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目的 探讨在对慢性心力衰竭伴抑郁患者治疗中，应用氟西汀的效果，并分析该方案对患者负面情绪、睡眠质量的影响。方法 将Ipatasertib半抑制浓度2021年4月～2023年1月在我院确诊为慢性心力衰竭伴抑郁的80例老年患者纳入研究，按照序贯平衡法分为2组，40例纳入对照组实施常规心理干预及抗心衰治疗，40例纳入观察组在对照组基础上实施氟西汀治疗。统计治疗后临床疗效，并就治疗前后患者负面情绪、睡眠状态、心功能进行比较。结果 观察组40例患者经氟Compound C西汀治疗后，记录的临床疗效为97.50%，较对照组高（P<0.05）；观察组记录的汉密尔顿焦虑量表（HAMA）、汉密尔顿抑郁量表（HAMD）评分低于对照组（P<0.05）；观察组记录的匹兹堡睡眠指数（PSQI）评分低于对照组（P<0.05）；观察组记录的6WMD、CO、LVEF高prostatic biopsy puncture于对照组（P<0.05）。结论 在慢性心力衰竭伴抑郁症患者的治疗过程中，选择氟西汀既可改善患者负面情绪，亦可改善其睡眠质量及心功能。

目的:椭圆食粉螨(Aleuroglyphus ovatus)是世界性分布的储藏物害螨之一,长期使用化学杀螨剂易使害螨产生耐药性、伤害非靶标生物,对环境造成污染,本研究期望寻求新的植物源杀螨剂丹皮酚来应对这些问题,并初步探究丹皮酚的杀螨机制,为创新绿色、安全、高效除螨剂奠定理论和技术基础。方法:采用触杀法、熏蒸法和驱避生物测定法研究丹皮酚对椭圆食粉螨的抑杀作用,并通过形态学观察丹皮酚作用前后螨表皮颜色的变化和毒性症状,测定丹皮酚作用后,椭圆食粉螨螨体内超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione-S-transferase,GSTs)、乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,ACh E)、一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,NOS)几种重要酶系活力变化,进一步通过RNA-seq转录组学和TMT蛋白质组学联合分析,揭示丹皮酚对椭圆食粉螨的抑杀机理。结果:(1)触杀法和熏蒸法测定丹皮酚抑杀椭圆食粉螨的LC_(50)值分别为9Pexidartinib生产商.832μg/cm~2和14.827μg/cm~3,触杀法的杀螨活性要优于熏蒸法。在驱避实验中,当浓度为10 mg/ml时,所产生的驱避效果最好;当丹皮酚浓度低于2 mg/ml时,对椭圆食粉螨几乎无驱避作用,且丹皮酚处理24h后的驱避率最高。在一定范围内随着处理时间和浓度的增加,丹皮酚对椭圆食粉螨的驱避作用随时间和剂量的增加而增强。(2)毒性症状观察显示,在12 mg/ml丹皮酚处理下,5 min和10 min后分别有20%和42%的螨表现为KD(Knock down)型,而无螨虫表现为IM(Immobilizer)型;而在90 min时,90%的螨表现为KD型,7%的螨表现为IM型。丹皮酚处理anti-hepatitis B后的椭圆食粉螨表现出典型的神经毒性症状,包括兴奋、惊厥和瘫痪。在体式显微镜和扫描电镜观察下,丹皮酚处理后的椭圆食粉螨表皮变为棕褐色且发生皱缩。(3)丹皮酚作用后螨体内酶活力发生改变,螨体内保护酶SOD较对照组(丙酮组)低,而CAT较对照组(丙酮组)高。表明在丹皮酚处理后,CAT活性被激活,而SOD酶活性被抑制。丹皮酚处理后螨体内解毒酶GSTs活性较对照组(丙酮组)高,表明GSTs酶活性被激活。