Author: admin

目的 分析慢性自发性荨麻疹(chronic spontaneous urticaria, CSU)患者血清中25-羟维生素D[25-hydroxyvitamin D,25-(OH)D]、调节性T细胞(regulatory T cells, Treg)、总免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)水平的相关性。方法 选择作者医院2020-01/2021-10月收治的84例CSU患者作为观察组，另选取84例同期健康体检者作为对照组，按照CSU病情分级将观察组患者分为轻度组(n=34),中度组(n=27),重度组(n=23)。分DS-3201别检测并比较观察组与对照组研究对象的血清25-(OH)D、Treg比例以及总IgE水平。分析不同CSU病情分级患者的血清25-(OH)D、Treg比例以及总IgE水平的差异。采用Pearson相关性分析明确CSU患者血清25-(OH)Multi-readout immunoassayD、Treg比例及总IgE水平的关系。结果 观察组血清25-(OH)D、Treg比例均低于对照组，而总IgE水平高于对照组(P均<0.05)。重度组患者的血清25-(OH)D、Treg比例均低于轻度组、中度组(P均<0.05),且中度组患者的Lapatinib小鼠血清25-(OH)D、Treg比例均低于轻度组(P<0.05);重度组患者血清总IgE水平均高于轻度组、中度组(P均<0.05),中度组总IgE水平高于轻度组(P<0.05)。Pearson相关性分析发现，CSU患者血清25-(OH)D与Treg比例呈正相关(P<0.05),血清25-(OH)D、Treg比例均与总IgE水平呈负相关关系(P均<0.05)。结论 CSU患者血清25-(OH)D水平存在明显的降低，且和Treg失衡以及总IgE所介导的Ⅰ型变态反应有关。

目的 探讨小切口摘除术联合术后小牛血去蛋白提取物(DCBE)眼用凝胶治疗老年性硬核性白内障的medical informatics效果。方法 采取前瞻性研究选取老年性硬核性白内障患者94例(108眼),随机数字表法分为观察组和对照组，每组47例。对照组采取小切口摘除术，观察组患者在对照组基础上联合DCBE眼用凝胶治疗，2组均治疗1周。随访3个月，比较2组患者视力、散光程度、术后疗效、泪液分泌、泪膜破裂时间、角膜荧光染色评分、血清β2微球蛋白(β2-MG)selleckchem LY2157299、炎症因子水平以及并发症等差异。结LGK-974 NMR果 观察组患者术后4、8、12周的视力量表评分高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。术前以及术后1、4、8、12周患者的散光情况比较，差异无统计学意义(P>0.05)。2组治疗效果评分均升高，且观察组术后1、4周的治疗效果评分低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。观察组术后1、4周泪液分泌长度大于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者术后1、4周的泪膜破裂时间长于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平以及β2-MG水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。2组患者角膜水肿、一过性高眼压、瞳孔变形以及房水浑浊比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 老年性硬核性白内障患者采取小切口摘除术联合术后DCBE眼用凝胶治疗安全、有效，可显著下调血清β2-MG、炎症因子水平。

