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目的 小儿腺样体切除术中应用快速康复理念联合冷冻盐水冷疗干预的临床效果观察。方法 选取2021年1月—2022年5月在本院择期行鼻内镜下小儿腺样体切除术的患儿100例，按照随机数字表法分为对照组、试验组，每组50例。对照组采取传统围手术期护理方式，试验组在予以基础护理的同时，采取快速康复理念联合冷冻盐水冷疗干预。比较两组患儿围手术期基本情况（手术时间、出血量、咽痛持续时间、鼻腔通气时间），比较观察术后6h、12h、24h患儿疼痛情况（WongGDC-0973采购-Baker面部表情量表），分析两组患儿出院时的家属满意度以及术后一周内患儿的并发症发生率。结果 试验组患儿手术时间medical autonomy、出血量、咽痛持续时间、鼻腔通气时间较对照组显著更少（P<0.05），术后6h、12h、24h Wong-Baker面部表情量表评分较对照组显著更低（P<0.05）；术后一周内两组患儿并发症（鼻出血、发热、窒息）发生率无统计学意义（P>0.05）；试验组患儿出院时的家属满意度较对照组显著更RP56976临床试验高，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 快速康复理念联合冷冻盐水冷疗干预在小儿腺样体切除术中的临床效果较为显著，加快患儿术后康复进度，并减轻疼痛，有利于提高家属满意度。

目的 探讨黄杞苷对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞增殖、炎症反应及氧化应激的干预效果及分子机制。方法 RAW264.7细胞随机分为对照组、LPS组和不同浓度黄杞苷干Liraglutide作用预组，于不同培养时间用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖；ELISA检测上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)浓度；试剂盒检测细胞活性氧(ROS)、超氧化物(O_2·~-)和Infectious illness一氧化氮(NO)的释放量；Western blot检测NF-κB信号通路中IκBα、p65、p-p65蛋白的表达。结果 LPS组较对照组细胞增殖增加，而100、200、400、600、800μmol/L黄杞苷均能抑制LPS诱导的细胞增殖，其中400μmol/L黄杞苷干预效果最明显。LPS组细胞产生的TNF-α、IL-6、IL-1β、ROS、O_2·~-和NO较对照组升高，400μmol/L黄杞苷可降低LPS诱导TNF-α、IL-6、IL-1β、ROS、O_2·~-和NO的产生。LPS组细胞IκBα蛋白水平下调，p65蛋白、p-p65蛋白水平上调，而黄杞苷可抑制LPS诱导的IκBα蛋白水平下调，pwww.selleck.cn/products/LBH-58965蛋白、p-p65蛋白水平上调。结论 黄杞苷可能通过干预NF-κB信号通路，抑制LPS诱导RAW264.7细胞增殖、炎症因子和ROS/活性氮簇(RNS)产生，显示了重要的抗炎和抗氧化功效，为其治疗炎症性疾病的深入研究提供一定的依据和借鉴。

目的：探究二肽基肽酶-4抑制剂西格列汀（SIT）对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）的改善作用及具体机制。方法：选取6～8周龄雄性C57BL/6小鼠，随机分为对照组、SIT组、LPS组和LPS+SIT组，通过腹腔注射LPS(10 mg/kg)构建小鼠ALI模型，LPS+SIT组在LPS造模前1 h腹腔注射SIT(100 mg/kg)。造模12 h后统一处死小鼠，收集小鼠肺组织并进行病理学、分子生物学检测。培养THP-1细胞并诱导其分化为巨噬细胞，而后将细胞随机分为5组：对照组、SIT组、LPS组、LPS+SIT组和LPS+Ferrostatin-1(Fer-1,铁死亡抑制剂)组。