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目的 观察柴归颗粒治疗水瘀互结型Ⅲ型前列腺炎的临床疗Oncology Care Model效。方法 将80例水瘀互结型Ⅲ型前列腺炎患者按照随机数字表法分为2组，对照组40例(实际完成27例)口服盐酸坦索罗辛缓释胶囊治疗，治疗组40例(实际完成35例)口服柴归颗粒治疗，2组均治疗6周。比较2组治疗前后前列腺MCC950小鼠液白细胞计数、卵磷脂小体、美国国立卫生研究院慢性前列腺炎症状评分(NIH-CPSI)、病情轻重分级，并统计2组疗效及不良反应发生情况。结果 2组治疗前后组内及组间前列腺液白细胞计数、卵磷脂小体比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组治疗后NIH-CPSI评分较本组治疗前降低(P<0.05),且治疗组治疗后低于对照组(P<0.05)。治疗组治疗后病情程度显著缓解(P<0.05),对照组治疗前后病情程度无明显改善(P>0.05)。2组治疗后病情程度比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)https://www.selleck.cn/products/BAY-73-4506.html。结论 柴归颗粒治疗水瘀互结型Ⅲ型前列腺炎疗效显著，不良反应少，可以改善NIH-CPSI评分。

玉米作为我国第一大粮食作物,其产量关系着国家粮食安全问题。株高是现代玉米育种中的一个重要农艺性状。适宜的株高可以增强作物的抗倒伏性,增加作物的种植密度和收获指数,从而有利于稳产增产。近些年研究发现,WRKY转录因子家族不仅参与植物生物及非生物胁迫的调控,而且在植Selenocysteine biosynthesis物生长发育和株高形态建成方面具有重要作用。本研究从玉米中克隆了一个株高相关的WRKY家族基因ZmWRKY92,并对其分子特征和生物学功能进行了研究。主要研究结果如下:1.ZmWRKY92基因编码区全长1497 bp,编码498个氨基酸。ZmWRKY92蛋白含有两个保守的WRKY结构域和C2H2型锌指结构,结果表明ZmWRKY92是第I亚族成员。2.组织表达模式结果表明ZmWRKY92在茎和叶中的相对表达量较高。激素诱导表达模式结果表明ZmWRKY92在表油菜素内酯、生长素和赤霉素这三种激素的分别处理下,表达量均有所变化。3.亚BMS-354825细胞定位分析实验表明ZmWRKY92蛋白定位于细胞核中。酵母转录活性实验表明ZmWRKY92在酵母中具有转录活性,进一步分段实验表明其活性区段位于N端和C端。双荧光素酶报告基因检测实验和酵母单杂交实验结果表明ZmWRKY92能够特异性结合W-box顺式作用元件。4.植株表型分析结果表明,玉米wrky92突变体在拔节期之后均显著矮于野生型B73玉米,其籽粒的大小和百粒重均小于野生型。茎节组织石蜡切片结果表明,wrky92突变体的半矮化表型是由于节间细胞体积变小所引起的。5.内源激素测定结果表明,玉米wrky92突变体中的GA_3和IAA含量均显著低于野生型。6.通过对野生型B73和玉米wrky92突变体进行转录组测序分析并结合q RT-PCR验证,结果表明ZmWRKY92的突变导致玉米中株高相关基因的表达量明显发生改变。7.启动子区域结合特性实验表明ZmWRKY92是GA合成通路相关CH-223191溶解度基因Zm00001eb175950和Zm00001eb280200的上游转录调控因子。综上所述,本研究从EMS突变体库中筛选鉴定得到株高相关玉米突变体wrky92,进一步研究发现玉米突变体wrky92的半矮化表型是由于植株节间缩短所导致的,ZmWRKY92通过对GA合成通路的调控影响了玉米植株的株高表型。这一研究结果为发掘玉米株高相关基因,选育矮杆玉米种质资源提供了理论参考。

