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目的回顾性分析自身免疫性脑炎(autoimmune encephalitis,AE)临床特征,并探讨外周血的中性粒细胞-淋巴细胞比值(Neutrophil-to-lymphocyte Ratio,NLR)和淋巴细胞-单核细胞比值(Lymphocyte-to-monocyte Ratio,LMR)分别与AE严重程度的相关性分析,为AE的早期识别、诊断以及病情进展的判断提供更多临床依据。方法选取宁夏医科大学总医院和心脑血管医院2016年1月-2022年9月神经内科住院患者符合自身免疫性GDC-0973抑制剂脑炎诊断标准~([1])的42例,同时选取与AE患者匹配的宁夏医科大学总医院健康体检者43例为对照组。收集不同抗体类型AE的基本信息及临床常规诊疗资料,包含性别、年龄、白细胞计数(White blood cells,WBC)、淋巴细胞计数(Lymphocyte count,LY)、中性粒细胞计数(Neutrophil count,NEUT)、单核细胞计数(Monocytes count,MO)、血小板计数(P1atelet count,PLT)、白蛋白(Albumin,ALB)、改良Rankin量表评分(Modified Rankin Scale,m RS)、自身免疫性脑炎临床评估量表(Clinical Assessment Scale for Autoimmune Encephalitis,MG132小鼠CASE)、脑脊液白细胞计数(Cerebrospinal fluid white blood cell count)、脑脊液生化、脑电图(Electroencephalogram,EEG)以及磁共振(Magnetic Resonance Imaging,MRI)等,分析统计其sandwich immunoassay结果,比较不同抗体类型的临床特征;计算出AE患者外周血NLR和LMR,根据m RS评分(表1)和CASE(表2)评估入院时的病情严重程度进行相关性分析。结果1、42例AE患者中,男性占28(67%)例,女性占14(33%)例,其中抗NMDAR抗体脑炎与抗LGI1抗体脑炎的男性比女性多,占比分别是67%、64%,发病年龄范围是16-78岁,平均年龄40岁。2、本研究中各种抗体类型占比分别为抗NMDAR抗体脑炎15(60%)例、抗LGI1抗体脑炎11(26%)例、抗GAD65抗体脑炎4(10%)例、抗GFAP抗体脑炎4(10%)例、抗CASPR2抗体脑炎3(7%)例、抗MOG抗体脑炎3(7%)例、双重抗体阳性2(5%)例。42例AE患者中23(55%)例有前驱症状,其中包含受凉后发热、头疼头晕、恶心、呕吐症状。本研究中临床表现以癫痫发作27(64%)例最为常见,其次为精神行为异常20(48%)例、认知功能减退14(33%)例、睡眠障碍9(21%)例、意识障碍6(14%)例、言语障碍7(17%)例和运动障碍5(12%)例。3、42例AE患者中行颅脑MRI检查发现20例(48%)结果正常,22例(52%)结果异常。有38例AE患者完善脑电图检查,其中正常脑电图有10(26%)例,脑电图异常:轻度有7(18%)例,中度有18(47%)例,重度有3(8%)例。4、AE组与对照组相对比,发现AE患者中外周血的NLR、PLR、WBC、NEUT及MO水平明显偏高(P<0.001),然而外周血的LMR、LY及ALB水平明显偏低(P<0.001)。5、按AE疾病严重程度,将患者分轻度组(MD组)和重度组(SD组),分析两组间差异,发现SD组外周血的NLR水平较MD组患者明显偏高(P<0.01),同时两组之间WBC、NEUT及MO均有明显统计学差异(P<0.01),然而SD组外周血的LMR较MD组患者明显偏低(P<0.01)。