分别向LPS+SIT组和LPS+FeFerrostatin-1细胞培养r-1组细胞加入SIT(100 mmol/L)和Fer-1(5μmol/L),1 h后给予LPS(1μg/mL)刺激构建细胞损伤模型，待LPS刺激8 h后，统一收集各组细胞进行检测。结果：与对照组相比，LPS组小鼠肺组织损伤明显，肺损伤评分、肺湿/干重比以及炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的水平明显升高，而SIT预处理可明显减轻LPS诱导的小鼠肺组织损伤及炎症反应。SIT预处理可减少LPS刺激所致小鼠肺组织铁及丙二醛的堆积，恢复谷胱甘肽过氧化物酶的酶活性以及核因子红细https://www.selleck.cn/products/Staurosporine.html胞2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、血红素加氧酶1(HO-1)的表达。细胞实验中SIT预处理发挥出了与铁死亡抑制剂Fer-1相似的保护作用，恢复了GPX4等抑制铁死亡关键分子的表达，提高了细胞活力。结论：SIT预处理能够显著改善LPS诱导的小鼠ALI，其可有效抑制LPS刺激所引发的巨噬细胞铁死亡，纠正铁代Antidepressant medication谢及脂质过氧化紊乱从而减轻肺组织损伤，SIT可作为ALI/ARDS的潜在治疗药物选择。

为明确侵染香蕉的黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus,CMV）的遗传多样性，对2012—2020年采集自广东、广西、云南和海南4省区的98份疑似感染CMV香蕉样品进行反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR）检测，从确定感染香蕉样品中获得CMV分离物并对其外壳蛋白（coat protein,CP）编码基因进行克隆和序列分析，结合Gen Bank已报道的CM更多V CP基因序列进行种群结构及遗传多样性分析。结果表明，98份疑似样品中有39份感染了CMV，侵染香蕉的CMV分离物CP基因核苷酸序列相似率为82.9%～100.0%，大多数高于90.0%。系统进化分析结果表明，39个CMV香蕉分离物分为3个不同进化支，即进化支IA-a、IB-a和IB-b，都属于亚组Ⅰ，未发现归入亚组Ⅱ的CMV香蕉分离物。CMV不同进化支内的遗传距离为0.005～0.069，亚组Ⅱ与亚组Ⅰ之间的遗传距离大于亚组I内的遗传距离。遗传分析结果表明，CMV各种群的单倍型多样性H_d值均大于0.521，大部分种群的核苷酸多样性P_i值大于0.005；遗传差异统计量K_(ST)和S_(nn)以及遗传分化系数F_(ST)分别为0.356、0.290和0.561;CMV种群间的基因流N_m为0.200。大多数种群的Tajima’s D、Fu&Li’s D和Fu&Li’s F值为负值，且多数未达显著水平。侵染香蕉的CMV CP基因有氨基酸取代，但未发生明显重组。表明侵染香蕉chemogenetic silencing的CMV具有丰富的遗传多样性MC3 MW，且亚组间的遗传多样性大于亚组内的遗传多样性。

植物甾醇具有降胆固醇活性和预防心血管病的作用而备受关注。然而,植物甾醇的低油溶性、水不溶性和高熔点等特性,严重影响其肠道吸收,限制其在食品工业中的加工应用。研究表明,植物甾醇的亲水结构修饰是提高其水溶性和生物利用度的有效途径。目前亲水性植物甾醇衍生物多采用化学法或化学-酶法合成,存在反应温度高、副产物多、催化剂残留和转化率低等问题。此外,目前缺乏对亲水性植物甾醇衍生物消化吸收和调控肠道胆固醇胶束化物理化学行为的系统研究。本课题以β-谷甾醇为主要研究对象,拟采用绿色全酶法合成路线构建新型亲水性β-谷甾醇糖基衍生物,以改善植物甾醇理化性质和提高生物利用度为主要目的,探究β-谷甾醇糖基衍生物对肠道胆固醇胶束化的作用机制,明晰β-谷甾醇糖基衍生物与胆盐的分子相互作用。