丹皮酚处理后螨体内神经效应酶ACh E活性较对照组(丙酮组)低,而NOS较对照组(丙酮组)高。表明ACh E酶活性被抑制,而NOS酶活性被激活。(4)转录组和蛋白质组联合分析表明,丹皮酚对椭圆食粉螨作用后有49个基因在转录组和蛋白组水平上表现出一致的变selleckchem GSK2118436化,其中23个下调,26个上调。这些基因编码的蛋白主要与水解酶、丝氨酸型肽酶、抗氧化酶和氧化还原酶有关,以黄素单加氧酶(Flavin Monooxygenase,FMO)、酰基辅酶A脱氢酶家族成员8(Acyl-Co A dehydrogenase family member 8,ACAD8)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GPX)、组织蛋白酶L(Cathepsin L,CTSL)和丝氨酸蛋白酶1(Recombinant Protease,Serine 1,PRSS1)为主。其中水解酶活性相关基因CTSL上调,丝氨酸型肽酶活性相关基因PRSS1上调,抗氧化酶活性相关基因GPX在下调,氧化还原酶活性相关基因ACAD8和FMO下调。结论:丹皮酚具有较好的抑杀椭圆食粉螨活性,触杀法的抑杀活性要优于熏蒸法。丹皮酚对椭圆食粉螨的驱避作用随时间和剂量的增加而增强。丹皮酚通过对椭圆食粉螨体内保护酶、解毒酶、神经效应酶的动态平衡造成破坏,影响其正常的生理代谢,从而对螨体产生毒害作用。转录组和蛋白组联合分析也表明,丹皮酚通过影响螨体内水解酶、丝氨酸型肽酶、抗氧化酶和氧化还原酶活性,进而导致螨体死亡。丹皮酚可以作为防制储藏物螨椭圆食粉螨的杀螨剂。

【研究背景】禾本科作物的穗下节是直接支撑穗部的节间,对株高、穗伸出以及冠层结构均有影响。目前禾本科作物穗下节间伸长机制的认识主要来源于对水稻突变体的研究,麦类作物中相关基因及作用机制研究相对滞后。克隆microRNA biogenesis大麦短穗下节相关基因、解析其作用机制,有助于精准改良大麦株型。【材料与方法】本研究使用大麦地方品种”哈铁系”(HTX)和由它衍生的两个短穗下节突变体M4950和M4081为材料,通过遗传分析和基因组测序等方法克隆了控制大麦穗下节长度的基因,通过亚细胞定位、时空表达谱等方法鉴定该基因的表达模式,通过硅含量测定判断该基因的作用机制。【结果与分析】短穗下节突变体M4950与M4081杂交F1植株表现为短穗下节,F2群体短穗下节和长穗下节的分离比接近于1;而M4950和M4081与野生型HTX正反交F1植株都表现为长穗下节,F2群RP56976 NMR体短穗下节和长穗下节的分离比接近于1:3,说明M4950和M4081的短穗下节表型是由互为等位的一个隐性基因控制。IDN-6556利用HTX与M4950组合的F2遗传群体分离单株混池测序(BSA)、以及M4950和M4081的全基因组重测序比较,克隆了该突变基因,命名为ss2。通过TILLING技术筛选HTX突变体库又得到了另外8个等位突变体,且皆表现出短穗下节表型变异,证实了ss2即为目标基因。烟草瞬时表达系统鉴定到野生型与突变型SS2蛋白均定位于细胞质膜上。时空表达谱分析发现,野生型SS2基因在抽穗期穗下第四节间和第五节间表达量最高。GA喷施试验表明HTX和M4950对外源赤霉素处理均表现出敏感性,且喷施后HTX和M4950的株高和穗下节长度无显著差异,推测该基因可能通过参与赤霉素的合成或代谢通路影响穗下节长度。【结论】本研究克隆了控制大麦穗下节长度的基因ss2,并推测其可能参与赤霉素相关通路。本研究可对大麦株型改良提供理论依据与基因资源。

