目的:探讨改良型富血小板纤维蛋白(Advanced Platelet-Rich Fibrin,A-PRF)治疗糖尿病足截趾伤口的临床疗效及价值,为糖尿病足截趾伤口的治疗提供合理有效的方案。方法:严格按照纳入标准和排除标准,收集2022年5月至2023年1月期间因患糖尿病足病需要在我院烧伤整形外科进行足趾截肢手术的患者50例。该50例患者按照随机数字表法分为对照组和A-PRF组,每组25例。两组患者入院后完善相应的术前检查和术前准备,排除手术禁忌后进行Ⅰ期手术(趾骨截断术+清创术+负压伤口治疗),5~7天的负压伤口治疗后,待创面新鲜肉芽生长后行Ⅱ期手术,对照组患者清创后直接缝合,A-PRF组患者截趾后腔隙填入A-PRF后再缝合。观察指标包括:1.伤口愈合相关指标:(1)伤口愈合时间;(2)伤口甲级愈合率。2.疼痛相关指标:(1)疼痛评分;(2)镇痛药的使用。3.治疗前后炎性指标。4.创面分泌物细菌培养。5.住院费用。6.不良事件发生情况。7.A-PRF的微观形态。结果:1.两组患者一般临床资料两组患者的性别(P=0.556>0.05)、年龄(P=0.699>0.05)、糖尿病病程(P=0.550>0.05)以及治疗前的白细胞(P=0.600>0.05)、血小板(P=0.260>0.05)、C反应蛋白(P=0.677>0.05)均无统计学差异,两组患者具有可比性。2.伤口愈合相关指标(1)伤口愈合时间A-PRF组(10.48±2.82天)愈合时间短于对照组(15.88±3.70天),两组愈合时间差异具有统计学意义(P=0.000<0.05)。(2)伤口甲级愈合率对照组甲级愈合14例,乙级愈合7例,丙级愈合4例,甲级愈合率为56%。A-PRF组甲级愈合22例,乙级愈合3例,甲级愈合率为88%。两组的愈合等级(P=0.026<0.05)和甲级愈合率(P=0.027<0.05)均存在显著差异,差异具有统计学意义。3.疼痛相关指标(1)疼痛评分分析两组患者Ⅱ期手术术前、术后24 h、术后72 h的VAS评分。两组患者Ⅱ期手术术前的疼痛评分(对照组4.00±1.73,A-PRF组4.28±1.59)无统计学差异(P=0.555>0.05),具有可比性;Ⅱ期手术术后24小时(对照组4.92±2.04,A-PRF组 3.80±1.58)、Ⅱ期手术术后 72 小时(对照组 3.80±1.52,A-PRF 组 2.44±1.50)A-PRF组VAS评分均较对照组低,两组VAS评分存在统计学差异(P=0.035<0.05,P=0.003<0.05)。(2)镇痛药的使用记录并分析两组患者Ⅱ期手术术后7天内使用镇痛药的次数,A-PRF组(4.12±2.24)对镇痛药的需求比对照组(6.36±2.86)更少,两组患者镇痛药使用次数具有统计学差异(P=0.003<0.05)。4.治疗前后炎性指标两组患者入院当天、Ⅱ期手术术前和Ⅱ期手术术后第7天抽血送检。对照组和A-PRF组经治疗后炎性指标均有明显改善(白细胞(109/L):对照组入院时11.13±2.96、Ⅱ期手术术后7.92±1.23,A-PRF组入院时10.65±3.45、Ⅱ期手术术后第7天7.68±1.39;C反应蛋白(mg/L):对照组入院时51.41±54.41、Ⅱ期手术术后第7天9.33±1.51,A-PRF组入院时55.39±56.39、Ⅱ期手术术后第7天7.97±2.11),变化具有统计学差异(P<0.05)。对比Ⅱ期手术术前和术后第7天的炎性指标,组间不具有统计学差异(白细胞P=0.383>0.05,C反应蛋白P=0.172>0.05)。5.创面分泌物细菌培养分别于患者入院当天、Ⅱ期手术术前和Ⅱ期手术术后第7天的采集患者足部创面分泌物送细菌培养。入院当天:对照组患者细菌培养阳性16例,A-PRF组患者细菌培养阳性17例,两组细菌培养阳性率无统购买VX-445计学差异(P=0.556BYL719分子式>0.05)。Ⅱ期手术术前:对照组患者细菌培养阳性4例,A-PRF组患者检出细菌培养阳性6例,两组细菌培养阳性率无统计学差异(P=0.724>0.05),具有可比性。Ⅱ期手术术后第7天:对照组患者细菌培养阳性2例,A-PRF组患者细菌培养阳性0例,两组细菌培养阳性率无统计学差异(P=0.245>0.05)。6.住院费用对比两组患者住院费用,A-PRF组的住院费用(42755.84±3641.21元)比对照组住院费用(47705.40±3417.88元)更低,两组患者住院费用具有统计学差异(P=0.000<0.05)。