真核生物进化中,内体蛋白分选转运复合体(The endosomal sorting complex required for transport,ESCRT)是一个在结构和功能上都保守的复合体,可以调节多囊泡体/液泡前体(Multivesicular body/Prevacuolar compartment,MVB/PVC)中腔内小泡(Intraluminal vesicles,ILVs)的形成,参与泛素化的膜蛋白降解过程。因此,ESCRT各亚基及其辅助蛋白影响着植物的生长和发育过程。植物ESCRT复合体由TOL蛋白家族、ESCRT-I、ESCRT-Ⅱ、ESCRT-Ⅲ和VPS4/SKD1组成,CHMP1(Chromatin Modifying Protein;Charged Multivesicular Body Protein 1)是ESCRT-Ⅲ的辅助蛋白,能够与VPS4/SKhepatic cirrhosisD1结合,调控ESCRT-Ⅲ复合体亚基的解体和从内体膜上的解离。目前,CHMP1蛋白的相关研究主要集中在酵母及哺乳动物中,植物中的CHMP1蛋白具体的功能及其调控机制仍有待研究。本研究在小麦基因组中鉴定及克隆到玉米Zm SAL1(CHMP1在玉米中的同源物)的同源基因TaSAL1,并利用CRISPR-Cas9技术创制小麦TaSAL1基因编辑突变体。最后,通过遗传分析和表型鉴定的方法对小麦TaSAL1的CHIR-99021体外生物学功能进行初步研究。主要研究结果如下:1.基于同源比对方法,我们鉴定并克隆出小麦中TaSAL1的三个同源拷贝TaSAL1-A、TaSAL1-B及TaSAL1-D。另外,不同物种ESCRT组分及CHMP1蛋白的系统进化分析结果表明,TaSAL1属于VPS46亚类,且CHMP1蛋白在进化上高度保守。2.基于小麦公共转录组数据,我们发现TaSAL1的同源拷贝在小麦各个组织中都有表达。亚细胞定位结果表明,TaSAL1蛋白在烟草叶肉细胞中呈斑点状分布,与细胞器标记(细胞核、高尔基体和细胞膜)没有共定位,但与内质网相关。3.TaSAL1敲除突变体及其PORCN抑制剂后代的基因型鉴定结果显示,突变体aa Bbdd和Aabbdd表现出异常的自交分离比,纯合基因型突变体aabb DD和aabbdd均无法获得。通过突变体aa Bbdd与野生型AABBDD的正反交遗传分析,我们推测TaSAL1-abd雄配子体生物发生异常,该种基因型雄配子传递率仅为11.4%。4.田间及温室环境下突变体与野生型的表型考察结果显示,突变体aa Bbdd和Aabbdd均表现出分蘖数目减少、株高降低和抽穗期延迟现象。5.突变体aa Bbdd及野生型AABBDD的籽粒代谢组结果表明,激素类代谢物在突变体及野生型间呈现显著性差异。其中,突变体aa Bbdd的生长素、赤霉素和脱落酸含量显著增加,细胞分裂素含量显著降低。综上所述,本研究成功克隆小麦TaSAL1三个同源拷贝,初步探讨了TaSAL1影响雄配子体生物发生和胚胎发生,以及可能通过介导激素途径来影响小麦株型的塑成,并为进一步探索ESCRT亚基及辅助蛋白在植物中的功能提供了理论参考。

目的 优化盐酸莫西Antineoplastic and I抑制剂沙星氯化钠注射液的无菌检查方法。方法 按照《中华人民共和国药典》2020年版无菌检查方法适用性试验相关要求，采用HPLC法测定混合纤维素(MCE)膜、尼龙(N66)膜和聚偏二氟乙烯(PVDF)膜过滤后膜上样品的残留量，确定样品吸附性小的滤膜；采用HPLC法测定4种不同冲洗液(0.1%无菌蛋白selleckchem KD025胨水溶液、pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液及含卵磷脂和聚山梨酯80组分的0.9%无菌氯化钠溶液)分别冲洗300 mL、500 mL后膜上样品的残留量，确定适宜的冲洗液。结果 药典规定的6种试验菌均可在5 d内avian immune response正常生长。结论 采用薄膜过滤法选择滤膜材质为PVDF或N66的集菌培养器，在冲洗液中添加0.1%卵磷脂和0.5%聚山梨酯80能减少冲洗液用量，且降低因冲洗对污染菌造成的机械损伤并缩短检验耗时和节约检验成本。