β-1,4-内切葡聚糖酶(EC3.2.1.4)能随机切割β-1,4糖苷键,在洗涤、纺织、造纸、能源等行业有重要应用价值。在洗涤行bio-based polymer业,β-1,4-内切葡聚糖酶具有改善棉纤维的柔软性,提高洗涤效率等作用。目前,本土化的洗涤酶制剂尚未得到有效的开发,获得一种新型洗涤酶制剂对于国内洗涤酶制剂的发https://www.selleck.cn/products/BafilomycinA1.html展具有重要意义。论文通过基因挖掘和生物信息学筛选获得具有低温特性的β-1,4内切葡聚糖酶,并在大肠杆菌中实现了异源表达;在此基础上,通过序列比对和蛋白质p K_a值计算等理性设计策略进行分子改造,成功提高了β-1,4-内切葡聚糖酶的耐碱性和催化效率,最后初步解析了内切葡聚糖酶耐碱性提高的分子机制。论文主要研究结论如下:(1)通过基因挖掘和生物信息学方法从数据库中筛选出三株β-1,4-内切葡聚糖酶基因,通过载体p ET-22b(+)在E.coli BL21(DE3)中实现了高效表达;分析了其催化活性和酶学性质,其中Eg DC酶在20℃保持75%以上的相对酶活,具有潜在的洗涤行业应用价值。(2)通过氨基酸序列比对和计算氨基酸残基p K_a值两种策略确定了28个耐碱性的相关潜在位点。定点突变构建了36个单突变体,表征并比较了野生酶与突变体的比酶活和酶学性质,筛选获得V73K、N122R、P131K、A168K和A208K五个耐碱性提高的单突变体。其中单突变体V73K的耐碱性提高且催化性能(k_(cat)/K_m值)提高了57.1%,单突变体P131K的比酶活上升最明显,相比野生酶提高了21.8%。(3)获得具有良好洗涤应用价值的β-1,4-内切葡聚糖酶双突变体V73K/A168K。通过组合突变构建了5个组合突变体V73K/N122R、V73K/P131K、V73K/A168K、V73K/A208K和V73K/N122R/A168K,其中V73K/A168K突变体的最适p H值提高至p H7.5,在p H8.0和p H9.0条件下处理1h后剩余77.1%和48.5%的相对酶活。同时,该突变体k_(cat)/K_m值达到1229.71 s~(-1)·mg~(-1),催化性能和野生酶相比提高了136.34%。(4)VX-661 IC50关键酸/碱催化残基分别为GLU~(155)和GLU~(259)等的p K_a值较大程度上影响着酶的最适反应p H值,这种作用主要为关键氨基酸的电离状态会与其他带电残基产生静电作用,从而改变蛋白质内部电荷状态。进一步的内部电荷作用力分析和表面电势比较也发现,引入的碱性氨基酸有助于β-1,4-内切葡聚糖酶在碱性环境下稳定性的提高。

背景:肝癌仍然是全球性的健康挑战,我国每年的肝癌新增病例高达46万,晚期肝癌的中位数生存时间仅6个月。靶向嘧啶代谢相关的酶是减缓肝癌进展的策略之一。研究表明,d CTP焦磷酸酶1(d CTP pyrophosphatase 1,CL 318952DCTPP1)参与多种恶性肿瘤的进展,但其在肝癌中的作用机制及治疗意义尚不清楚。目的:探索DCTPP1在肝癌中的临床意义及其在肝癌增殖中的作用和机制,为寻找肝癌潜在的治疗靶点提供新思路。方法:免疫组织化学和蛋白质印迹法检测DCTPP1在肝癌组织芯片、术后组织样本中的表达,结合Kaplan-Meier plotter数据库分析DCTPP1对肝癌患者预后的影响;RNA干扰技术构建DCTPP1沉默的肝癌细胞,通过CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验和流式细胞术、裸鼠成瘤实验检测DCTPP1对肝癌细胞增殖、药物反应性的影响;蛋白质印迹法检测DCTPP1对核苷酸代谢相关酶(PPAT,ADSL,ADA,PDE4D,CTPS1,TYMS,TK1,NME1)及β-catenin/MYC的调节作用;GEO数据集分析DCTPP1与MYC的相关性,并在组织层面进行验证;在线数据库PROMO、CHEA、h