7.不良事件发生情况对两组患者进行3至6月(从伤口完全愈合后)的随访。对照组:3例患者失随访,2例患者原伤口出现红肿疼痛,予以清创换药、抗感染等保守治疗后好转,2例患者患侧足部出现新的感染破溃,经住院手术治疗后好转。A-PRF组:2例患者失随访,1例患者原伤口出现红肿疼痛,予以清创换药、抗感染等保守治疗后好转。对照组不良事件发生率为18.18%,A-PRF组不良事件发生率为4.35%,两组不良事件发生率不存在统计学差异(P=0.293>0.05)。8.改良型富血小板纤维蛋白形态结构扫描电子显微镜下,A-PRF是一种轻度聚集的纤维蛋白基质,由细小的纤维蛋白结构、松散排列的大网状结构组成,间质中散在分布着正常或变形的白细胞和血小板。结论:本研究表明,A-PRF能加速糖足截趾创面愈合,未增加不Essential medicine良反应的发生,具有一定的生物安全性,同时降低了患者术后的疼痛感,减轻了患者的住院负担。这为现今糖尿病足截趾创面的治疗提供了一种新的思路。
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三联疗法治疗系统性红斑狼疮的临床疗效
目的 观察在为系统性红斑狼疮患者实施治疗的过程中三联疗法的临床效果与安全性。方法 本次试验研究的对象为2017年Entinostat使用方法2月至2018年2月在我院接受系统性红斑狼疮治疗的患者64例,根据患Purification者入院病历尾数单双号的不同将患者分为人数相等的两组,运用常规治疗方法实施治疗的32例患者作为试验组,运用三联疗法治疗的32例患者作为对照组。比较两组的治疗效果。结果 试验组患者治疗有效率明显高于对照组患者(P <0.05);试验组与对照组患者治疗后在疾病活动度评分的比较上差异有统计学意义(P <0.05),两组患者治疗前疾病活动度评分差异无统计学意义(P> 0.05);试验组患者复发率、感染率和消化道不良反应、肝肾功能损害、心血管不良反应发生率明显低于对照组患者(P <0.05)。结论 在为系统性红斑狼疮患者实施治疗的过程中,三联疗法的运用可以提高治疗有效率,改善疾病活动度评分,减少疾病Belumosudil molecular weight复发、感染和消化道不良反应、肝肾功能损害、心血管不良反应的出现。
幽门螺杆菌毒力因子及其诱发胃癌作用机制研究进展
幽门螺杆菌(Hp)属于革兰阴性菌,可以在人胃内存活并定植。Hp能够利用其毒力因子调节宿主炎症反应,破坏胃黏膜,其感染的长期结局包括胃癌和胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等恶性肿瘤,是与胃Regulatory toxicology癌相关的Ⅰ类致癌物。与Hp生存相关的毒力因子主要是脲酶PLX-4720 NMR,在脲酶的帮助下,Hp可以在pH值极低的胃内生存,形成持久感染;与Hp定植相关的毒力因子包括外部炎症蛋白A、H点击此处p外膜蛋白Q、血型抗原结合黏附素,这些毒力因子与宿主胃上皮细胞相互作用,帮助Hp在胃黏膜定植,增加癌前病变及胃癌发生风险;与Hp致病相关的毒力因子包括细胞毒素相关基因A、空泡细胞毒素、外膜囊泡、γ-谷氨酰转肽酶、高温需求蛋白A等,Hp在胃上皮细胞存活、黏附并成功定植后,上述毒力因子进一步诱导炎症反应,促进细胞增殖、侵袭和转移,促使胃部炎症向胃癌转化。深入研究Hp毒力因子诱导胃癌发生的机制,有助于为胃癌的诊断和治疗提供新思路和方法。
臂踝脉搏波传导速度变化对慢性肾脏病的影响
目的:探讨臂踝脉搏波传导速度(baPReady biodegradationWV)变化对估算肾小球滤过率(eGFR)下降、蛋白尿和慢性肾脏病(CKD)的影响。方法:入选2006~2018年开滦研究队列中完成健康体检并行两次baPWV检测的8 182例职工为研究对象,并依据两次体检baPWV的变化分为baPWV持续低组(n=3 139,两次体检时baPWV均<1 400 cm/s)、baPWV降低组(n=567,第一次体检时baPWV≥1 400 cm/s但第二次体检时<1 400 cm/s)、baPWV升高组(n=1 020,第一次体检时baPWV<1 400 cm/s但第二次体检时≥1 400 cm/s)、baPWV持续高组(n=3 456,两次体检时baPWV均≥1 400 cm/s)。采用多因素Logistic回归分析探讨baPWV变化对e GFR下降、蛋白尿和CKD的影响。