主要结果如下:(1)设计了一条两步酶促酯交换制备亲水性β-谷甾醇糖基衍生物的反应路线,并对反应条件进行优化。第一步,将β-谷甾醇与己二酸二乙烯酯在皱褶假丝酵母脂肪酶(Candida rugosa lipase,CRL)的催化下低温快速(35°C,30 min)合成中间体β-谷甾醇己二酸乙烯酯,β-谷甾醇己二酸乙烯酯的水解率<4%,产率>94%。第二步,将中间体β-谷甾醇己二酸乙烯酯与亲水组分(赤藓糖醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖和棉子糖)在碱性蛋白酶(alkaline protease from Bacillus subtilis)的催化下制备了一系列新型亲水性β-谷甾醇糖基衍生物,β-谷甾醇己二酸乙烯酯的水解JNJ-42756493供应商率<6%,β-谷甾醇糖基衍生物的产率>90%。利用FT-IR、HPLC-MS和NMR技术对产物结构进行鉴定,明确β-谷甾醇与亲水组分偶联的关键酰基位。(2)亲水结构修饰对植物甾醇的物理和化学性质产生积极作用。与游离β-谷甾醇相比,β-谷甾醇糖基衍生物具有良好的水溶性(35°C时为3.65-8.02 m M)、改善的润湿性(静态接触角为85.4-38.2°)、增强的热稳定性(第二阶段分解温度在310-360°C)、较高的乳化活性、较低的结晶度和良好的氢键网络。理化性质的变化强烈依靠偶联的亲水基团,且随着亲水基团的羟基数量成规律变化。(3)体外胃肠模拟消化中,β-谷甾醇糖基衍生物的生物可及性(41.55%-63.61%)比游离β-谷甾醇的生物可及性(<6%)高10倍。Caco-2细胞模型中,β-谷甾醇糖基衍生物的摄取量(4.11%-6.82%)也高于游离β-谷甾醇的摄取率(<1.80%)。结果表明,亲水结构修饰改善了植物甾醇的消化吸收行为,提高了植物甾醇的生物利用度。此外,β-谷甾醇糖基衍生物灌胃后在机体内消化酶作用下,会部分水解为游离态β-谷甾醇和β-谷甾醇己二酸,且β-谷甾醇糖基衍生物的水解程度受亲水基团空间结构的影响。(4)体外脂解模型中,β-谷甾醇及β-谷甾醇糖基衍生物表现出不同的降胆固醇作用机制。β-谷甾醇会在一定程度上促进脂质消化的程度,显著促进胆固醇在沉淀相中的积累而不影响油酸的分布情况。如当添加6 m M的β-谷甾醇时,沉淀相中胆固醇分布>89%,沉淀相中油酸分布<10%。β-谷甾醇与胆固醇共沉淀或竞争性溶解,从而降低胆固醇的胶束溶解度。与β-谷甾醇不同,β-谷甾醇糖基衍生物显著促进了沉淀相中胆固醇和油酸的积累。如当添加6 m M的β-谷甾醇糖基衍生物时,沉淀相中胆固醇分布为17.55%-75.57%,沉淀相中油酸分布为26.50%-68.27%。β-谷甾醇糖基衍生物可以吸附在脂滴表面,改变胶粒的性质,降低胶粒的电负性,絮凝沉淀,并从混合胶束相中去除,从而干扰胆固醇胶束化。(5)β-谷甾醇与胆固醇的直接作用强于与载胆固醇胆盐胶束的相互作用,说明共沉淀机制优于竞争溶解机制。当亲水性β-谷甾醇糖基衍生物引入载胆固醇胆盐胶束时,导致胆固醇胶束溶解度的急剧非线性下降(从初始胶束溶解度为1.87±0.02 m M最低将至0.78±0.07 m M)。混合胶束粒径减小、表面电位电负性降低和微观形貌的变化表明β-谷甾醇糖基衍生物genetic absence epilepsy分子确实参与了混合胶束的形成。牛磺胆酸钠+β-谷甾醇糖基衍生物二元体系中关键NOE交叉峰的变化,表明β-谷甾醇糖基衍生物通过氢键与牛磺胆酸钠相互作用,改变了牛磺胆酸钠的分子排列,从而影响混合胶束物理性状和功能特性,导致低胆固醇胶束溶解度。此外,β-谷甾醇糖基衍生物的糖基部分明显影响了分子间相互作用的强弱。综上所述,本文构建了一条温和高效生物酶促亲水性β-谷甾醇糖基衍生物的合成路线,系统阐明了亲水结构Roxadustat体内修饰对植物甾醇理化性质和消化吸收的积极作用,确定了亲水性β-谷甾醇糖基衍生物影响胆固醇胶束化的关键因素,对开发植物甾醇膳食营养补充剂具有一定的社会价值和现实意义。

