除CCL17是非编码RNA外,上述21个CC趋化因子配体成员均含有保守的CC结构域,9个CXC趋化因子配体成员均含有保守的CXC结构域。除CCR3.2和CCR3.3是非编码RNA外,上述34种趋化因子受体均含selleck NMR有趋化因子受体特有的保守的7跨膜GPCR结构域。2、通过对红鳍东方鲀的三个组织(脑、血液、鳃)在不同溶氧量条件下进行处理和转录组测序分析,进而对三个组织的counts数进行统一均一化处理,结果表明:不同组织在应对低氧时表现出各自的特点。在脑中,转录组变化最小,差异基因14个;在血液中转录组变化最大,差异基因745个。可以推测,红鳍东方鲀对低氧的耐受性在脑中表现突出。此外,通过各组织筛选出的差异基因比较,我们发现各组织均表现出了各自大量不同于其他组织的差异基因数量,而组织之间共有的差异基因比例很低,这跟这些组织器官的功能息息相关。差异表达基因的GO功能和KEGG信号通路富集性分析结果表明,差异基因大多都富集到了肌肉收缩的调节(regulation of muscle contraction),谷氨酸突触(glutamatergic synapse),突触膜(synaptic membrane)等生物学过程中,调控HIF-1、AMPK、趋化因子和氨基酸代谢的信号路径可能在红鳍东方鲀的低氧应答反应中扮演着重要角色。此外,hif1、vegfa、gck、pfkfb和agr等基因在应对低氧过程中发挥了关键作用。在大脑中其可能通过强糖酵解为脑细胞提供了丰富的细胞结构和还原底物,同时降低氧化磷酸化和活性氧水平避免脑细胞氧化应激死亡;在鳃组织中其可能通过促进细胞凋亡去除不需要的或者异常的细胞以维持低氧胁迫下鳃组织内环境的稳定;在血液中其可能通过催化半必需氨基酸L-精氨酸转化为鸟氨酸和尿素,进而限制T细胞的活化和增殖,在血液中发挥多效性免疫调节的作用,以增强低氧耐受能力。3、低氧胁迫后,基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)表明趋化因子信号通路在红鳍东方鲀脑、血液和鳃中均呈现下调的表达趋势,但是仅在鳃中下调显著(adjusted P value<0.05)。对红鳍东方鲀趋化因子及其受体在三个组织中的表达量进行了热图聚类分析,结果显示趋化因子及其受体在组织间的表达模式差异较大,而在组织内的表达模式相近,表明趋化因子的表达具有组织特异性。我们选取低氧胁迫下在组织内表达量变化有差异、组织间表达量变化有明显趋势的趋化因子CCL25b及其受体CCR9b进行DNA pull down实验,质谱鉴定数据及GO富集分析结果表明:6个转录因子(C1QBP、PURA、ARHGAP35、NME2、RAP2C和DRG1)富集到了CCL25b和CCR9b的核心启动子区域,这些初步结果将有助于推进对与CCL25b和CCR9b表达调节机制有关的潜在生物学SCH772984过程的理解。虽然这些蛋白在调控CCL25b和CCR9b基因表达中的实际功能尚不清楚,但我们为寻找CCL25b和CCR9b的DNA相互作用蛋白提供了新的思路。

目的 研究外周血自噬基因Benlin-1表达联合急性生理和慢性健康评分Ⅱ(Acute Physiology and Chronic Health EvaluationⅡ,APACHEⅡ)评分预测脓毒症患者28 d病死的价值。方法 选取脓毒症患者238例作为脓毒症组，同期体检的健康者104例作为对照组，采用Western blot检测外周血淋巴细胞中Beclin-1的表达。根据脓毒症患者28 d病死情况分为存活患者和病死患者，采用Kaplan-Meier曲线和ROC曲线分析Beorgan system pathologyclin-1表达及APACHEⅡ评分对28 d病死的预测价值，采用COX回归模型分析脓毒症患者28 d病死的影响因素。结果 脓毒症组外周血中Beclin-1的表达水平低于对照组(P<0.05);脓毒症组中病死患者外周血中Beclin-1的表达水平低于存活患者，APACHEⅡ评分高于存活患者(P<0.05);经Kaplan-Meier曲线和ROC曲线分析，Beclin-1表达、APACHEⅡ评分对脓毒症患者28 d病死具有预测价值；经COX分析，Beclin-1表达、APACHEⅡ评分是脓毒症患者28 d病死的影响因素；在Logistic模型中生成Beclin-1联合APACHEⅡ评分的新指标-0.566-2.238×Beclin-1+0.065×APACHEⅡ评分，Proton Pump抑制剂该指标预测28 d病死的曲线下面积为0.6452、优于单一指标。结论 脓毒症患者外周血Beclin-1表达及APACHEⅡ评分是脓毒症患者28 DS-3201 MWd病死的影响因素，beclin-1联合APACHEⅡ评分对28 d病死的预测价值优于单一指标。