结果:baPWV持续低组Navitoclax抑制剂、baPWV降低组、baPWV升高组、baPWV持续高组人群eGFR下降的检出率分别为0.88%、1.81%、1.91%、4.33%,蛋白尿的检出率分别为3.69%、5.52%、3.96%、8.66%,CKD的检出率分别为4.27%、6.88%、5.59%、12.04%;组间差异均有统计学意义(P均<0.01)。多因素Logistic回归分析显示,与baPWV持续低组相比,baPWV持续高组eGFR下降、蛋白尿和CKD的OR(95%CI)分别为[1.73(1.01~2.95),P<0.01]、[1.36(0.95~1.93),P>0.05]、[1.42(1.05~1.93),P<0.01]。结论:baPWV增加是e GFR下降和CKD的危险因购买Dibutyryl-cAMP素。
中药治疗病毒性肝炎研究进展
病毒性肝炎是肝硬化、肝癌事件的重要诱因,已经成为了全球重大公共卫生问题。中药治疗病毒性肝炎具有独特的优势,能够抑制病毒复制,增强机体免疫力,有效防止肝脏纤Z-VAD-FMK作用维化与癌变,对肝功能和症状的改善效果显著,临床疗效确切,安全性较高且不易产生抗药性,减轻西药副作用,达到增效减毒的效果,同时降低患者停药后的复发率。中药治疗病毒性肝炎的研究备受关注,在实验研究与临床方面取得重大进展。本文系统梳理了近5年来中药治疗病毒性肝炎的国内外研究进展,现代研究证实中药可通过直接或间接抑制病毒、抗炎、抗纤维化、抗氧化、调节免疫、调节自噬及通过其他信号通路发挥了治疗病毒性肝炎的作用。临床上多以中药intermedia performance复方或联合西药使用以此改善患者乏力、食欲不振等临床症状,改善机体免疫机制,增强抗病毒能力,缩短患者的治疗疗程更多并改善其生活质量。上述研究为病毒性肝炎病的药理研究、临床研究和新药研发提供参考与借鉴。
糖皮质激素联合免疫抑制剂致系统性红斑狼疮患者感染预测模型
目的:分析系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)患者联合使用糖皮质激素与免疫抑制剂发生感染的危险因素并建立风险预测模型。方法:回顾性分析联合使用糖皮质激素与免疫抑制剂的348例SLE住院患者临床资料,其中感染组124例、点击此处非感染组224例,并对2组患者进行倾向性评分匹配,使组间混杂因素均衡。匹配后运用单因素分析和多因素logis获悉更多tic回归模型分析SLE并发感染的危险因素,并建立发生感染的风险预测模型,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线评价预测模型,使用70例SLE患者Anal immunization数据进行模型验证。结果:倾向性评分匹配后,感染组与非感染组分别为123例,糖皮质激素剂量(>7.5 mg)、发热、淋巴细胞计数减少(<1×10~9 L~(-1))和血小板减少(<100×10~9 L~(-1))、低蛋白血症(<30 g·L~(-1))是SLE患者感染的独立危险因素。建立logistic回归模型logit(P)=0.8X_1+2.384X_2+1.131X_3+2.059X_4+0.848X_5-1.127,构建各危险因素的ROC曲线,模型预测概率的曲线下面积约0.872,其在ROC曲线对应的最佳截断值为0.506 4。使用符合纳入标准的70例患者资料进行模型外部验证,结果显示预测模型的准确率为77.1%。结论:该研究建立的SLE患者感染风险预测模型具有较高的准确率,有助于早期识别SLE患者的感染风险,对临床制订综合治疗策略有重要意义。
基于蛋白代谢多组学探讨参麻益智方治疗高血压合并血管性痴呆大鼠作用机制
血管性认知障碍(Vascular cognitive impairment,VCI)和血管性痴呆(Vascualr dementia,VaD)是指由脑血管疾病的危险因素、显性或非显性脑血管疾病引起的从轻度认知损害到痴呆的一组综合征。在我国人口老龄化进程加速的趋势下,VCI的患病率、发病率和死亡率日益升高,成为当今医疗事业关注的重点之一。VaD是指由脑血管病变引起的或与脑血管病变相关的一种慢性获得性退行性智力损害综合征,,临床表现为智能障碍,包括认知能力、记忆力、判断和思维能力、计算能力和社会生活能力的减退,伴随着情感、性格的改变。高血压不仅是我国脑卒中发生的首要原因也是VaD、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)等认知障碍独立的危险因素。