靛蓝是目前已知最古老的色素之一,广泛用于印染行业、医药学和食品领域。靛蓝绿色制备工艺的开发对社会、环境的发展均具有重要意义。本课题利用化学干预策略与蛋白工程技术结合的方式,基于细胞色素P450BM3单加氧酶开发H_2O_2依赖型人工过氧化物酶,催化吲哚羟基化反应制备靛蓝。该人工过氧化物酶体系组分简单,不依赖电子传递蛋白和辅酶NAD(P)H,具有优异的生物催化性能,为靛蓝制备提供了绿色生产的替代方法。具体内容如下:P450BM3蛋白突变体文库构建与突变体制备。通过理性设计选定了78、87和268三个突变位点,其中,78号氨基酸位于底物通道且距离蛋白活性中心较近;87号氨基酸位于活性中心处底物进出通道末端;268号氨基酸位于反应活性口袋I螺旋纽结区域。通过基因定点突变构建了F87A、F87G、F87A/T268A、F87A/T268I、F87A/T268V、F87G/T268A、F87G/T268I、F87G/T268V、V78A/F87A、V78A/F87G等10个细胞色素P450BM3的突变体文库;通过菌液测序确定突变体文库构建成功。P450BM3蛋白的表达与纯化。以大肠杆菌为载体对突变体文库进行蛋白的表达、培养与纯化。加入IPTG诱导蛋白表达、超声破碎、亲和层析、透析浓缩得到目的蛋白;SDS-PAGE蛋白凝胶电泳显示单一条带,分子量约为55 k Da;P450BM3的紫外可见光谱在450 nm处呈现P450酶的特征吸收峰。P450BM3对吲哚羟基化反应的催化能力测试。分别对反应温度、p H、H_2O_2浓度、双功能小分子结构进行优化,确定最优反应条件为温度37℃,p H8.0,H_2O_2浓度30 m M,选择双功能小分子咪唑基乙酰苯丙氨酸(Im-C6-Phe)。蛋白催化性能测试结果表明,野生型P450BM3不能催化吲哚羟基化反GSK1120212采购应,其87号位置苯丙氨酸(Phe)的苯环阻碍底物进入,将其替换丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)后蛋白催化效率大幅提升,F87A和F87G突变体的k_(cat)分别为1007 min~(-1)和1304 min~(-1)。此外,268位置的极性氨基酸苏氨酸(Thr)突变为非极性的丙氨酸(Ala)、异亮氨酸(Ile)、缬氨酸(Val)后,P450BM3的K_m值显著降低,表明疏水口袋的构建有利于底物和血红素中心的结合。双突变体F87G/T268A的催化效率k_(cat)/K_m高达1388 m M~(-1) min~(-1),是肌红蛋白双突变体F43Y/H64D(k_(cat)/K_m=11.86 m M~(-1) min~(-1))的117倍;神经红蛋白三突变体A15C/H64D/F49Y(k_(cat)/K_m=43.25 m M~(-1) min~(-1))的32倍。除此之外,78、87、268位置氨基酸的排布变化能够改变活性口袋的大小与极性,进而影响底物的选择性以及产率,F87A/T268V催化吲哚羟基化反应的化学选择性为80%,双突变体F87G/T268V催化吲哚羟基化制备靛蓝的产率为73%。催化机制解析。利用紫外E-616452使用方法可见光谱(UV-Vis)、高效液相色谱(HPLC)、超高效液质连用色谱(UPLC-MS)以及核磁共振氢谱(~1H NMR)等鉴定反应代谢物,阐明P450BM催化吲哚羟基化反应的催化机制。P450BM3与双功能小分子、吲哚的分子对接模拟结果表明,吲哚不能进入野生型P450BM3的活性部位,因此野生型P450BM3不具备催化活性;P450BM3突变体F87A/T268V、F87G/T268A、F87G/T268V与双功能小分子Video bio-logging、吲哚的对接结果显示,吲哚3号位置碳原子与血红素铁中心的距离均为最近距离,分别为6.98?、6.20?和6.84?,易于反应进行,与推测的反应机理一致。P450BM3对吲哚氯代衍生物的羟基化反应的测试。分别优化不同吲哚氯代物的最适反应条件,测定野生型P450BM3及10种突变体催化吲哚衍生物羟基化反应的效率。结果表明,野生型P450BM3不能催化吲哚氯代物的羟基化反应;F87A突变体催化4-氯吲哚羟基化的转化率最高,达到63%;F87G突变体催化5-氯吲哚羟基化的转化率最高,达到84%;F87G、V78A/F87A突变体催化6-氯吲哚羟基化的转化率最高,均达到98%;V78A/F87G突变体催化7-氯吲哚羟基化的转化率最高,达到67%。