TFtarselleck Imidazole ketone erastinget、Cistrome DB和JASPAR预测DCTPP1的转录因子,并通过染色质免疫共沉淀验证;RNA干扰技术构建MYC沉默肝癌细胞株,RT-q PCR技术检测MYC对嘧啶代谢相关酶(DCTPP1,CTPS1,TYMS,TK1,NME1)的调节,细胞免疫荧光实验检测MYC对DCTPP1的调节作用;高效液相色谱联合质谱技术探究DCTPP1沉默Hep G2细胞的能量代谢轮廓。结果:肝癌组织中的DCTPP1表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),高表达DCTPP1的肝癌患者总体生存期更短,风险比为1.51(P<0.05);体内、外实验表明DCTPP1沉默的肝癌细胞增殖能力、克隆形成能力和迁移能力减弱,细胞周期发生G2/M阻滞,同时对核苷酸类似物卡培他滨、阿糖胞苷、吉西他滨和巯嘌呤的药物敏感性增加;DCTPP1沉默的肝癌细胞中嘌呤代谢相关酶(PPAT,ADSL,ADA,PDE4D)未见显著差异,嘧啶代谢相关酶(CTPS1,TYMS,TK1,NME1)发生明显下调,差异具有统计学意义(P<0.05);DCTPP1沉默的肝癌细胞中均检测到β-catenin和MYC下调;GSE14520数据集488例样本中DCTPP1和MYC的m RNA表达水平呈正相关,相关系数为0.376(P<0.001);数据库PROMO、CHEA和h TFtarget预测DCTPP1的转录因子可能为激活转录因子3、MYC相关锌指蛋白、TATA结合蛋白和MYC,Cistrome DB、JASPAR数据库预测和染色质免疫共沉淀实验表明MYC通过结合“AAACACGTGGCC”序列启动DCTPP1转录;MYC沉默引起嘧啶代谢相关酶(DCTPP1,CTPS1,TYMS,TK1,NME1)表达水平下调;DCTPP1沉默的Hep G2细胞内能量代谢物质重新排布,主要表现为精氨基琥珀酸、精氨酸bone biomechanics下调和苹果酸、赖氨酸、富马酸、α-酮戊二酸、顺式乌头酸等代谢物的积累。结论:DCTPP1在肝癌组织中高表达,且高表达DCTPP1的肝癌患者总体生存期更短;DCTPP1沉默抑制肝癌增殖和迁移,增强肝癌细胞对核苷酸类似物的药物敏感性;DCTPP1通过Wnt/β-catenin通路调节MYC的表达,同时MYC结合AAACACGTGGCC序列调控DCTPP1的转录,DCTPP1/MYC正反馈环路共同调节肝癌细胞内嘧啶代谢相关酶(CTPS1,TYMS,TK1,NME1);DCTPP1沉默的Hep G2细胞发生能量代谢重新排布。DCTPP1是抗肿瘤药物研发的潜在靶点。

Patrinia scabiosaefolia随着程序性死亡受体1(PD-1)、程序性死亡配体1(PD-L1)以及细胞毒性T淋巴BMS-907351 NMR细胞抗原4(CTLA-4)等免疫检查点的发现，免疫检查点抑制剂（ICI）逐渐成为肿瘤治疗领域中最有前景的方法之一，已被证实可以提高晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的生存率。与化疗相比，对于肿瘤细胞表面PD-L1高表达的晚期NSCLC患者，抗PD-1/PD-L1治疗后生存期显著延长且不良反应较少。抗CTLA-4药物单药治疗效果有限，通常与PD-1/PD-L1药物联合可进一步提高抗肿瘤效果。另外一些新型免疫检查点抑制剂，如依吉利单抗、替拉戈鲁单抗等在临床试验中也表现出一定的抗肿瘤作用，未来在晚期NSCLC患者的治疗中或许能提供帮助。对ICI在NSCLC治疗中的临床应用进行总结，同时对未来免疫治疗的发展和预测性生物标志物进行展望，可以为晚期NSCLC患者的selleck治疗提供新的靶点和思路。