目的 探索残余胆固醇(RC)是否可成为老年冠脉综合征(ACS)患者的危险分层及预后评估指标。方法 本研究为回顾性队列研究。连续入组2020年3月至2021年3月于中国人民解放军总医院心血管内科住院的老年ACS患者，通过电子病历系统收集患者的基线临床资料、实验室检查等资料并计算RC水平，通过冠状动脉造影进行基线及残余Syntax评分分析。对所有患者进行随访，随访终点为发生主要不良心血管事liquid optical biopsy件(MACEs)。采用多因素logistic回归模型分析发生MACEs的危险因素，采用受试者工作特征(ROC)曲线评估不同危险因素对ACS患者预后的预测价值selleck NMR，并采用Spearman相关性检验评估RC与冠状动脉病变严重程度的相关性。采用R软件进行数据分析。根据数据类型，组间比较分别采用t检验、Kruskal-Wallis H检验及χ~2检验。结果 本研究最终入选老年ACS患者740例，其中1年随访期内发生MACEs患者84例(11.35%)。多因素logistic回归分析结果显示，通过校正，低密度脂蛋白胆固醇(OR=0.998,95%CI 0.997～1.000;P=0Epigenetics抑制剂.015)与RC(OR=0.135,95%CI 0.069～0.265;P<0.001)为老年ACS患者发生MACEs的独立危险因素。ROC曲线分析结果显示低密度脂蛋白胆固醇及RC对预后评估有良好的预测价值，AUC分别为0.754(95%CI 0.719～0.786)、0.774(95%CI 0.740～0.805),二者联合评估预后的效能优于二者单独预测0.868(95%CI 0.840～0.893;P<0.001)。RC与残余Syntax评分的相关系数R~2为0.46,二者呈正相关(P<0.05)。结论 RC与老年ACS患者的冠状动脉病变狭窄程度正相关，并对患者MACEs的预后评估具有较好的应用价值。

目的：评价医院Ⅰ类切口手术患者围术期selleck Telaglenastat抗菌药物预防用药情况及其合理性，为临床围术期用药提供参考。方法：选取2016年1月—2021年1月赣县区人民医院收治的274例行Ⅰ类切口手术患者作为研究对象，采用Excel软件分析入选患者围术期抗Cometabolic biodegradation菌药物使用相关情况，以及药物选用、用药时机、适应证、用药疗程和联合用药等方面的合理性。结果：274例Ⅰ类切口手术患者中，106例围术期使用抗菌药物，使用率为38.69%；其中使用率较高手术为体表肿物切除术和疝气手术；给药时机合理的为95例（占89.62%），给药疗程合理的为SAHA抑制剂97例（占91.51%），适应证合理的为100例（占94.34%）；给药时机中疝气手术给药时机不合理率为最高（占14.29%），其次为乳腺手术（占12.50%）；给药疗程中不合理率最高的为甲状腺手术（占11.54%），其次为疝气手术（占9.52%）；适应证不合理率最高的为甲状腺手术（占7.69%）；联合用药34例，联合用药率为32.08%，且均为二联用药；抗菌药物种类方面以第1代头孢菌素的使用率为最高（占17.86%），其次为第2代头孢菌素（占45.00%）、第3代头孢菌素（占13.57%），头霉素类的使用率达23.57%。结论：医院Ⅰ类切口手术患者围术期抗菌药物预防使用存在诸多不合理现象（如给药时机、给药疗程和适应证等），药物种类选用也存在一定不合理性，医院行政部门应加强临床对Ⅰ类切口手术抗菌药物使用干预管理，以确保用药的安全性。