维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,A.veronii)是广泛存在于水生环境中的一种致病性病原菌,隶属气单胞菌属,它可导致包含人在内的哺乳动物患脑膜炎、败血症等疾病,导致水生生物产生鱼鳍腐烂等症状。相关报道表明,A.veronii的毒力不断增强,由该细菌产生的病症案例越发频繁,研究A.veronii的毒力相关基因至关重要,以便对该细菌更好的探索与防治。Fur基因作为铁摄取调节蛋白,在细菌中起关键主导作用。当细菌自身缺rifampin-mediated haemolysis铁时释放铁离子,体内铁含量过高时抑制铁离子,维持机体内铁环境的稳态。Fur还能作为全局调控因子,不仅可以调节铁相关表达,还可以调控与铁无关的通路。前期课题组对于A.veronii强毒、弱毒、无毒三类菌株的基因组学分析,发现相较于其他弱毒株来说,A.veronii TH0426作为强毒株,铁摄取调节蛋白其独有的,推测其作为毒力因子,对于A.veronii的毒性起决定性作用。本试验为了探究A.veronii Fur基因的功能与致病能力的影响,构建了重组自杀性质粒p PE112-UDFur,通过同源重组成功构建Fur基因的缺失株ΔFur;在此基础上,利用广宿主表达质粒成功构建回补株C-Fur。比较分析所构建成功的缺失株ΔFur与回补株C-Fur与野生株A.veronii的生物学特性;试验结果发现:Fur缺失后,ΔFur生长能力略低于野生株,对抗生素的耐药性未发生显著变化;通过透射电镜观察,发现鞭毛断裂,游动能力显著降低;Hydrotropic Agents抑制剂扫描电镜观察到部分菌体形态不一,生物被膜交联结构变得松散,且结晶紫染色分析结果支持生物被膜显著降低结果;缺失株ΔFur对鲤鱼上皮瘤(Epithelioma papillosum cyprinid,EPC)细胞的黏附侵袭能力显著下降,细胞毒性也有所减弱,在斑马鱼攻毒试验中ΔFur的致病力下降了2.3倍。为了探究Fur基因的调控机制,以野生株作为对照组,对ΔFur进行转录组测序分析,共筛选出差异基因2242个,其中上调基因993个,下调基因1249个。KEGG富集分析发现,Fur基因缺失后,主要影响细菌趋化性、鞭毛组装、双组份系统以及细菌分泌系统等相关通路,其表达量差异显著;并且生物学特性分析所产生的现象与转录组结果相吻合。本研究成功构建了A.veronii Fur基因缺失株ΔFur和回补株C-Fur,并将其和野生株进行比较,Fur基因缺失后,发现其对EPC细胞的毒性、黏附与侵袭能力、细菌自身的运动性、生物被膜的形成以及致病性均显著降低。说明Fur基因作为A.veronii的全局调控因子,发挥着重要的作用,并对Adavosertib分子式A.veronii致病机制的探索具有一定的推动作用,以期为防治A.veronii及其疫苗的研发提供理论依据。

研究背景与目的蜱传脑炎(Tick-borne encephalitis,TBE)是蜱传脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus,TBEV)感染引起的中枢神经系统疾病。据世界卫生组织报告,全球每年约12000例TBEV感染病例。TBE主要流行于欧洲、俄罗斯和中国的东北、西北地区。尽管有预防TBE的疫苗,但许多地区疫苗覆盖率不足,TBE发病率正逐步上升。此外,由于气候变化,蜱虫活动范围的扩张及人们旅行活动的增加等因素影响,TBE呈高发病趋势。目前针对TBEV感染尚无特异性的抗病毒治疗药物。因此,急需开发有效的抗TBEV药物。千金藤素(Cepharanthine,Cep)是双苄基异喹啉生物碱成员,具有抗炎、抗氧化、抗寄生虫、抗病毒等多种生物活性。