目的 探讨不同认知障碍程度和疗效的青少年抑郁症患者miR-381-3p、miR-124检测的临床意义。方法 选取2020年1月至2022年4月绍兴市第七人民医院收治的86例青少年抑郁症患者为研究对象，其中存在认知障碍31例，包括轻度14例、中度12例和重度5例；无认知障碍55例。所有患者接受心理干预、认知疗法、重复经颅磁刺激疗法联合草酸艾司西酞普兰、奥氮平口服治疗3个月，治疗前采用简易精神状态检查量表评估认知障碍程度，并检测miR-381-3p、miR-124相寻找更多对表达量；治疗3个月后采用汉密尔顿焦虑量表和汉密尔顿抑郁量表评估疗效。比较认知障碍组与无认知障碍组、不同程度认知障碍以及不同疗效患者miR-381-3p、miR-124相对表达量，采用ROC曲线分析miR-381-3p、miR-124单独或联合检测对临床疗效的预测效能。结果 认知障碍组患者miR-381-MK-4827 MW3p相对表达量明显低于无认知障碍组（P<0.05）,miR-124相对表达量则明显高于无认知障碍组（P<0.05）。不同程度认知障碍患者miR-381-3p、miR-124相对表达量比较，差异均有统计学意义（均P<0.05），其中miR-381-3p相对表达量为轻度>中度>重度（均P<0.05）,miR-124相对表达量为重度>中度>轻度（均P<0.05）。治疗3个月后疗效良好66例，疗效不佳20例。疗效不佳组miR-381-3peer-mediated instructionp相对表达量明显低于疗效良好组（P<0.05）,miR-124相对表达量则明显高于疗效良好组（P<0.05）。miR-381-3p、miR-124单独预测患者临床疗效的AUC分别为0.719、0.695，两者联合预测的AUC为0.782，两者联合检测的效能明显高于单独检测（均P<0.05）。结论 miR-381-3p与miR-124联合检测有助于青少年抑郁症患者认知障碍严重程度的评估和临床疗效预测。

目的 探讨缺氧微环境下肝细胞癌（简称肝癌）细胞释放的外泌体对巨噬细胞极化的影响及其机制。方法 通过免疫荧光染色、透射电镜、Western blotting明确缺氧对肝癌细胞外泌体释放的影响；通过流式细胞术、免疫荧光染色和实时定量PCR检测缺氧肝癌细胞来源外泌体对M2型巨噬细胞极化、免疫微环境的影响；通过免疫组织化学VEGFR抑制剂染色、免疫荧光染色、荧光素酶报告基因、Western blotting检测缺氧肝癌细胞来源外泌体miR-432-5p促进M2型巨噬细胞极化的机制。结果 缺氧可促进肝癌细胞分泌外泌体，促进M2型巨噬细胞极化，其发挥作用的机制是外泌体中的miR-432-5p靶向SOCS3，调控SOCS3/STAT3信号通路实现的。结论 缺氧肝癌细胞来源外泌体mi寻找更多R-432-5p介导的M2型巨噬细胞极化invasive fungal infection是通过SOCS3/STAT3信号通路实现的，这一信号通路为肝癌的靶向治疗提供了新方向。

黄土高原主要以碱性石灰性土壤为主,通常呈碱性,有效铁含量低,因此显著抑制植物根系生长发育。豆科植物-根瘤菌共生系统可根据氮的有效性调整其养分获取策略,从而改善土壤环境(即养分和微生物),极大地促进植物对土壤养分的摄取能力最终促进其生长。硫化氢(Hydrogen,H_2S)作为一种此网站信号分子,参与豆科植物与根瘤菌共生关系的建立,而根瘤菌内源H_2S如何调控宿主植物根系性状尚不清楚?我们结合土壤酶谱学技术,对整个根土界面进行酶活性空间分布可视化。通过微湿针法对根系周围的热点和非热点进行定位和比较,以获得酶动力学参数,同时利用高通量测序分析根际微生物群落结构。