彩叶香樟(Cinnamomum camphora)是近年选育的春色叶新品种，市场前景广阔，但尚未建立有效的鉴别技术体系，影响了新品种权保护及市场流通。为了实现彩叶香樟新品种的快速鉴定，本研究基于转录组开发SSR标记，并构建其指纹图谱。利用Illumina高通量测序平台对彩叶香樟新品种’涌金'(C.camphora’Yongjin’)进行转录组测序，共获得129 175条单基因簇(Unigene)，总长度为9Medication use2 429 171 bp。通过MISA (MIcroSAtellite identification tool)软件对转录组序列进行SSR搜索，发现28 895条序列中含有36430个SSR位点，平均2 537.2 bp出现一个SSR，发生频率为22.37%；单核苷酸、二核苷酸、三核苷酸重复单元分别占总SSR的49.74%、29.12%和19.93%。随机选择54对引物进行PCR扩增，能够清晰扩增出期望产物的引物有39对，其中32对在23份香樟种质资源中表现多态性。采用非加权组平均法(unweighted pair-group method with ariGDC-0068 MWthmetic means, UPGMA)对23份香樟种质进行聚类分析，其相似系数为0.69～0.88。在相似性系数0.70处，可将供试材料分为三大类群。选出c117334、c90845、c108367、c115142、c49114selleck合成、c101928共6对引物组合构建指纹图谱，能有效将3个新品种与其子代以及不同地理来源的香樟种质完全区分。本研究为彩叶香樟新品种鉴定、知识产权保护以及分子辅助育种提供技术支持和理论依据。

目的 探讨Notch信号通路调控巨噬细胞极化方向与大鼠纤维化型饲鸽者肺的关系。方法 选取正常SD大鼠(Ctrl组),通过观察病理、CT,检测纤维化标记物构建纤维化型过敏性肺炎大鼠模型(M组),予以γ分泌酶(DAPT)抑制Notch信号通路(M+DAPT组),通过荧光定量PCR技术检测阻断Notch信号通路点击此处对巨噬细胞极化方向的影响。结果 正常大鼠气道内滴注致敏原冻干粉20周后，病理及CT可见纤维化形成，且α-SMA、TGF-β1表达水平增高，证实造模成功；M组与Ctrl组比较：纤维化型过敏性肺炎大鼠肺组织Notch信号通路关键蛋白配体，DLL1、DLL4、JAG1、JAG2及受体Notch1、Notch2的蛋白表达水平增高；应用DAPT抑制Notch信号通路后DLL4、JAGselleckchem Ferrostatin-11、JAG2及受体Notch1均下降(P<0.05);M组较Ctrl组比Biotic resistance较：M1型巨噬细胞标记基因肿瘤坏死因子(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达量下降；M2型巨噬细胞标记基因甘露糖受体C2(Mrc2)、重组人精氨酸酶1(Arg-1)mRNA表达量升高(P<0.05),应用DAPT抑制剂后TNF-α、iNOS基因mRNA的相对表达量升高，Mrc2、Arg-1基因mRNA的相对表达量降低(P<0.05)。结论 Notch信号通路调控巨噬细胞极化方向，给予DAPT抑制剂后，抑制巨噬细胞向M2型极化，有效延缓纤维化形成。