蛋白质组学是以蛋白质为研究对象,通过质谱技术对生物样本中的蛋白质进行检测和分析,通过对VaD模型动物的蛋白质表达水平、翻译后的修饰、蛋白与蛋白相互作用等的研究。而代谢组学技术,是指某一生物或细胞在一特定生理时期内的所有低分子量代谢产物的分析,研究疾病导致机体病理生理过程变化,最终引起代谢产物发生相应的改变关键物质。课题组在前期研究基础上应用防治VaD的中药复方——参麻益智方(SMYZG),获国家新药发明专利(ZL201610565191.5),并批准为北京市医疗机构中药制剂(Z20200005000),由人参、天麻、鬼箭羽、川芎组成,有益气化瘀、平肝潜阳之用。主治气虚血瘀、肝阳上扰证,治疗症见健忘、神情呆滞、智能减退等的VaD。前期动物实验和临床研究表明SMYZG具有改善VCI大鼠的药理作用及多种作用机制,同时能较好改善患者的认知行为和神经功能。课题组拟通过蛋白组学和代谢组学技术分析高血压结合内皮损伤致VaD模型动物的蛋白质表达和代谢产物差异,并进行中药复方SMYZG的干预研究,获得VaD在蛋白质水平上有关疾病发生、细胞代谢等过程的整体且全面的认识。通过分析VaD模型和SMYZG干预后的脑组织代谢产物,寻找VaD的生物标记物,通过标准化和精细化的蛋白质组学、代谢组学及联合组学技术来立体阐释中医药整体观。研究目的:建立自发性高血压大鼠(Spotaneously hypertensive rats,SHR)复合内皮损伤致VaD模型,观察SMYZG对VaD模型大鼠学习记忆能力、海马突触可塑性、血清胆碱能和β-淀粉样蛋白含量的影响。应用蛋白质组学和代谢组学技术,寻找SMYZG干预VaD参与的代谢通路和具有相同变化趋势的差异蛋白、差异代谢物,系统描述SMYZG在生物体内的分子调控机制。研究方法:实验一参麻益智方对SHR结合内皮损伤致认知功能障碍模型的学习记忆和突触可塑性的影响实验动物使用SHR,无特定病原体级别(SPF),雄性,13~14周龄。通过微电流刺激SHR双侧颈动脉形成血栓的方法制备VaD模型,随机分成:VaD模型(ModeL)组、盐酸多奈哌齐组(DNPQ)、SMYZG高剂量组(SMYZG-H)、SMYZG低剂量组(SMYZG-L),每组10只,并给予相应的药物等体积灌胃。选用相同遗传背景的正常血压Wistar-Kyoto大鼠(WKY)作为对照,与ModeL予等体积蒸馏水灌胃,连续8周。采用Morris水迷宫、脑组织病理HE染色、尼氏染色、高尔基银染方法观察SMYZG对大鼠学习记忆功能、海马(CA1、CA3区)病理形态和突触可塑性形态的影响。血清标记物检测采用ELISA法检测炎症因子:白介素(Interleukin,IL)-1 β、IL-6、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-α水平;血管活性物质:血管紧张素(Angiotensin,Ang)Ⅱ、内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、降钙素基因相关肽(Calcitonin selleck化学gene related peptide,CGRP)水平;痴呆相关病理产物:β-淀粉样蛋白(Amyloid β-protein,Aβ)含量。采用比色法和化学荧光法检测氧化相关指标,诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nos,iNOS)和活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)水平。采用比色法检测胆碱能相关指标,乙酰胆碱(Acetyl-choline,Ach)、乙酰胆碱酯酶(Acetyl-cholinesterase,AchE)水平。实验二参麻益智方对SHR结合内皮损伤致认知障碍模型的蛋白组学研究采用液质联用iTRAQ/TMT标记定量蛋白质组研究的方法,通过TMTpro 16标试剂标记SMYZG干预模型大鼠基因组表达的全部蛋白质,利用标记报告的离子丰度对蛋白进行精确鉴定和定量。数据分析采用Proteome Discoverer软件的搜索引擎Sequest HT检索Uniport蛋白组数据库,获取蛋白质序列信息。开展SMYZG对血管性认知障碍的蛋白质组学研究,以寻找差异蛋白和药物靶标。实验三参麻益智方对SHR结合内皮损伤致认知障碍模型的代谢组学研究应用TM1000靶向代谢组学技术方法,从代谢物层面分析SMYZG干预模型大鼠脑组织代谢物变化及其作用机制。