最后将土壤酶谱与土壤微生物群落的鉴定和根系分泌物的非靶向代谢分析相结合,共同探讨根瘤菌内源H_2S对大豆根系性状的影响及响应铁缺乏的微生物学机制。主要的研究结果如下:(1)接种野生型根瘤菌Q8后,显著促进了大豆的生长。主要表现在株高、地上部生物量、根重、根瘤数量明显升高。与Control相比,在铁缺乏条件下接种Q8后,总根长、根体积、根表面积分别增加了33.1%,23.4%和34.1%。除此之外,接种Q8后,大豆根和茎中的氮浓度显著大于Δ3MST处理。在添加铁后,大豆根、茎、叶中的铁浓度显著升高,并且叶绿素含量和光合作用指标(净光合速率、胞间CO_2浓度、蒸腾速率、气孔导度)都有增加的趋势。(2)酶活性的空间分布表明:碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)和β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BG)的活性空间分布与根系密切相关;亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopepBiofeedback technologytidase,LAP)和木聚糖酶(Xylanase,XYN)的活性空间分布更加分散,在根区也广有分布。在加铁条件下,Q8处理ALP热点面积占酶谱图的1.73%,高于Control和Δ3MST处理。在铁缺乏条件下,接种Q8使XYN热点面积从2.56%增加到3.91%。(3)铁缺乏条件下,接种Q8显著提高了根际土壤Shannon指数,增加了细菌α-多样性且改变了微生物群落结构;根际细菌共现网络显示:Δ3MST的边和节点数以及正相关都显著高于Control和Q8,说明Δ3MST处理的根际土壤共生关系更强,这可能是根际富集根瘤菌导致的。(4)在铁缺乏条件下,香豆素物质显著富集,这可能影响根际微生物群落的组装,从而有助于促生菌与植物的互惠作用。与Control相比,接种Q8影响了铁缺乏下谷胱甘肽代谢、氨基糖和核苷酸糖代谢,这可能为H_2S的合成提供底物和能量。综上所述,根瘤菌内源H_2S通过介导大豆宿主共生固氮过程,从而影响了大豆根系性状、根际微生物群落组成、根系分R428半抑制浓度泌物组成以及C、N、P循环酶空间分布和活性变化。而铁添加增强了根系对Fe~(2+)吸收能力以及提高了大豆光合作用及其根系性状,最终两者共同促进了大豆的生长发育。

动物源性食品中四环素类药物与氨基糖苷类药物的残留会对人类健康带来潜在危害。本论文旨在制备出四环素类与氨基糖苷类药物的受体,以其为识别元件,建立新型的检测方法,对这两类兽药在动物源性食品中的残留进行检测。首先,本研究合成了一种四环素的光亲和标记-活性导向蛋白谱探针,从耐四环素的大肠杆菌中捕获到了一种天然TetR蛋白。分子对接结果表明,该蛋白与10种四环素类药物(TCs)的结合能在7.58-8.56 kcal/mol之间,它们之间主要通过疏水作用力连接,药物分子主要结合位点在四环素母环上。表面等离子共振实验(SPR)表明,该蛋白与10种TCs的绝对亲和系数在17.672-25.110之间。以该天然TetR蛋白为识别元件建立了一种直接竞争化学发光法,用于检测牛奶中的10种TCs。结果显示,该方法对10种TCs的IC50值为0.084-0.32 ng/mL,检测限为0.002-0.009 ng/mL,在空白牛奶样品中的添加回收率为68.4%-91.3%。然后,研究者对上述天然TetR蛋白进行了定点突变,将139位组氨酸突变为色氨酸。分子对接结果购买VP-16表明,TetR单点突变体与10种TCs的结合能在7.13-9.26 kcal/mol之间,它们之间主要通过疏水作用力与Pi-Pi键连接,药物分子主要结合位点在四环素母环上。