目的:益元化腐汤以彝医理论“腐肠理论、元气”为理论指导而组成的方药,临床常用于溃疡性结肠炎、肛肠疾病等病症,具有较好的临床疗效。本课题研究彝药益元化腐汤调控T细胞亚群介导治疗溃疡性结肠炎的效应机制,为益元化腐汤临床应用治疗溃疡性结肠炎提供科学基础,传承与创新彝族医药。方法:1、构建细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞株Raw264.7炎症细胞模型,MTT法检测益元化腐汤此网站浸膏对炎症细胞细胞毒性作用;采用Griss方法检测益元化腐汤浸膏对炎症细胞模型NO产生的影响。2、将32只C57BL/6健康雌性小鼠按照体质量的不同,随机分为4组:正常组、模型组、益元化腐汤低剂量(4.05g·kg~(-1))和高剂量组(8.1g·kg~(-1)),每组8只。除正常组,其余用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导建立小鼠溃疡性结肠炎模型,自由饮水,每2d更换一次饮用水,持续造模8d;自饮用DSS第1天起,各组按相应剂量灌胃给药,每日1次,连续8d。予以益元化腐汤浸膏治疗,观察小鼠的大便、活动、体重,采用疾病活动指数(Diseases activity index,DAI)评价溃疡性结肠炎症状,苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,H&E)观察结肠组织形态学变化;荧光定量PCR(q PCR)检测脾、肠系膜淋巴结淋巴细胞T细胞亚群(IL-17A、RORγt、IFN-γ、Foxp3)的相对表达SCH772984 molecular weight水平;流式细胞术(flow cytometry)检测脾脏和淋巴结表面标志(CD4~+、CD3~+、CD44~+、Ki67~+、B220~+)和胞内Th1细胞(IFN-γ~((10))CD4~+T细胞)、Th17细胞(IL-17~((10))CD4~+T细胞)和调节性T细胞(CD4~+Foxp3~+T细胞)的表达水平。结果:1、益元化腐汤对Raw264.7细胞活性的影响以及对NO释放的抑制作用益元化腐汤125μg/ml、250μg/ml、500μg/ml剂量组显著抑制NO的产生(P<0.05或P<0.01),其IC_(50)为202.6μg/ml,CC_(50)大于500μg/ml。2、益元化腐汤对溃疡性结肠炎模型小鼠疾病活动指数的影响和模型组对比,益元化腐汤4.05g·kg~(-1)和8.1g·kg~(-1)剂量组小鼠体质量、结肠长度和结肠质量明显升高,DAI评分明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。3、益元化腐汤对溃疡性结肠炎小鼠结肠组织病理损伤程度的影响模型组结肠组织表现为大片黏膜层缺失、脱落,弥漫性炎性细胞浸润;益元化腐汤4.05g·kg~(-1)和8.1g·kg~(-1)剂量组较模型组结肠组织的炎性细胞浸润和黏膜层缺损减小,肠黏膜溃疡减轻。4、益元化腐汤对溃疡性结肠炎模型小鼠淋巴T细胞亚群的影响(1)表面标志流式细胞术检测结果显示,益元化腐汤药物干预后对,8.1g·kg~(-1)剂量组显著下调脾脏淋巴细胞γδTCR表达(P<0.05),而益元化腐汤对脾、肠系膜淋巴结CD4~+、CD3~+、CD44~+、Ki67~+、B220~+比例和绝对数量无明显的影响。(2)胞内染色流式细胞术检测结果显示,与模型组相比,益元化腐汤4.05g·kg~(-1)和8.1g·kg~(-1)剂量治疗后,抑制Th1细胞(CD4~+IFN-γ~+T细胞)、Th17细胞(CD4~+IL-17~+T细胞)绝对数量和比例(P<0.05或P<0.01),然而对Treg细胞(CD4~+Foxp3~+调节性T)表达无明显影响。5、益元化腐汤对溃疡性结肠炎模型T细胞亚群相关因子mRNA表达的影响qPCR检测结果显示,与模型组比较,益元化腐汤8.1g·kg~(-1)剂量组对肠系膜淋巴结Th17细胞RORγτm RNA表达显著下调,差异有显著统计学意义(P<0.05或P<0.01);对于脾脏,益元化腐汤8.1g·kg~(-1)剂量组显著下调UC小鼠Th17细胞因子IL-17A和转录因子RORγt m RNA表达(P<0.05)。