实验四参麻益智方对SHR结合内皮损伤致认知障碍模型的联合组学研究将蛋白组学与代谢组学数据通过R4.0.1和cytoscape3.8.2进行生物信息学分析、代谢物与蛋白酶对应、代谢-蛋白联合分析KEGG代谢通路富集、共有KEGG分析、网络分析(Network)等。研究结果:1.SMYZG对VaD模型大鼠记忆学习能力的影响与WKY组比较,Modelwww.selleck.cn/products/mcc950-sodium-salt穿台次数显著减少(P<0.05),目标象限寻找时间减少(P<0.05),目标象限总路程减少(P<0.05);与Model比较,SMYZG-L、SMYZG-H组穿台次数显著增加(P<0.05,P<0.05),目标象限寻找时间增加(P<0.05,P<0.05),目标象限总路程显著增加(P<0.05,P<0.05)。2.SMYZG对VaD模型大鼠海马CA1-CA3区域突触可塑性的影响与WKY组比较,Model组大鼠海马CA1-CA3区HE染色可见细胞排列无规则,细胞核变形固缩,染色加深;尼氏染色可见尼氏体粉末状改变,数量减少,细胞水肿和溶解;高尔基银染可见树突长度变短,树突棘密度降低,可见不成熟神经元;和Model组比较,DNPQ、SMYZG-H、SMYZG-L组海马病理形态有不同程度的改善,尤其SMYZG-H组神经细胞突触密度显著增加。3.SMYXG对于VaD模型大鼠血清学标志物的影响与 WKY 组相比,Model 组 IL-1 β、IL-6、INOS、ROS、TNF-α 含量均显著升高(P<0.05,P<0.05),Ang Ⅱ、ET-1、Aβ、AchE含量均显著升高(P<0.05,P<0.05),CGRP、Ach 含量下降(P<0.05);与 Model 组比较,SMYZG-L 组、SMYZG-H 组:IL-1 β、IL-6、iNOS、ROS、TNF-α 含量均降低(P<0.05,P<0.05),AngⅡ、ET-1、Aβ 含量降低(P<0.05,P<0.05),CGRP、Ach、AchE 含量上升(P<0.05)。4.SMYZG对VaD模型大鼠蛋白质组学的影响筛选SMYZG改善VaD的潜在信号通路与生物标志物,其潜在作用靶蛋白为:表皮生长因子受体(Egfr)、关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rock1)、原癌基因Pik3ca、RAS相关病毒(Rras)、Ⅲ型β微管蛋白3(Tubb3)、细胞色素C氧化酶亚型5A(Cox5a)、非转移性细胞1基因(Nme1),具有改善血管内皮功能、保护神经元、改善认知功能。神经退行性疾病、阿尔茨海默病的关键通路为:AMPK/PGC-1 α/UCP2/ATP5A、HIF/VEGF、VEGF/Flk-1/p8 MAPK,具有血管内皮保护、神经元保护功能。5.SMYZG对VaD模型大鼠代谢组学的影响研究发现SMYZG可影响VaD模型大鼠认知功能作用的差异代谢物质谱,结果显示在代谢物层面的显著标志物为:酪氨酸(Tyr),麦角硫因(ET),鲱精胺(AGM),甲基烟酰胺(MNA),维生素B6(VB6)以及“精氨酸和脯氨酸代谢”、“辅助因子的生物合成”、“氨基酸的生物合成”作用通路。SMYZG与DNPQ在治疗VaD的代谢层面主要差异标记物为:胞嘧啶(Cytosine)Genetic circuits,一氧化氮合酶抑制剂(L-NMMA),硫酸吲哚酚(Indoxyl Sulfate)以及“神经活性配体与受体”、“辅助因子的生物合成”。6.SMYZG对VaD模型大鼠的联合组学研究研究发现VaD发病与SMYZG起效的共同信号是通路神经退行性疾病-多疾病通路、缝隙链接(Gap junction)、ErbB 信号通路(ErbB signaling pathway)。研究结论:SMYZG可以改善高血压合并血管内皮损伤所致血管性痴呆大鼠的学习记忆功能;蛋白组学和代谢组学研究显示涉及“Egfr,Rock1,Pik3ca,Rras,Tubb3,Cox5a,Nme1”差异蛋白与“Tyr,ET,AGM,MNA,VB6”差异代谢物是 SMYZG改善血管性痴呆的潜在生物标志物。从整体性、时空性和复杂性的分子角度阐释VaD模型的高血压和内皮损伤特征,为探索中药复方防治VaD相关机制提供了新视角。
合理用药管理对医院抗菌药物使用状况的影响