6、根据Spearman相关性分析结果:NLR与AE患者CASE评分呈正相关(r=0.480,P=0.001),WBC与CASE评分呈正相关(r=0.585,P<0.001),NEUT与CASE评分呈正相关(r=0.601,P<0.001),LMR与CASE评分呈负相关(r=-0.392,P=0.010)。CASE评分与m RS评分呈正相关(r=0.853,P<0.001)。7、本研究中,在单因素回归分析中发现WBC、NEUT及NLR与重症AE相关,并进行多因素logistic回归分析得出NLR与CASE评分仍有显著统计学差异(OR=1.404,95%CI:1.009-1.954,P=0.044),结果表明外周血的NLR升高是AE患者病情加重的独立危险因素。由ROC曲线可得知,NLR作为预测AE严重疾病的指标的敏感度为81.3%,特异度为73.1%,最佳截止值为4.34,AUC为0.779(95%CI:0.623-0.934)P<0.05)。结论1、本研究中,AE患者抗体类型以抗NMDAR抗体脑炎和抗LGI1抗体脑炎占比最多。临床表现以精神行为异常及癫痫发作在各抗体类型中最为多见。2、AE患者38例完善脑电图中,大部分完善脑电图异常,其中抗CASPR2抗体脑炎、抗MOG抗体脑炎及双重抗体脑炎全部异常。3、外周血的NLR升高是AE病情加重的独立危险因素,可作为评定病情严重程度的生物标志物之一。

目的 研究不同保存温度、不同保存时间对单采富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)中关键生长因子的影响，为最大限度发挥PRP在临床治疗中的作用提供理论基础。方法 使用血液成分分离机单采PRP(n=30),分别于22℃、-80℃贮存，用ELISA方法检测血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)、富含血小板衍生性生长因public biobanks子(PDGF)。同时留取单采过程中剩余血浆制备乏血小板血浆(n=30)作比较。检测22℃保存1、3、5 d时PRP中生长因子含量；检测22℃保存3 d的PRP在凝血酶激活0.5、1、1.5 h后生长因子含量；检测22℃保存3 d的PRP与22℃保存3 d后置于-80℃继续冰冻保存30 d的冰冻PRP中生长因子含量；检测-80℃冰冻保存30,60,180 d的PRP中生长因子含量以及反复冻融1、2、3、5、10次-80℃冰冻保存180 d冰冻PRP中生长因子含量。结果 单采此网站PRP生长因子含量显著高于乏血小板血浆。22℃保存1、3、5 d时PRP中VEGF、TGF-β、PDGF含量无统计学差异；22℃保存的PRP用凝血酶激活0.5、1、1.5 h后，VEGF、TGF-β、PDGF含量无统计学差异；22℃保存3 d的PRP与22℃保存3 d后置于-80℃继续冰冻保存30 d相比，生长因子含量不具备统计学差异。-80℃冰冻保存30,60,180 d的PRP,VEGRSL3体外F、TGF-β、PDGF含量无统计学差异；冰冻PRP反复冻融10次以内，VEGF、TGF-β、PDGF含量无统计学差异。结论 单采PRP激活后可释放大量的生长因子；单采新鲜PRP在22℃保存5 d或在-80℃直接冰冻保存180 d内均不影响生长因子含量，后者可实现相对长期、有效、安全保存，有利于单采PRP在治疗中一次采集、多次使用。

目的:通过模拟缺氧环境体外培养小鼠精原干细胞C18-4研究其自我更新能力及铁代谢相关蛋白表达情况的改变方法:本课题组首先通过单细胞测序方法,绘制人及小鼠睾丸组织中HIF-α及铁代谢蛋白时空表达谱系。然后通过构建体外培养的小鼠精原干细胞(C18-4细胞系)模型模拟缺氧环境,应用CCK-8法及EdU法检测缺氧对小鼠精原干细胞增殖能力的影响,并采用免疫印迹法,检测HIF-1α蛋白和铁代谢相关蛋白在细胞中表达的改变。同时应用qPCR方法检测铁死亡相关蛋白的mRNA表达情况。本实验拟阐明缺氧对精原干细胞C18-4自我更新的影响及铁代谢蛋白表达情况的改变,并探讨其可能的机制。