目的 比较精神分裂症（schizophrenia, SCZ）和重度抑郁症（major depressive disorder, MDD）患者的海马亚区在发病早期沿纵轴的结构性改变。方法 纳入79例首发未治疗SCZ患者、48例首发未治疗MDD患者及79例健康对照（healthy CP-456773 MWcontrol, HC），进行临床症状评估和头部磁共振成像，采用FreeSurfer软件测量海马及原始亚区体积，合并计算纵轴亚区体积，对上述指标进行组间比较并分析临床-纵轴亚区体积的相关性。结果 与HC相比，SCZ患者海马后部体积缩小（左侧t=-2.69,P=0.01；右侧t=-2.90,P=0.004）,MDD患者纵轴亚区体积无差异。SCZ患者的海马后部体积与阴性症状评分呈负相关（左侧r=-0.29,P=0.01；右侧r=-0.23,P=0.04）。结论 海马后部缩Adavosertib小可能是早期鉴别SCZ和MDD的影像特征，并可能参与了Enterohepatic circulationSCZ发病早期的神经病理生理学机制。

目的 观察白内障超声乳化术源性散光(surgically induced astigmatism, SIA)的影响因素。方法 对2021年12月-2022年3月的69例具有角膜规则散光的白内障患者进行白内障超声乳化手术,术后观测以角膜顶点为中心3 mm、5 mm、7 mm直径范围内的角膜前表面、后表面以及角膜前表面的模拟角膜屈率(Sim K)的SIA,使用矢量分析计算XSIA、YSIA和SIA均值(|SIA|),并对SIA与年龄、眼轴长度(axial length, AL)、前房深度(anterior chamber depth, ACD)、角膜直径(white-to-white, WTW)、中央角膜厚度(central corneal thickness, CCT)使用Pearson相关性分析,使用多元线性回归进行SIA影响因素的分析。结果 69例患者的平均年龄为(63.25±14.74)岁,其中男性28例(40.58%)。分析发现,Sim K的|SIA|与WTW呈负相关(r=-0.265,Tamoxifen细胞培养 P=0.028);3 mm、5 mm、7 mm前表面|SIA|与WTW呈负相关(r=-0.320,P=0.007;r=-0.337,P=0.005;r=-0.287,P=0.017);3 mm、5 mm、7 mm后表面|SIA|与AL呈负相关(r=-0.390, P=0.001; r=-0.352, P=0.003; r=-0.317, P=0.008)。多元回归分析结果显示,WTW与Sim K、3 mm、5 mm、7 mmwww.selleck.cn/products/z-vad-fmk前表面及3 mm后表面的|SIA|呈负相关(B=-0.261,P=0.047;B=-0.387,P=0.016;B=-0.323, P=0.009; B=-0.297, P=0.041; B=-0.085, P=0.049),而与3 mm前表面XSIA、5 mm、7 mm前表面YSIA呈正相关(B=0.347,P=0.040;B=0.318,P=0.034;B=0.403,P=pulmonary medicine0.010);AL与3 mm、5 mm后表面的|SIA|呈负相关(B=-0.023,P=0.021;B=-0.034,P=0.030)。结论在进行白内障超声乳化手术时,应考虑患者的眼部生物参数,如眼轴长度、角膜直径等对SIA的影响。

益生菌通过调节宿主的肠道菌群来发挥其益生作用，而便秘作为一种常见的胃肠道疾病，其患者会出现肠道菌群紊乱的情况。该文依据《保健食品功能检验与评价方法(2022年版)》中关于调节肠道菌群和润肠通便的检测方法，对植物乳杆菌CCFM 8661调节肠道菌inundative biological control群及缓解便秘功效进行评价。首先应用洛哌丁胺构建便秘小鼠模型，分别以低(1.5×10~6 CFU/mL)、中(1.5×10~7 CFU/mL)、高(1.5×10~8SAHA体内 CFU/mL)3个剂量的植物乳杆菌CCFM 8661灌胃小鼠，检测干预前后小鼠粪便中双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌变化情况，并测定便秘相关指标，评价植物乳杆菌CCFM 8661对小鼠肠道菌群的影响及缓解便秘的能力。结果表明，植物乳杆菌CCFM 8661能selleck激酶抑制剂够调节肠道菌群，且在低剂量条件下，具有缓解便秘的效果。缓解便秘效果可能与其影响便秘相关神经递质，提高便秘小鼠粪便中乙酸含量，以及降低由便秘所引起的炎症有关。