目的:评价合理用药管理对抗菌药物使用状况的影响DMARDs (biologic),为临床抗菌药物的规范使用提供参考。方法:选取2018年1月—2021年12月曹县人民医院的出院患者作为研究对象,将其中2018年1月—2019年12月实行合理用药管理干预前的出院患者设为干预前组,将2020年1月—2021年12月实行合理用药管理干预后的出院患者设为干预后组;采集2组患者的抗菌药物使用情况(如SCH772984品种、规格、金额、用量等),并就其合理用药情况进行点评,分析合理用药管理对抗菌药物使用状况的影响。结果:干预后组患者使用抗菌药物的构成比为78.00%低于干预前组为89.96%(P<0.05),患者的抗菌药物使用金额构成比低于干预前组(P<0.05);抗菌药物的联用情况显示,2组患者使用1、2和3种抗菌药物的构成比经比较其差异有统计学意义(P<0.05);2组患者的使用金额排名前3位的抗菌药物均为头孢菌素类、青霉素类、喹诺酮类,用药频度(defined daily doses,DDDs)排名前2位的抗菌药物均为头孢菌素类、青霉素类;干预后组患者的头孢菌素类、青霉素类、喹诺酮类药物的使用金额构成比、DDDs值高于干预前组,大环内酯类、氨基糖苷类、其他β-内酰胺类、硝基咪唑类、抗真菌类、其他类的使用金额及其构成比、DDDs值低于干预前组;干预后组患者的不合理用药发生Torin 1抑制剂率低于干预前组(P<0.05)。结论:药剂科合理用药管理可促进抗菌药物的合理使用,取得了较好的效果。
右美托咪定/惰性气体改良UW液对猪DCD边缘供肾和热缺血离体人肺组织的保护作用及机制研究
背景及目的:器官移植是终末期脏器衰竭患者的有效治疗方式。然而,供体器官供不应求的问题日趋突出。尽管肾移植手术量逐年增加,但远远赶不上等候移植人数的增加,只有约25%的等待移植患者在5年内接受了已故捐献者供体的肾移植。对供体质量要求最高的肺移植手术,仅有20%捐献者的肺脏符合肺移植。在活体供体和脑死亡器官捐献(donation after brain death,DBD)供体无法满足临床需求的情况下,拓展使用边缘供体如心脏死亡器官捐献(donation after cardiac death,DCD)供体,能在一定程度上缓解器官移植供体来源不足的状况,有利于扩大供体池。但是DCD供体器官热缺血时间较长,发生移植物原发性无功能(Primary non-function,PNF)和功能延迟(DelayedBaf-A1溶解度 graft function,DGF)的比例较高。因此,提高边缘供体保存质量,改善移植后的移植物功能,并有效应用于临床是解决供体器官缺乏的重要手段之一。由此可见,边缘供体的拓展应用,有利于扩大供体库,从而使更多的器官衰竭患者得到器官移植的机会,具有重要的临床价值。右美托咪定(Dexmedetomidine,Dex)是一种高选择性α_2肾上腺素受体激动剂,具有镇静、镇痛的作用,常用于临床手术麻醉和ICU。Dex通过减少炎症反应,激活抗凋亡信号通路,进而保护细胞免受损伤,其对神经系统、心、肺、肾、肝、小肠等多种器官具有保护作用。惰性气体氙气(Xenon,Xe)和氩气(Argon,Ar)也具有器官保护作用。研究显示,Xe可通过降低Caspase-3表达和抑制肾小管细胞TLR-4/NF-κB的活化,减少促炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α,进而实现肾功能保护,提高移植物的存活率,延长移植物的存活时间。Ar在心脏、脑和肾脏缺血再灌注损伤中具有保护作用。在猪肾移植模型中,Ar刺激抗氧化防御和限制炎症,能减轻肾移植物损伤,并提高生存率。这些研究结果,表明Dex、Xe、Ar具有包括移植物在内的多器官保护效应。据此,我们提出假设:在UW器官保存液中加入Dex、Xe、Ar可改善DCD边缘供体的保存质量和移植后的移植物功能。本研究通过基于Dex/惰性气体添加改良威斯康星大学器官保存液(University of Wisconsin solution,UW液)的配制,构建猪DCD边缘供体模型和获取边缘供肾;和通过Dex改良UW液,临床收集热缺血离体人肺组织标本,再用armed conflict改良保存液静态冷藏(static cold storage,SCS)猪DCD供肾和人肺组织,采用HE染色,WB,TUNEL,免疫荧光检测和透射电镜等方法,验证Dex/Xe、Ar能否提高DCD边缘供肾和人肺组织的保存质量,并探索改良保存液对凋亡、程序性坏死、铁寻找更多死亡等不同程序性细胞死亡(programmed cell death)模式的影响。