结果:1.常氧条件下C18-4在显微镜下呈圆形或卵圆形,附着在培养皿上生长并增殖形成集落,另外随培养时间的增加,所观察到SSCs集落的数量及各集落SSCs的数量也随之增加。2.在模拟缺氧条件下C18-4细胞集落数目和每个集落中的细胞数目降低,并且随着体外缺氧培养时间的增加,selleck细胞集落的数目同对照组相比明显减少,密度逐渐下降;并且随着氯化钴(CoCl2)的药物浓度逐渐增加,细胞集落的数量逐渐减少,密度逐渐下降,形态逐渐变得不规则。3.CoCl2模拟缺氧条件下培养的C18-4细胞在0h、24 h、48 h、72 h四个不同时间点应用CCK-8法检测细胞增殖能变化,随着作用时间增加,细胞增殖能力逐渐减弱。4.分别用CoCl2浓度50.0、100.0、150.0、200.0μmol/LCoCl2处理 C18-4 细胞 24h 培养Z-IETD-FMK生产商后进行检测,随着 CoCl2浓度的增加,细胞增殖能力逐渐降低(P<0.001)。5.CoCl2处理C18-4细胞进行体外培养48h后,EdU结果显示缺氧组C18-4细胞较对照组C18-4细胞的体外增殖能力明显下降。6.用200 μmol/L CoCl2处理C18-4细胞分别培养24h、48 h、72h,用免疫印迹法观察HIF-1α蛋白表达变化。与对照组相比,缺氧组在24h、72h检测HIF-1α蛋白表达水平相对增加,且差异具有统计学意义(P<0.05);用200μmol/L CoCl2处理C18-4细胞72h时,与对照组相比,缺氧组中HIF-1α蛋白的表达水平显著增加,并且差异有高度统计学意义(P<0.0001)。7.分别用50、100、150、200 μmol/L CoCl2处理C18-4细胞24h,用免疫印迹法观察HIF-1α蛋白表达变化。与对照组相比,缺氧组(100、150μmol/L CoCl2处理组)HIF-1α蛋白表达水平相对增加,且差异具有统计学意义(P<0.01);用200μmol/LCoCl2处理C18-4细胞24h时,与对照组相比,缺氧组中HIF-1α蛋白的表达水平显著增加,且差异有统计学意义(P<0.001)。8.用200 μmol/LCoCl2处理C18-4细胞24小时,缺氧组FPN蛋白表达水平较对照组明显下降,且差异具有统计学意义(P<0.05),但FTH、FTL蛋白表达水平与对照组相比明显增加,且差异具有统计学意义(P<0.05)。9.用荧光定量PCR检测两组细胞中的GPX4、Acsl4、Sat-1、DJ-1并计算其相对表达量,与对照组相比,GPX4、Acsl4 mRNA水平未发生明显变化(P>0.05),Sat-1 mRNA水平升高,且具有统计学意义(P<0.001),DJ-1 mRNA水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。10.通过检测C18-4细胞内MDA的含量可以反映脂质过氧化水平,与对照组相比,低氧组MDA含量显著增加,差异具有统计学意义(P<0.01)。11.应用抗氧化剂,铁死亡抑制剂处理模拟缺氧条件下培养的C18-4细胞系,经24h培养后,NAC实验组细胞数量较缺氧对照组(200μmol氯化钴处理24h)明显增多、密度上升。而Uridine实验Immunohistochemistry组、Fer-1实验组细胞数量、密度无明显变化。结论:缺氧条件下体外培养C18-4细胞自我更新能力下降,且C18-4细胞缺氧诱导因子1α蛋白表达水平上升。缺氧条件下体外培养C18-4细胞内缺氧诱导因子的下游调控分子铁代谢相关蛋白发生变化,提示精原干细胞内铁稳态失衡并导致脂质过氧化物的大量积累,这可能是缺氧诱导因子对精原干细胞自我更新能力调节的一种分子机制。本研究为进一步研究男性不育的病因提供了新的理论基础并为进一步探索精原干细胞自我更新的分子机制提供了新的实验依据。