目的:分析复方甲硝唑克林霉素乳膏治疗面部寻常型痤疮的临床效果。方法:选择2018年1月—2019年12月在我院就诊的寻常型痤疮患者297例,PI3K/Akt/mTOR抑制剂根据随机数字表分为对照组149例和观察组148例。对照组使用异维A酸软胶囊+甲硝唑软膏,观察组使用异维A酸软胶囊+复方甲硝唑克林霉素乳膏。比较两组患者的治疗效preimplantation genetic diagnosis果、治疗前后的血常规、肝肾功能指标及痤疮皮损疼痛程度、皮损数量。结果:观察组治疗有效率为89.selleck激酶抑制剂86%,高于对照组的81.21%(P<0.05)。治疗后6个月,两组患者的红细胞计数、白细胞计数、血小板计数、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血肌酐、血清尿素比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)。治疗后6个月,观察组的痤疮皮损疼痛评分、粉刺、丘疹、脓疱、皮损数量均低于对照组(P <0.05)。结论:复方甲硝唑克林霉素乳膏应用于中度以下的寻常型痤疮患者治疗中,可改善治疗效果,降低痤疮皮损的严重程度,具有良好的安全性。

禽致病性大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)引起的、严重危害全球家禽养殖业的一类重要细菌性疾病。APEC血清群众多,所有日龄家禽均易感,APEC感染后会严重影响家禽生长性能,导致重大经济IDN-6556损失。APEC感染后,会引起败血症、组织器官炎症,包括:心包炎、肝周炎、气囊炎、关节炎、腹膜炎和脑炎等。APEC还能够通过受污染的禽肉和被家禽粪便污染的农产品传播给人类,导致尿路感染以及新生儿脑膜炎等,拥有人畜共患病的风险,对公共卫生安全造成严重影响。疫苗接种能针对APEC产生一定的保护效力,从而减少养禽业经济损失。目前APEC疫苗主要包括灭活疫苗、减毒活疫苗和亚单位疫苗等,但是由于存在相应的缺陷,导致目前临床未能普遍应用APEC疫苗。本研究是在利用实验室前期构建的一株表达APEC Ⅰ型菌毛的鸡伤寒沙门氏菌活载体疫苗候选株SG01Δ asd(pYA3342-APEC fim)的基础上进行了培养条件的筛选、动物攻毒剂量的筛选以及攻毒保护效力试验,为开发一种针对APEC感染提供较好攻毒保护效力的重组弱毒鸡伤寒沙门氏菌疫苗提供基础。1.重组鸡伤寒沙门氏菌活载体疫苗候选株SG01Δasd(pYA3342-APECfim)培养条件的初步探索。本实验针对实验室前期构建表达APEC Ⅰ型菌毛的活载体疫苗SG01Δ asd(pYA3342-APEC fim)株进行了培养条件的初步探索,针对其培养基种类和培养基pH值进行了筛选,并且对疫苗菌株的体外生长OD600 nm数值与其对应的活菌数建立了线性方程,以便快速评估菌液中的活菌数。试验结果显示,SG01Δ asd(pYA3342-APEC fim)疫苗候选株在pH为7.5左右的SOC培养基中,以180 rpm的转速振荡培养12 h能够获得较多活菌,最终能够达到3.5 × 109CFU/mL左右,以便后续试验的展开。2.禽致病性大肠杆菌APEC QD2(O78)强毒株攻毒剂量的筛选。为筛选APEC QD2(O78)medical herbs强毒株对21日龄雏鸡的合适攻毒剂量以满足后续攻毒保护试验的需要,本章将40只21日龄的SPF雏鸡随机分成了 4组:攻毒组A、攻毒组B、攻毒组C和健康对照组,每组各10只。