实验方法:(一)右美托咪定/惰性气体改良UW液对猪DCD边缘供肾的保护作用及机制研究1.基于Dex/惰性气体添加的改良UW液的配制改良保存液配方:Solution 1:30%N_2+5%CO_2+65%O_2+UW液;Solution 2:30%N_2+5%CO_2+65%O_2+0.1nM Dex+UW液;Solution 3:30%Xenon+5%CO_2+65%O_2+0.1nM Dex+UW液;Solution 4:30%Argon+5%CO_2+65%O_2+0.1nM Dex+UW液;Solution 5:15%Xenon+15%Argon+5%CO_2+65%O_2+0.1nM Dex+UW液;Solution 6:50%Xenon+5%CO_2+45%O_2+0.1nM Dex+UW液;Solution 7:50%Argon+5%CO_2+45%O_2+0.1nM Dex+UW液;Solution 8:25%Xenon+25%Argon+5%CO_2+45%O_2+0.1nM Dex+UW液按照上述实验设计的改良保存液配方,将30%氮气(N_2)、不同浓度的惰性气体(Xe和/或Ar)往含或不含0.1nM Dex的UW液中以0.5L/min的速度充气20min,完成8种改良保存液的配制。2.建立猪DCD供体模型及边缘供肾的获取小香猪镇静后监测生命体征,肝素化,通过静脉注射过量麻醉药物丙泊酚和顺阿曲库铵诱导猪心跳、呼吸停止,完成猪DCD供体模型构建。然后行开胸开腹术,用含肝素的生理盐水进行循环灌洗,待热缺血30min时摘取肾脏,完成边缘供肾的获取。3.验证改良保存液对DCD供体肾脏的保护作用及其对凋亡、程序性坏死、铁死亡的影响DCD边缘供肾获取后经上述8种改良保存液SCS 24h或72h后行HE染色,并用双盲法对切片进行组织损伤评分,观察和评估Dex联合惰性气体对DCD边缘供肾SCS后的病理改变。通过TUNEL检测肾组织细胞凋亡,免疫荧光检测磷酸化混合系列蛋白激酶样结构域蛋白(phosphorylation mixed lineage kinase domain like protein,pMLKL)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达,验证改良保存液对凋亡、程序性坏死和铁死亡信号通路的影响。(二)右美托咪定改良UW液对热缺血离体人肺组织的保护作用及机制研究在临床肺叶切除病例中,从切下的肺叶组织按采集标准获取正常人体肺组织(热缺血离体人肺组织),用Dex改良UW液SCS肺组织16h模拟供体肺冷保存状态,采用HE染色,TUNEL,WB,免疫荧光和电镜检测方法,评估Dex对人肺组织冷保存的作用,并检测添加Dex改良UW液对细胞凋亡、程序性坏死和铁死亡的影响。实验结果:(1)通过静脉注射过量麻醉药物丙泊酚和顺阿曲库铵后,5头小香猪均心搏停止,成功构建猪DCD供体模型,建模成功率100%。(2)Dex联合惰性气体可改善猪DCD边缘供肾SCS 24h和72h后的形态与结构,减轻肾组织损伤。与NC组(非冷藏组)相比,CI24h和CI72h组显著降低了平均肾小管、肾小球健康细胞比率和增加肾损伤评分(P<0.001~0.0001)。与CI24h组相比,除CI24h+Dex组外,所有Dex联合Xe和/或Ar组均提高了肾小管健康细胞的比率(P<0.05);添加Dex+50%Xe/50%Ar/25%Xe+25%Ar组能提高肾小球健康细胞比率(P<0.01);添加Dex+50%Xe/50%Ar/15%Xe+15%Ar/25%Xe+25%Ar/组能降低SCS 24h的肾损伤评分(P<0.05)。与Dex+15%Xe+15%Ar组相比,Dex+25%Xe+25%Ar组肾损伤评分降低(P<0.05)。在SCS 72h的移植肾中,肾组织严重损伤。与CI72h组相比,添加Dex+50%Xe/50%Ar/25%Xe+25%Ar组能提高肾小管健康细胞比率(P<0.05);添加Dex+30%Ar/15%Xe+15%Ar/50%Xe/50%Ar/25%Xe+25%Ar组能提高肾小球健康细胞的比率(P<0.05);Dex+50%Xe/50%Ar/25%Xe+25%Ar能降低SCS 72h的肾损伤评分(P<0.05)。与Dex+30%Ar组相比,Dex+50%Ar组可提高肾小管健康细胞的比率且降低肾损伤评分(P<0.05),Dex+50%Ar组显示出对肾更好的保护效果。