为探究饲喂甘草后低盐胁迫对尖吻鲈相关酶活性的影响，在盐度32.1下，将体质量(13.89±2.50) g的尖吻鲈饲养在500 L玻璃纤维桶中，投喂添加0、10、30 g/kg和50 g/kg甘草粉的饲料饲养56 d,之后转入100 L盛有自来水的塑料桶中进行24 h胁迫试验，对相关酶活性进行gamma-alumina intermediate layers检测和分析。试验结果表明：胁迫后，对照组尖吻鲈幼鱼血清过氧化氢酶活性和总抗氧化能力有不同程度升高；胁迫后溶菌酶活性随甘草添加量的增加而升高，而丙二醛含量则相反；与胁迫前相比，胁迫后谷胱甘肽过氧化物Gefitinib-based PROTAC 3浓度酶活性和丙https://www.selleck.cn/products/ag-221-enasidenib.html二醛含量显著降低(P<0.05);胁迫后肝脏总超氧化物歧化酶、过氧化物酶活性和总抗氧化能力随甘草添加量的增加逐渐降低(P<0.05);胁迫后各组过氧化物酶活性、丙二醛含量和总抗氧化能力均显著高于胁迫前相应各组，而谷胱甘肽过氧化物酶活性恰好相反；胁迫后除10 g/kg添加组差异不显著外，其他各组鳃Na~+/K~+-ATP酶活性均显著低于胁迫前相应各组(P<0.05)。研究结果表明，饲料中添加甘草可以增强尖吻鲈机体活力以及抗应激和环境胁迫的能力。

目的：观测眼针对急性脑缺血再灌注损伤（CIRI）大鼠脑缺血半暗带皮质组织中抗氧化功能轴-系统XC-谷胱甘肽-谷胱甘肽过氧化物酶4[System Xc(-selleckchem GNE-140)/GSH/GPX4]的影响，探讨眼针改善CIRI大鼠神经细胞铁死亡的作用机制。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组、眼针组和抑制剂组，每组12只。改artificial bio synapses良线栓法复制CIRI大鼠模型；眼针组针刺双侧“上焦区”“肝区”“下焦区”“肾区”。抑制剂组腹腔注射GPX4抑制剂RSL3（10 mg/kg）。Garcia J H评分法评估大鼠神经功能损伤程度、TTC染色观察脑组织梗死情况、HE染色观察脑组织神经元形态；透射电子显微镜观察线粒体结构；试剂盒检测MDA（丙二醛）、GSH、亚铁离子（Fe~(2+)）和活性氧（Rhttps://www.selleck.cn/products/Gemcitabine-Hydrochloride(Gemzar).htmlOS）的含量；Western blot法检测溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、溶质载体家族3成员2（SLC3A2）和GPX4的蛋白表达量；RT-PCR法检测SLC7A11、GPX4的mRNA表达。结果：与假手术组相比，模型组大鼠神经功能损伤严重（P<0.01）；线粒体呈典型铁死亡改变；铁死亡相关：Fe~(2+)、ROS、MDA含量显著增加（P<0.01）；GSH含量，SLC7A11、SLC3A2、GPX4的表达量显著降低（P<0.01）。眼针治疗后神经功能损伤减轻（P<0.01）；线粒体损伤减轻；铁死亡相关蛋白含量显著降低（P<0.01）；功能轴相关指标的含量和相对表达量升高（P<0.01，P<0.05）。抑制剂组大鼠神经功能损伤加重（P<0.01）；线粒体损伤加重；铁死亡相关蛋白含量增加（P<0.01，P<0.05）；功能轴相关指标的含量和相对表达量降低（P<0.01，P<0.05）。结论：眼针可通过调控System Xc（-）-GSH-GPX4抗氧化功能轴来改善CIRI大鼠神经细胞铁死亡。