其中攻毒组A、B和C组鸡群通过后胸气囊注射的方式注射APEC QD2(O78)强毒株,攻毒剂量分别为1 × 109 CFU/只、1× 108 CFU/只和1 × 107 CFU/只;健康对照组以相同的途径接种0.2 mL的无菌PBS溶液。在雏鸡攻毒后连续观察14天,并根据制定的评分标准对鸡群的精神状态和腹泻情况进行每日评分,最终根据发病标准进行判定。根据试验结果显示,攻毒组A发病率能够达到100%,死亡率为60%,攻毒组B和攻毒组C的发病率分别为80%www.selleck.cn/products/BIBW2992和60%,并未出现死亡。对死亡鸡进行剖检后发现,攻毒组A鸡群出现严重的心包炎和肝周炎,内脏表面出现一层黄色纤维素性膜,根据评分标准,心脏、肝脏和气囊的平均评分分别为1.90±1.10、1.40±1.26和0.60±0.84,与健康对照组存在显著性差异(p<0.05)。攻毒组B和攻毒组C临床症状轻微,其中攻毒组C的临床症状评分以及剖检病变评分与健康对照组不存在显著性差异。根据临床发病以及剖检结果显示,21日龄雏鸡合适的攻毒剂量为1 × 109 CFU,为后续的攻毒保护试验奠定基础。3.重组鸡伤寒沙门氏菌SG01Δ asd(pYA3342-APEC fim)株针对APEC QD2(O78)的攻毒保护效力评估。为了探索鸡伤寒沙门氏菌 SG01Δasd(pYA3342-APEC fim)株对 APECQD2(O78)的攻毒保护效果。本研究将40只5日龄SPF雏鸡随机分为4组:免疫组、免疫攻毒组、攻毒对照组和健康对照组,每组各10只鸡。SG01Δ asd(pYA3342-APEC fim)株通过口服途径免疫各组鸡群,每只0.2 mL,免疫剂量为1 × 109 CFU/只,首免两周和四周后以相同途径和剂量进行接种,共免疫三次。免疫后每周对免疫组进行采血,进行血清抗体凝集效价测定,血清抗体凝集效价检测利用实验室研发的S9HH(pBR322-APEC fim)凝集抗原。在免疫后每两周、攻毒后每周对免疫攻毒组、攻毒对照组和健康对照组进行称重。第三次免疫两周后以APEC QD2(O78)强毒株通过后胸气囊注射的方式进行攻毒,攻毒剂量为1 × 109CFU/只,0.2 mL/只,攻毒后连续观察14天,按照评分标准每天对三组鸡进行精神、腹泻评分,连续观察14天后对所有活鸡进行处死剖检并观察评分。根据试验结果显示,免疫后雏鸡平均日增重与健康对照组不存在显著性差异。通过对雏鸡组织器官的观察,结果显示不存在肉眼可见的病变,说明SG01Δ asd(pYA3342-APEC fim)株对雏鸡的生长性能无显著性影响,且不产生明显致病。根据血清抗体凝集效价的测定显示,在免后第一周就检测出血清抗体,并且逐渐升高,在免疫三周后,其中超过半数雏鸡的特异性菌毛凝集抗体滴度能够达到1:32(7/10),并一直维持在较高的水平。在APECQD2(O78)攻毒后,免疫攻毒组和攻毒对照组都出现相关的临床症状和剖检病变,攻毒对照组临床症状和脏器病理变化平均评分明显高于免疫攻毒组与健康对照组鸡群(p<0.05),攻毒对照组的发病率为100%(10/10),而免疫攻毒组的发病率为60%(6/10),发病率出现明显下降,上述结果表明,SG01Δ asd(pYA3342-APEC fim)株具有预防APEC QD2(O78)强毒攻毒感染SPF雏鸡的潜力。

研究背景皮肤鳞状细胞癌(Cutaneous Squamous cell carcinoma,cSCC)是一种来源于鳞状上皮细胞恶性增生的皮肤肿瘤,被认为是第二大最常见的皮肤癌,占皮肤癌总发病率的20%～50%。紫外线的辐射、遗传易感性、免疫抑制以及与化学致癌物的长期暴露是导致cSCC发生的主要因素。cSCC导致的死亡占皮肤癌相关死亡的20%,早期的cSCC容易被患者忽视,若未及时治疗,瘤体会迅速增大,进而导致严重的并发症、累及局部淋巴结,以及发生远处转移,以至于影响患者的生存率。