(3)Dex和/或惰性气体可减少猪DCD边缘供肾SCS 24h和72h的细胞凋亡。与NC组相比,CI24和CI72组TUNEL阳性细胞数量增加(P<0.05)。与CI24h和CI72h组相比,添加Dex/Dex+Xe/Dex+Ar/Dex+Xe+Ar的所有组TUNEL阳性细胞数量均减少(P<0.05)。CI24h+Dex+50%Ar组比CI24h+Dex+30%Ar组、CI24h+Dex+50%Xe组的TUNEL阳性细胞数量更少(P<0.05)。(4)Dex和/或惰性气体可降低猪DCD边缘供肾SCS 24h和72h的pMLKL的表达量,但只有24h组具有统计学意义。与NC组相比,CI24和CI72h组pMLKL表达量增加(P<0.05)。与CI24h组相比,添加Dex/Dex+Xe/Dex+Ar/Dex+Xe+Ar的所有组pMLKL表达量均下降(P<0.05)。(5)Dex和/或惰性气体对猪DCD边缘供肾SCS 24h和72h的GPX4的表达量无明显影响。与NC组相比,CI24h和CI72组GPX4表达量增加(P<0.05)。与CI24h和CI72h组相比,添加Dex/Dex+Xe/Dex+Ar/Dex+Xe+Ar的所有组GPX4表达量无明显变化(P>0.05)。(6)Dex可改善热缺血离体人肺SCS 16h的形态与结构,能减轻肺上皮细胞和内皮细胞损伤,降低肺损伤评分(P<0.01);Dex也可降低TUNEL+凋亡细胞数量和pMLKL表达(P<0.05)。(7)Dex对热缺血离体人肺SCS 16h的GPX4的表达量无明显改变(P>0.05)。结论:1.采用静脉注射过量丙泊酚和顺阿曲库铵的方法可有效建立猪DCD边缘供体模型。2.Dex联合Xe、Ar添加改良的UW液对长时间SCS猪DCD边缘供肾能提供更好的保护作用,其机制涉及降低细胞凋亡和程序性坏死。3.改良保存液的配方中,Dex+50%Ar添加改良的UW液展现出最佳的保护效果。4.所构建的猪DCD边缘供肾发生了铁死亡,添加Dex/Dex+Xe/Dex+Ar/Dex+Xe+Ar的UW液不能改善该细胞死亡模式。5.Dex能降低热缺血离体人肺组织SCS的损伤,其机制与抑制细胞凋亡和程序性坏死有关,未涉及对细胞铁死亡的调控。
基于Nrf2/HO-1通路探讨大承气汤治疗重症急性胰腺炎急性肾损伤作用机制
目的 探讨大IACS-10759小鼠承气汤治疗重症急性胰腺炎(SAP)急性肾损伤(AKI)的可能作用机制。方法 采用胆胰管逆行注射3.5%牛磺胆酸钠制备SAP小鼠模型。将30只小鼠分为假手术组、模型组和大承气汤组,术后5、13、21 h分别予生理盐水或大承气汤灌胃1次。术后24 h观察小鼠一般状况,检测血清淀粉酶(AMY)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;观察小鼠胰腺及肾组织形态,检测肾组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)mRNA及蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组小鼠精神萎靡,反应差,血清AMY、TNF-α、IL-1β、IL-6、Scr、BUN、MDA含量明显升高(P<0.001),SOD含量明显降低BMS-354825溶解度(P<0.001);胰腺组织和肾组织出现细胞水肿、坏死及炎性浸润等变化,病理评分明显升高(P<0.001),肾组织Nrf2 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01,P<0.05),HO-1蛋白表达明duck hepatitis A virus显升高(P<0.01)。与模型组比较,大承气汤组小鼠整体状态尚可,血清AMY、TNF-α、IL-1β、IL-6、Scr、BUN、MDA含量明显降低(P<0.001,P<0.01),SOD含量明显升高(P<0.05);胰腺组织和肾组织损伤均减轻,病理评分明显降低(P<0.05,P<0.001),肾组织Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论 大承气汤能减轻SAP小鼠全身炎症反应,改善小鼠胰腺和肾组织病理损伤,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路、调节氧化应激反应相关。