结论:益元化腐汤能够改善溃疡性结肠炎模型小鼠的体质量、结肠质量、结肠长度及病理学评分等一般情况,还能显著下调γδTCR表达以imported traditional Chinese medicine及Th17细胞因子IL-17A和转录因子RORγt m RNA表达,且抑制Th1细胞(CD4~+IFN-γ~+T细胞)、Th17细胞(CD4~+IL-17~+T细胞)绝对数量和比例,从而抑制Th17细胞诱导的炎症反应介导治疗溃疡性结肠炎。发挥彝医药治疗溃疡性结肠炎的优势,为治疗溃疡性结肠炎提供对方面、多角度临床需要,可供研究溃疡性结肠炎方面的工作者所借鉴。

链状裸甲藻(Gymnodinium catenatum)是已有报道中唯一一种可产生麻痹性贝类毒素的裸甲藻,麻痹性贝类毒素可在食物链中传递,通过堵塞肌纤维Na~+通道抑制神经传导,导致动物及人类中毒甚至死亡。在中国近海,链状裸甲藻营养细胞及孢囊分布广泛且多次引发赤潮,已成为危害我国近海生态健康与食品安全的常见赤潮藻。不同海域的链状裸甲藻藻株生长和产毒特性存在差别,对环境因子的响应特征也有所差异,而关于我国福建沿海链状裸甲藻藻株产毒特性及环境响应特征的研究尚未见报道。因此,本文设置不同环境条件,探究链状裸甲藻在Laboratory Refrigeration生长、酶活性、产毒等方面的响应特征,同时采用转录组测序技术,进一步分析链MC3采购状裸甲藻产毒特征的分子机制。主要发现如下:(1)我国福建近海链状裸甲藻藻株(TIO523)与其他链状裸甲藻藻株具有相似的LSU和ITS序列,不同地理区域来源的链状裸甲藻在系统进化树上聚为一支,通过比较藻株5.8S rDNA基因的单核苷酸多态性,其第5个碱基为胞嘧啶,属于C-gene型;产毒特性实验发现藻株细胞毒性为12.26±0.10 pg STX eq/cell,毒素种类包括C1、C2、dcneoSTX、GTX3-5,以C1/2为主;毒理实验显示链状裸甲藻仅对凡纳滨对虾有急性毒性作用,且存活率以及存活率受到显著抑制的时间随着藻细胞浓度的增加而降低,但对轮虫、卤虫、糠虾、大菱鲆四种生物不产生急性毒性作用。(2)光照强度、温度、盐度均对链状裸甲藻生长产生显著影响。链状裸甲藻在缺少光照的条件下无法生长,在(0-70μmol/(m~2 s))内链状裸甲藻的最大细胞密度随光照强度的增加而增加;低温抑制链状裸甲藻的生长,20℃最利于链状裸甲藻的生长;最适生长的盐度范围是25-35。三种环境因子均不改变链状裸甲藻产生的毒素种类。低温、低盐促进藻细胞产毒,细胞毒性增强,温度过高(30℃)或过低(15℃)都会导致C1相对含量的下降和C2相对含量的上升,低盐(20)和高盐(40)也会导致C1相对含量的下降。光照强度对链状裸甲藻毒素产生无影响。(3)链状裸甲藻在以NaNO_3、NaNO_2、NH_4Cl、尿素为唯一氮源的水体中均可生长,但对NH_4Cl的亲和性最高,高浓度的NaNO_2、NH_4Cl、尿素对藻细胞有毒性效应。链状裸甲藻中硝酸还原酶是结构性表达且活性较低,谷氨酰胺合成酶和脲酶的活性分别受其底物(铵盐和尿素)的诱导而增高。链状裸甲藻在以NaH_2PO_4、6-磷酸葡萄糖、β-甘油磷酸和ATP为唯一磷源的水体中均可生长,但对ATP的利用效率最低。链状裸甲藻可通过提高碱性磷酸酶活性水解环境中的有机磷,满足藻细胞对磷的需求。ATP可诱导藻细胞产生较高的碱性磷酸酶活性,表明藻细胞对ATP的利用可能需要碱性磷酸酶参与,而其他小分子有机磷和无机磷中的碱性磷酸酶活性相似且较低,表明细胞对其吸收利用可能并不需要碱性磷酸酶的参与,这可能是导致链状裸甲藻对ATP的利用效率最低的原因。氮充足和磷缺乏会增强链状裸甲藻细胞毒性,然而氮浓度改变不影响链状裸甲藻产生毒素的比例,但是较低的磷浓度降低C2:C1毒素的比例。(4)利用无参转录组技术,探究不同氮浓度(25、100和800μmol N/L)和温度(15、20和30℃)对胞内产毒相关细胞过程转录表达的影响。