目前,对于cSCC的治疗首选手术切除,但手术切除存在破坏性大、易复发及复发后治疗困难等局限性。研究报道显示,对于晚期cSCC患者,即使是应用“程序性死亡蛋白-1(Programmedcell death 1 protein,PD-1)抗体,治疗有效率也不到50%,且在有效的病例中也仅有1/6的患者达到完全缓解。因此,cSCC已成为危害人类健康和生命安全的常见重大疾病,随着人口老龄化问题的不断加剧形势日趋严峻,且其发病机制迄今仍不明确。因此,深入探索cSCC关键发病机制为今后cSCC的精准治疗提供可靠靶点,同时寻求高效低毒的天然产物用于cSCC的治疗刻不容缓。本课题组通过对6例cSCC患者的肿瘤组织和癌旁组织内进行转录组学测序分析,发现色氨酸2,3-双加氧酶(Rryptophan 2,3-dioxygenase,TDO2)在cSCC患者的肿瘤组织的表达明显高于癌旁组织。TDO2是体内特异性催化色氨酸(Tryptophan,Trp)吲哚核发生开裂形成犬尿氨酸(Kynurenine,Kyn)的酶,主要在肝内表达,在一定的刺激情况下,也可以在其他组织如附睾、胎盘、脑以及妊娠子宫中表达。TDO2可以促进肿瘤的进展且具有泛癌性,在基底细胞癌、食管鳞癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌以及平滑肌肉瘤中均呈高表达,且TDO2表达越高患者预后越差。但迄今为止,TDO2在cSCC中表达情况及可能的生物学意义未见报道。雷公藤甲素是从雷公藤中分离出的一种环氧化二萜内酯化合物,可用于治疗多种肿瘤及免疫系统疾病,被《Cell》等论文列为最有可能开发成为现代药物的天然药用化合物之一。文献报道,雷公藤甲素可以抑制cSCC、肝癌、胰腺癌、胶质瘤等多种肿瘤的进展。其中,雷公藤甲素对cSCC的研究报道局限于雷公藤甲素可影响A431细胞的增殖、凋亡能力,以及影响A431细胞的细胞周期及相关基因的mRNA表达水平,但在蛋白水平上未进行深入研究,且具体调控机制未详细说明。研究目的针对cSCC发病机制不明,治疗上存在多种局限性的现状,本课题拟围绕上述的问题展开以下研究:1)分析TDO2在cSCC中的表达情况和模式,并分析其临床意义;2)分析TDO2促进cSCC进展的效应及具体分子机制;3)探索雷公藤甲素对cSCC的疗效及具体分子机制。拟通过本课题的开展,为进一步探索cSCC的发病机制及为未来在临床上使用高效低毒性的靶向天然产物治疗cSCC的提供可靠的实验依据。研究方法1.TDO2在cSCC中的表达以及临床相关性分析使用转录组测序技术揭示人cSCC组织与癌旁组织间的差异表达基因。通过实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)验证转录组测序所得的差异基因TDO2在cSCC组织中的mRNA表达水平。利用发表于《Cell》杂志的cSCC单细胞转录组公共数据GSE144240进行细胞分群,进一步分析TDO2在不同细胞中的表达情况。通过对cSCC组织进行免疫荧光染色,进一步验证TDO2在cSCC具体细胞类型中的表达情况。同时,我们收集了 45例经组织病理学确认的cSCC临床组织样本及患者的临床信息,对石蜡样本进行免疫组化染色,分析TDO2的表达与临床的相关性。2.TDO2促进cSCC进展的分子机制探索2.1分析TDO2的表达对成纤维细胞的影响对临床肿瘤标thyroid autoimmune disease本进行原代分离获得肿瘤相关成纤维细胞(Tumor-associated fibroblasts,CAFs),通过蛋白免疫印迹(Western blot,WB)实验验证所分离的原代细胞具有CAFs的表型及功能,以用于后续细胞实验。将TDO2抑制剂LM10加入CAFs中,通过CCK8法检测CAFs的细胞增殖能力、划痕实验检测CAFs的迁移能力、克隆形成实验检测CAFs的克隆形成能力。通过慢病毒感染成纤维细胞,构建TDO2过表达成纤维细胞株,通过qRT-PCR及WB实验验证慢病毒感染效率。