目的 探讨血小板和凝血功能联合检测在病毒性肝炎中的预测价值。方法 选取本院2021年5月至2022年10月收治的150例病毒性肝炎患者为研究对象，将其纳入观察组，并根据疾病类型将其分为急性病毒肝炎组（n=44）、慢性病毒肝炎组（n=66）及重型病毒肝炎组（n=40）；另选取同期来本院行健康检查的50例健康者作为对照组，检测所有受试者的凝血功能指标，如凝血medical journal酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、凝血酶原活动度（PTA）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）Fulvestrant体外、D-二聚体（D-D），并检测其血小板计数（PLT）、平均血小板体积（MPV）、血小板分布宽度（PDW）及血小板压积（PCT），并分析以上指标与不同类型病毒STM2457配制性肝炎疾病的相关性。结果 观察组的PLT水平显著低于对照组，MPV、PDW及PCT水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；重型病毒肝炎组的PLT水平显著低于急性病毒肝炎组及慢性病毒肝炎组，MPV、PDW及PCT水平显著高于急性病毒肝炎组及慢性病毒肝炎组，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组的PT、TT及APTT时间显著长于对照组，PTA及FIB水平显著低于对照组，D-D水平显著高于对照组（P<0.05）；重型病毒肝炎组的PT、TT及APTT时间显著长于急性病毒肝炎组及慢性病毒肝炎组，PTA及FIB水平显著低于急性病毒肝炎组及慢性病毒肝炎组，D-D水平显著高于急性病毒肝炎组及慢性病毒肝炎组，差异有统计学意义（P<0.05）。血小板+凝血功能指标检测病毒性肝炎的灵敏度、准确度及特异度高于血小板及凝血功能指标单一检测，差异有统计学意义（P<0.05）。经分析，PLT、PTA及FIB与不同类型病毒型肝炎呈负相关，PLT、PTA及FIB水平越低，疾病越严重；MPV、PDW、PCT、DD、PT、TT及APTT与不同类型病毒型肝炎呈正相关，MPV、PDW、PCT及D-D水平越高，PT、TT及APTT时间越长，疾病越严重（P<0.05）。结论 对于病毒性肝炎患者而言，血小板和凝血功能相关指数与疾病的严重程度存在一定关联。血小板和凝血功能联合检测可多角度反映不同类型疾病进程，以便指导临床对于疾病的诊断及预后效果的判断。

目的 观察急性等容血液稀释联合回收式自体输血技术在心脏瓣膜置换手selleckchem MG132术中应用的效果及安全性。方法 选择2022年6月-12月在我院行心脏瓣膜Telemedicine education置换手术的患者80例，按数字表法随机分为急性等容血液稀释联合回收式自体输血组Z-IETD-FMK配制（A组）和回收式自体输血组（B组），每组40例。A组在麻醉诱导后、肝素化前进行急性等容性血液稀释并采集一定量的血液保存，在鱼精蛋白拮抗肝素后回输所采自体血；同时对整个手术过程术野出血、体外循环管道余血进行血液回收并充分清洗后回输。B组对整个手术过程术野出血、体外循环余血进行血液回收并充分清洗后回输。比较两组术中术后异体输血量、异体输血率、术后12、24 h出血引流量、心脏外科ICU留观时间、术前及术后12、24 h凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB）、血红蛋白（Hb）、红细胞压积（Hct）、血小板计数（PLT）水平。结果 两组术后12、24 h PT、APTT、TT较术前延长、FIB较术前下降，且B组术后12、24 h PT、APTT、TT长于A组，FIB低于A组（P<0.05）；两组术后12、24 h Hb、Hct、PLT较术前下降，且B组低于A组（P<0.05）;A组术中术后异体输血量、异体输血率、术后12、24 h出血引流量、ICU留观时间少于B组（P<0.05）。结论 急性等容血液稀释联合回收式自体输血在心脏瓣膜置换手术中应用效果良好，对凝血功能影响小，可以减少术后出血引流量、异体输血量和异体输血率，有效节约用血，缓解血源紧张。