结果表明,与100μmol/L氮浓度处理组相比,在高氮环境(800μmol N/L)中藻细胞中光合作用通路的关键基因呈现显著下调的趋势,此时细胞毒性变化趋势却相反,在低温条件下(15℃)的链状裸甲藻也呈现类似的表达模式;然而,在高温环境下参与催化合成S–腺苷甲硫氨酸的metK基因表达出现显著下调(p<0.01),表明高温可以抑制metK基因表达,从而限制S–腺苷甲硫氨酸的合成,同时,高温抑制合成3'-磷酸腺苷硫酸盐的met3基因表达,限制3'-磷酸腺苷硫酸盐的合成,二者均可导致细胞产毒下降;高氮环境下,参与3'-磷酸腺苷硫酸盐合成的met3和cysC基因表达均上调,参与3'-磷酸腺苷硫酸盐分解的sal基因表达下调,表明高氮促进细胞内3'-磷酸腺苷硫酸盐的积累,导致细胞产毒增加。此外,产毒相关基因sxt A和sxtG基因表达稳定,不受氮浓度或温度影响。本论文探讨了链状裸甲藻在不同环境条件下的生长和产毒特性,为我国近海链状裸甲藻的毒理学效应提供了较为全面分析;同时,基于转录组学分析手段初步研究了环境因子对链状裸甲藻产毒ZD1839 NMR的分子调控机制,研究结果为揭示链状裸甲藻赤潮发生的环境调控机制提供科学解释,具有重要的理论和现实意义。

目的：研究静脉输液针头连接肝素帽在SPECT/CT骨显像中的应用效果。方法：选取2022年8月～11月行SPECT/CT骨显像的患者300例，随机分为对照组和观察组，每组150例。对照组采用2 mL注射器直接静脉注射~(99m)Tc-MDP，观察组采用静脉输液头皮针连接肝素帽，用5 mL注射器抽吸生理盐水排尽空气后行静脉穿刺，建立静脉通路后注射~(99m)Tc-MDP，注射核素显像剂2～4 h后行SPECT/CT骨显像扫描。观察两组患者~(99m)Tc-MDP外漏发生率、注射所需时间及图像质量，收集数据进行统计学分析。结果：观察组核素显像剂外漏发生率（0.67%）低于对照组（16.67%）；观察组注射时间（20.85±2.14）conventional cytogenetic techniques低于对照组的（38.89±17.51）s；观察组图像质量优于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：输液针头Belumosudil浓度连接肝素帽静脉注射99m Tcselleckchem Alisertib-MDP，不仅降低了显像剂外漏率，确保显像剂足量安全注射要求，还提高图像质，缩短放射性药品注射时间，减少了放射性核素接触时间，优化辐射防护措施。

细胞表面受体(Cell surface receptors)是能感知细胞外信号配体并介导跨膜信号转导以操纵细胞内下游信号,从而影响细胞相关生理和病理状态的一类分子。多种细胞行为,如生长因子信号转导、免疫系统功能、细胞通讯、细胞粘附、细胞迁移和细胞凋亡等都受细胞表面受体聚集的调控。其中,肿瘤细胞表面高表达的核仁素(Nucleolin,NCL)作为典型的受体,参与了许多与细胞增殖、细胞周期和凋亡有关的信号通路,同时也与肿瘤发生、发展过程密切相关,已成为癌症诊断和治疗的重要靶点。通过细胞表面NCL聚集调控细胞凋亡,可以为肿瘤治疗提供一种新的方式,也有望为抗肿瘤药物靶点的研发提供依据。目前,多种策略例如分子纳米技术、磁驱动、聚合物和DNA纳米结构等可用于调控细胞表面受体聚集,从而调节细胞命运。目前受体聚集调控方式大多依赖于外部刺激,如光、热、磁场等,虽然能有效诱导受体聚集,但难以避免对正常组织的损伤。因此,发展新型的受体聚集策略,在有效的杀死肿瘤细胞的同时降低对正常组织的伤害具有非常重要的意义。肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)作为一种区别正常细胞与癌细胞的重要标志,受到临床的重视。肿瘤微环境中的异常因素,如缺氧、高浓度ATP、细胞外低p H和肿瘤相关酶的异常表达,被认为是癌症的特征,在受体聚集中也发挥着重要作用。