通过CCK8法检测过表达TDO2的成纤维细胞增殖能力、划痕实验检测过表达TDO2的成纤维细胞的迁移能力、克隆形成实验检测过表达TDO2的成纤维细胞的克隆形成能力。2.2分析TDO2促进cSCC进展的作用及分子机制选用Transwell共培养板对成纤维细胞与cSCC细胞进行共培养,以用于后续实验。通过CCK8法检测cSCC细胞的增殖能力、划痕实验检测cSCC细胞的迁移能力、克隆形成实验检测cSCC细胞的克隆形成能力。通过对cSCC细胞进行转录组测序,探索TDO2促进cSCC进展的主要分子机制;通过WB实验对测序得出的关键分子机制进行验证。通过液相色谱-质谱联用(High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry,HPLC-MS)技术检测 TDO2 代谢产物Kyn的含量,通过CCK8法及EdU法检测Kyn对cSCC细胞增殖的影响,以及芳香烃受体(arylhydrocarbonreceptor,AhR)抑制剂对cSCC细胞增殖的抑制作用。通过WB实验验证Kyn/AhR促进cSCC进展的分子机制。通过测量小鼠的体重及肿瘤体积分析TDO2对SKH-1小鼠cSCC生长的影响,通过免疫组织化学染色分析各组小鼠肿瘤组织中增殖相关指标Ki67及PCNA的表达情况。3.分析雷公藤甲素对cSCC的疗效及分子机制通过CCK8法检测雷公藤甲素、丹参酮IIA及白藜芦醇对cSCC增殖的影响,通过HPLC-MS筛选可降低Kyn含量的中药,并通过WB验证TDO2的表达。通过划痕实验检测雷公藤甲素对cSCC细胞迁移能力的影响,通过克隆形成实验检测雷公藤甲素对cSCC细胞克隆形成能力的影响。通过流式细胞术检测雷公藤甲素对cSCC细胞的细胞周期及细胞凋亡的影响。通过WB实验验证雷公藤甲素影响cSCC细胞凋亡及细胞自噬的具体分子机制。通过小鼠体重变化分析雷公藤甲素治疗cSCC小鼠对其生长有无影响,并使用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosinstaining,HE)检测治疗后小鼠组织器官是否受影响,以分析治疗安全性。研究结果1.TDO2在cSCC中的表达以及临床相关性分析通过转录组测序发现TDO2在cSCC组织中高表达,经qRT-PCR验证6对cSCC组织及癌旁组织中TDO2的表达,再次证实了 TDO2在cSCC组织中高表达,同时利用GEO数据库中的GSE84293公共数据集也得到了一致的结果。利用发表于《Cell》杂志的cSCC的单细胞转录组测序数据(GSE144240)进行分析,发现TDO2在CAFs中高表达;通过免疫荧光染色验证cSCC中TDO2的表达模式,显示TDO2的表达与CAFs表面标记物平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)高度重合,再次确证TDO2表达于cSCC的CAFs中。2.TDO2促进cSCC进展的分子机制探索2.1分析TDO2的表达对成纤维细胞的影响收集临床组织标本,通过原代细胞分离术对cSCC组织中的CAFs、以及癌旁组织中的成纤维细胞进行分离,通过qRT-PCR及WB实验检测分离获得的CAFs与正常的成纤维细胞的表面标志物,结果发现CAFs中α-SMA、成纤维细胞活化蛋白(Fibroblast activating protein,FPA)的表达高于对照组,表明所获得的原代成纤维细胞确为CAFs,可用于后续实验。在CAFs中加入TDO2抑制剂LM10后,通过CCK8法检测发现CAFs的增殖能力降低,通过划痕实验检测发现CAFs的迁移能力降低、通过克隆形成实验检测发现CAFs的克隆形成能力降低。通过qRT-PCR验证发现过表达TDO2的成纤维细胞中TDO2的mRNA表达水平远高于对照组,通过WB实验验证发现过表达TDO2的成纤维细胞中TDO2的蛋白表达水平远高于对照组,提示我们成功构建了过表达TDO2的成纤维细胞株,可用于后续实验。