SPR结果表明,TetR单点突变体与10种TCs的绝对亲和力在23.941-33.327之间。以该TetR单点突变体为识别元件建立了一种荧光偏振法,用于检测牛奶中的10种TCs。结果显示,10种TCs的IC50值为15.5-55.2 ng/mL,检测限为0.4-1.5 ng/mL,在空白牛奶样品中的添加回收率为71.5%-95.4%。当上述天然TetR蛋白的135位丝氨酸突变为苯丙氨酸,142位亮氨酸突变为赖氨酸时,受体的稳定性有明显提升。分子对接结果表明,TetR双点突变体与10种TCs的结合能在8.03-9.64 kcal/mol之间,它们之间主要通过疏水作用力与氢键连接,药物分子主要结合位点在四环素母环上。以TetR双点突变体为识别元件建立了一种半均相竞争荧光法,用于检测牛奶中10种TCs。结果显示,对10种TCs的IC50值为9.3-21.1 ng/mL,检测限为0.32-0.94 ng/mL,在空白牛奶样品中的添加回收率为74.9%-92.64%。另外,本研究表达了赖氨酸芽孢杆菌的核糖体S12蛋白(RPSL12)。分子对接结果表明,RPSL12与10种氨基糖苷类药物(AGs)的结合能在5.15-5.84 kcal/mol之间,它们之间主要通过疏水作用力连接。SPR结果表明,RPSL12与10种AGs的绝对亲和力在11.aviation medicine358-26.102之间。以该RPSL12为识别元件建立了一种荧光偏振法,用于检测猪肉样品的10种AGs。结果显示,对10种AGs的IC50值为47.6-72.2 ng/g,检测限为2.1-12.1 ng/g,在空白的猪肉样品中的添加回收率为74.5-97.6%。然后,研究者将大肠杆菌的RPSL12基因与海肾荧光素酶的基因连接,表达出了一种RPSL12-Rluc融合蛋白。分子对接结果表明,该RPSL12与7种AGs的结合能在5.44-6.32 kcal/moL之间,它们之间主要通过疏水作用力连接。SPR结果表明,RPSL12-Rluc与10种AGs的绝对亲和力在12.502-25.235之间。以该RPSL1 2-Rluc融合蛋白为识别元件,建立了一种间接竞争生物发光法,用于检测猪肉样品中7种AGs。结果显示,对7种AGs的IC50值为43.6-75.5 ng/g,检测限为0.51-1.1 ng/g,在空白的猪肉样品中的添加回收率为73.8%-96.2%。最后,研究者将大肠杆菌的RPSL12基因与大肠杆菌的TetR基因连接,表达了 RPSL12-TetR融合受体。以其为识别元件,建立了一种二重化学发光法和一种二重荧光法,用于检测猪肉样品中10种TCs和10种AGs。结果显示,二重化学发光法对 10 种 TCs 的 IC50 值为 0.0287-0.0427 ng/g,检测限为 0.0016-0.0064 ng/g,在空白猪肉样品中的添加回收率为71%-92%;对10种AGs的IC50值为3.8-17 ng/g,检测限为0.21-1.8 ng/g,在空白猪肉样品中的添加回收率为70.3%-92%。二重荧光法对10种TCs的IC50值为35.7-54.7ng/g,检测限为2.7-6.4 ng/g,在空白猪肉样品中的添加回收率为68.7%-91%;对10种AGs的IC50值为26-106.3 ng/g,检测限为1.4-10.2 ng/g,在空白猪肉样品中的添加回收率为71.3%-90%。综上所述,本论文以受体为识别元件建立了 7种针对BMN 673小鼠AGs与TCs的检测方法。结果表明,这些方法可以对AGs和TCs进行多残留快速检测,对保障动物源性食品安全、维护消费者身体健康具有重要意义。