因而,利用肿瘤微环境原位触发受体聚集有望为靶向治疗提供一种新型有力的手段。金纳米颗粒(Gold nanoparticles,Au ATM/ATR抑制剂NPs)具有稳定性高、易修饰、比表面积大及独特的局域表面等离子体共振(Localized surface plasmon resonance,LSPR)吸收和散射等特点。同时,DNA材料也具有生物相容性好、可编辑性强等优点。为此,本文将能靶向细胞表面NCL的核酸适配体AS1411、特异性响应肿瘤细胞表面高浓度ATP的适配体(aptamer)和微酸性环境的I-strand分别修饰到Au NPs表面,构建了Au NPs-AS1411-apt纳米器件及AI-Au智能纳米器件,用于原位诱导细胞表面NCL受体聚集并触发细胞凋亡。开展的研究内容具体如下:1.基于肿瘤细胞表面高浓度ATP原位诱导NCL聚集调控细胞凋亡本研究利用Au-S键将NCL适配体AS1411和ATP分裂适配体连接到Au NPs上,构建了靶向癌细胞的Au NPs-AS1411-apt纳米器件。利用肿瘤细胞表面高浓度ATP与其分裂适配体的特异性结合,拉近Au Nfungal superinfectionPs颗粒之间的距离,诱导肿瘤细胞表面NCL受体聚集,实现了细胞凋亡调控。LSPR吸收及散射光谱、暗场光散射(Dark field microscopic imaging,DFM)成像等实验结果表明,ATP能有效调控Au NPs-AS1411-apt纳米器件聚集。同时,该器件具有良好的血清稳定性和核酸酶稳定性。更重要的是,细胞毒性实验表明Au NPs-AS1411-apt对正常细胞具有良好的生物相容性,而对乳腺癌细胞(MCF-7)表现出明显的细胞毒性,且伴随着ATP浓度增大,细胞存活率逐渐降低。Calcein-AM/PI活死细胞双染色及细胞核DAPI染色实验表明,随着ATP浓度增大,Au NPs-AS1411-apt纳米器件诱导细胞凋亡效果越来越明显。最后,我们用细胞色素C(Cyt-c)及caspase-3免疫荧光成像探究了Au NPs-AS1411-apt纳米器件诱导细胞凋亡的有关通路,表明线粒体内源性途径参与了细胞表面NCL受体聚集诱导的凋亡过程。2.肿瘤细胞表面微酸性环境原位激活NCL聚集诱导细胞凋亡我们进一步将NCL适配体AS1411和具有酸响应的DNA序列(I-strand)修饰到Au NPs表面,构建了靶向肿瘤细胞表面的AI-Au智能纳米器件。利用肿瘤细胞的微酸性环境触发Au NPs表面的I-strand形成i-Motif结构,使得细胞表面两个或多个相邻的AI-Au智能纳米器件形成交联或聚集状态,从而实现原位诱导NCL受体聚集,并触发肿瘤细胞凋亡。LSPR吸收及散射光谱、水合粒径、扫描电子显微镜(Scanning electron microscope,SEM)等结果显示在溶液p H逐渐降低(7.4,6.5,6.0,5.0)时,AI-Au智能纳米器件聚集程度逐渐增加。DFM成像表明,随着肿瘤细胞表面酸度增加,AI-Au智能纳米器件聚集引起的光散射强度逐渐增加。更重要的是,细胞毒性实验、Calcein-AM/PI活死细胞双染、细胞核染色实验及流式细胞术等结果表明,随着肿瘤细胞表面p H逐渐降低,细胞核逐渐皱缩、细胞体积缩小,活细胞的比例从99.9%降低到51.2%,细胞Mirdametinib试剂凋亡效果显著。Cytc/caspase-3免疫荧光成像进一步证实AI-Au智能纳米器件诱导的细胞凋亡涉及线粒体内源性途径。综上所述,本文在细胞膜上构建了Au NPs-AS1411-apt纳米器件及AI-Au智能纳米器件,靶向结合肿瘤细胞表面NCL,并利用肿瘤细胞表面高浓度ATP及微酸性环境等特有的因素,原位诱导纳米器件聚集,调控细胞表面NCL交联,实现特异性的肿瘤细胞凋亡研究。该策略避免了对正常细胞的损伤、操作简便、通用性强,为探究细胞凋亡机制提供了有力的基础,为新药研发提供了依据,有望成为有前景的肿瘤治疗新手段。