之后,通过CCK8法检测发现过表达TDO2的成纤维细胞的增殖能力增强,通过划痕实验检测发现过表达TDO2的成纤维细胞的迁移能力增强、通过克隆形成实验检测发现过表达TDO2的成纤维细胞的克隆形成能力增强。2.2分析TDO2促进cSCC进展的作用及分子机制通过CCK8法检测发现,与过表达TDO2成纤维细胞共培养后,cSCC细胞的增殖能力增强;与添加LM10的CAFs共培养后,cSCC细胞的增殖能力减弱。通过划痕实验检测发现,与过表达TDO2成纤维细胞共培养后,cSCC细胞的迁移能力增强;与添加LM10的CAFs共培养后,cSCC细胞的迁移能力减弱。通过克隆形成实验检测发现,与过表达TDO2成纤维细胞共培养后,cSCC细胞的克隆形成能力增强;与添加LM10的CAFs共培养后,cSCC细胞的克隆形成能力能力减弱。通过对与过表达TDO2成纤维细胞共培养的cSCC细胞进行转录组测序技术分析发现,PI3K/Akt信号通路在TDO2高表达组显示被激活,通过WB实验验证,结果显示,蛋白激酶B(proteinkinaseB,Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)、p70 核糖体蛋白 S6 激酶(p70 ribosomalprotein S6 kinase,p70S6K)、S6 核糖体蛋白(S6ribosomal protein,S6)的磷酸化表达水平均高于对照组。通过HPLC-MS检测添加LM10后CAFs中Kyn的含量,结果发现,添加抑制剂组Kyn的含量低于对照组;同时,通过HPLC-MS检测过表达TDO2的成纤维细胞中Kyn的含量,结果发现,TDO2过表达组Kyn的含量高于对照组。通过CCK8法及EdU法检测Kyn对cSCC细胞增殖的影响,结果显示Kyn可促进cSCC细胞的增殖。通过WB实验验证发现,与TDO2所激活的信号通路一致,Kyn组也显示激活了 cSCC细胞的PI3K/Akt信号通路,并且该通路的激活可被AhR抑制剂逆转,这提示我们TDO2可能是通过KynPF-07321332 NMR/AhColforsin试剂R轴激活PI3K/Akt信号通路,进而促进cSCC进展。通过测量小鼠的体重及肿瘤体积发现TDO2可促进SKH-1小鼠cSCC的生长,通过免疫组织化学染色检测发现在过表达TDO2的小鼠肿瘤组织中,增殖相关指标Ki67及PCNA的表达明显高于对照组。3.雷公藤甲素对cSCC的疗效及分子机制通过CCK8法检测发现雷公藤甲素、丹参酮IIA及白藜芦醇均可抑制cSCC细胞的增殖,通过HPLC-MS筛选经这三种中药处理后的CAFs发现,雷公藤甲素组显示相对最低的Kyn含量,同时,通过WB实验发现,经雷公藤甲素处理后,CAFs中TDO2的表达下降。通过划痕实验检测发现,雷公藤甲素抑制cSCC细胞的迁移能力。通过克隆形成实验检测发现,雷公藤甲素抑制cSCC细胞的克隆形成能力。通过流式细胞术检测发现,雷公藤甲素可诱导cSCC细胞的细胞周期停滞于G0/G1期,以及促进cSCC细胞的凋亡。通过WB实验分析发现雷公藤甲素促进cSCC细胞凋亡、诱导cSCC细胞自噬是通过抑制PI3K/Akt信号通路实现的。通过测量小鼠的瘤体大小发现雷公藤甲素可有效抑制cSCC荷瘤小鼠的肿瘤生长,且小鼠体重无明显变化,治疗后小鼠的重要组织器官(心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏)病理切片未显示明显异常。研究结论TDO2在cSCC组织中高表达,主要表达于CAFs中,TDO2的表达可影响成纤维细胞及cSCC细胞的增殖、迁移和克隆形成能力。TDO2通过Kyn/AhR轴激活PI3K/Akt信号通路促进cSCC的进展。雷公藤甲素通过降低TDO2的表达及其代谢产物Kyn含量,以及抑制PI3K/Akt信号通路的激活,从而抑制cSCC的进展。