目的:研究新生血管性青光眼(NVG)治疗中玻璃体腔内注射雷珠单抗疗法与经小梁切除术联用效果。方法:以回顾性分析为法，观察对象为2020年1月至2022年1月入院的70例NVG患者，根据不同治法分为研究组(35例)与对照组(35例)。研究组行玻璃体腔内注射雷珠单抗疗法与经小梁切除术联合治疗，对照组行经小梁切除术治疗；比较两组治疗前与治疗3个月后眼压水平Anthocyanin biosynthesis genes、视力水平、眼动脉血流动力学指标[血流阻力系数(RI)、收缩期峰值流速(PSV)、舒张末期流速(EDV)]、血清白细胞介素-6(ILMS-275价格-6)与治疗后总有效率、并发症(眼球疼痛、前房积血、低眼压、角膜水肿)发生率。结果:治疗前，两组患者的眼压、视力、RI、PSV、EDV、IL-6水平差异无统计学意义(P>0.05);治疗后，两组患者的视力、PSV、EDV水平较治疗前升高，眼压、RI、IL-6水平较治疗前降低，差异有统计学意义(P<0.05);两组视力、PSV、EDV、眼压、RI、IL-6水平治疗前后差值比较，差异有统计学意义(P<0.05);研究组的总有效率较对照组升高，并发症发生率较对照组降低，差异GNE-140核磁有统计学意义(P<0.05)。结论:NVG治疗中玻璃体腔内注射雷珠单抗疗法与经小梁切除术联用效果显著，可有效提升患者视力，降低其眼压水平，还可改善眼动脉血流动力学及IL-6水平，减少并发症。

目的：探究高原低氧如何调控PPAR信号通路诱导脾脏组织铁死亡发生的分子机制。方法：本研究构建低氧动物模型，通过转录组学和蛋白质组学联合分析筛选预测靶基因，通过GO和KEGG富集分析，挖掘低氧暴露下PPAR和铁死亡通路中的关键基因，并通过RT-qPCR和Western Blot进行验证。结果：转录组学与蛋白selleckchem BIBW2992质组学联合分析结果显示，低氧暴露下有95个预测靶基因（蛋白质）出现显著性差pathologic outcomes异表达，GO注释分析和KEGG富集分析结果显示，差异基因主要显著富集在PPAR和铁死亡信号通路。对PPAR与铁死亡信号通路进行相关性分析，结果呈负相关，且GSEA显寻找更多示，PPAR和铁死亡信号通路的差异基因集在高原低氧组呈相反表达趋势。对PPAR信号通路中关键基因（PPARA、RXRB、APOA1和SCD-1）进行验证，结果发现在低氧暴露下mRNA 和蛋白表达量均下调。随后，对铁死亡信号通路中内源性途径中GPX4和外源性途径中SLC7A11、TRP53和TFRC的mRNA和蛋白表达量均出现差异表达。对4个铁死亡关键基因与差异炎症相关基因（DE-IRGs）进行相关性分析，结果均呈正相关或负相关。并对炎症相关基因进行验证，发现低氧暴露下脾组织中IL-1β、IL-6、IL-12、IL-18、INF-γ和TNF-α的表达水平上调。结论：本研究发现，高原低氧暴露通过PPAR信号通路介导脂代谢紊乱进一步诱导铁死亡，并伴随炎症反应的发生，进而引起脾脏组织损伤。

细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP)酶是一gibberellin biosynthesis类以血红素为辅基的单加氧酶,广泛参与生物体中内源性底物和外源性药物的氧化代谢,其代谢途径包括羟基化、去甲基化以及环氧化等。CYP4家族是人类第二大CYP家族。其中,细胞色素P450 4F2(CYP4F2)是一种ω-羟化酶,其功能包括催化花生四烯酸生成20-羟二十烷四烯酸,分解代谢白三烯B4和长链脂肪酸以及启动维生素K和维生素E的代谢等。α-生育酚(α-TOH)是维生素E中生物活性和生物利用率最高的抗氧化剂,它是CYP4F2的主要底物之一。阐明CYP4F2与α-TOH的结合机制有利于我们了解α-TOH的代谢过程,丰富CYP4F2的结构-功能关系,为基于底物的药物设计提供理论指导。本论文利用同源模建方法构建了CYP4F2的蛋白结构,通过分子对接方法获得了α-TOH与CYP4F2的复合物模型,并采用分子动力学模拟结合多种分析方法研究了α-TOH与CYP4F2的相互作用过程以及重要残基突变对二者结合的影响。具体内容包括:1.细胞色素P450 4F2与α-生育酚相互作用的分子动力学模拟研究α-生育酚(α-TOH)是一种强效的抗氧化剂。在维生素E的八种形式(α-、β-、γ-和δ-生育酚和α-、β-、γ-和δ-生育三烯酚)中,α-TOH具有最高的生物活性和生物利用率。血浆中α-TOH的浓度与人体健康密切相关,浓度较低可能会导致人体生长发育迟缓、贫血和免疫下降;浓度过高可能会导致许多不良反应。CYP4F2是人体中主要代谢α-TOHselleck的细胞色素P450酶,它通过对α-TOH的末端甲基进行ω-羟基化来激活α-TOH的代谢。阐明α-TOH与CYP4F2的结合机制,揭示α-TOH与CYP4F2的相互作用细节对了解α-TOH的代谢过程具有重要意义。目前,CYP4F2的蛋白结构尚未被解析。在本章工作中,我们通过同源模建和分子对接构建了α-TOH-CYP4F2复合物的模型,综合利用分子动力学模拟和结合自由能分析等计算方法对复合物体系进行研究以明确α-TOH与CYP4F2结合的关键因素及二者的相互作用细节。结合自由能计算及自由能面图分析结果表明,疏水作用和氢键作用是α-TOH与CYP4F2结合的关键因素。8个关键残基(V67、V76、F124、V395、P396、V397、L421和L504)在CYP4F2的活性位点形成疏水空腔稳定α-TOH与CYP4F2的结合,S423与α-TOH形成唯一的氢键将α-TOH锚定在有利于发生ω-羟基化的位置。该项工作丰富了CYP4F2的结构信息,有利于我们理解α-TOH与CYP4F2的相互作用过程,为研究CYP4F2介导的其它底物的ω-羟基化提供了有益的理论参考。2.细胞色素P450 4F2重要残基突变对α-生育酚结合的影响基于前一部分的计算结果,并结合相关实验数据和CYP4F2的结构特征,我们推测S423、V433和E328可能对α-TOH与CYP4F2的结合有重要作用。前一部分的研究发现S423与α-TOH形成唯一的氢键,S423可能对α-TOH与CYP4F2的结合至关重要。有报道称V433M突变会显著降低CYP4F2对α-TOH的ω-羟基化活性。我们观察到,V433的位置远离CYP4F2的活性位点,远端残基V433突变如何影响CYP4F2的结构特征和底物结合引起了我们的研究兴趣。此外,CYP4家族酶I螺旋上的谷氨酸与血红素形成酯键,这此网站使得该家族酶能够选择性催化底物发生ω-羟基化。CYP4F2中I螺旋上的E328与血红素形成酯键,该酯键对α-TOH发生羟基化的影响尚不明确。为了研究S423、V433和E328对α-TOH与CYP4F2结合的影响,我们设计突变实验对S423A,V433M和E328A突变型体系分别进行了分子动力学模拟。结果表明,S423与α-TOH之间氢键的消失导致α-TOH发生位移,减弱了α-TOH与CYP4F2的相互作用,破坏了发生ω-羟基化反应的距离条件。V433通过远端调控影响α-TOH与CYP4F2的结合,V433M突变引起蛋白构象变化,破坏了原有的疏水空腔和S423与α-TOH之间的氢键,不利于α-TOH与CYP4F2的结合。E328与血红素之间的酯键将α-TOH限制在一个狭窄的空腔内,有利于α-TOH在ω位点发生羟基化反应;在E328A突变型体系中,酯键的消失增加了ω-1位点的碳原子与血红素接触的概率,从而增加了α-TOH的ω-1位点发生羟基化反应的可能性,减弱了CYP4F2对α-TOH发生ω-羟基化的选择性。S423A、V433M和E328A突变直接或间接地改变了α-TOH与CYP4F2的结合模式,降低了二者的结合亲和力,不利于α-TOH发生ω-羟基化。该项工作在原子水平上阐明了重要残基突变对α-TOH与CYP4F2结合的影响,有利于我们更好的理解CYP4F2的结构-功能关系。