自1950年以来,Cep用于治疗多种疾病,如白细胞减少症、脱发、毒蛇咬伤等。研究表明,Cep抑制核因子NF-κB激活、细胞因子的产生和环氧合酶的表达对病毒的复制和炎症反应起重要作用。利巴韦林(Ribavirin)是一种人工合成的核苷类似物,具有广谱的抗病毒活性,如寨卡病毒、黄热病毒、登革病毒、丙型肝炎病毒等。据报道,利巴韦林还可促进产生一种黏病毒抗性蛋白A(Myxovirus resistance protein A,Mx A)。Mx A是一个约70 KDa的抗病毒蛋白,具有广谱的抗病毒活性。此外,研究报道TBEV可感染多种动物,如金黄色地鼠、昆明小鼠、C57BL/6小鼠和BALB/c小鼠等。抗病毒药物需在动物模型上进一步验证抗病毒效果,因此建立一个合适的动物感染模型是评估抗病毒药物体内作用效果的重要基础。本课题利用美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准的药物库初步筛选抗TBEV药物。在细胞水平上验证筛选出的千金藤素、利巴韦林的抗TBEV作用。在TBEV感染的R428BALB/c小鼠体内初步评估千金藤素的抗TBEV效果。本课题旨在为治疗TBE提供潜在的候选药物。研究方法与结果在TBEV感染人肝癌细胞Huh-7中,对FDA药物库中的2580种药物进行高通量筛选,通过免疫荧光检测初步筛选出209种抗TBEV活性的药物。结合药物现有的研究及FDA药物库中的作用描述,选择其中的13种药物在TBEV感染的人肺癌细胞A549中再次验证抗TBEV作用,免疫荧光检测表明仅有千金藤素、利巴韦林、嘌呤霉素盐酸盐、硝唑尼特4种药物对TBEV具有抑制作用。利用MTS法检测4种药物对A549细胞、人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和非洲绿猴肾细胞Vero的细胞毒性,研究表明4种药物的细胞毒性具有细胞型别依赖性。千金藤素、利巴韦林对A549细胞的细胞毒性较弱,而嘌呤霉素盐酸盐、硝唑尼特对A549的细胞毒性较强。千金藤素通过共处理、预处理、后处理三种方式处理TBEV感染的A549细胞和SH-SY5Y细胞,通过观察细胞病变效应(Cytopathic effectprimary sanitary medical care,CPE)发现千金藤素以共处理、预处理方式对TBEV感染的两种细胞具有明显的保护作用。空斑实验显示,与TBEV感染的细胞相比,千金藤素通过共处理、预处理方式显著降低TBEV感染两种细胞后上清中的病毒滴度(P<0.05),呈浓度梯度依赖性降低。实时荧光定量PCR(Quantitative real time-PCR,q RT-PCR)检测显示,与TBEV感染的细胞相比,千金藤素通过共处理、预处理方式显著降低TBEV感染两种细胞内的TBEV RNA水平(P<0.05),呈浓度梯度依赖性降低。与未感染病毒的细胞相比,TBEV感染细胞后C/EBP同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)m RNA的表达显著升高(P<0.05)。与TBEV感染的细胞相比,千金藤素通过共处理、预处理方式显著抑制TBEV感染A549细胞内CHOP m RNA的表达(P<0.05),呈浓度梯度依赖性降低;通过共处理方式显著抑制TBEV感染SH-SY5Y细胞内CHOP m RNA的表达(P<0.05),呈浓度梯度依赖性降低。通过酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)显示,与未感染病毒的细胞相比,TBEV感染细胞后肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素11(Interleukin 11,IL-11)、白细胞介素1β(Interleukin 1β,IL-1β)的表达升高(P<0.05)。与TBEV感染的细胞相比,千金藤素通过共处理、预处理方式显著降低TBEV感染A549细胞后TNF-α、IL-11、IL-1β的产生(P<0.05);显著降低TBEV感染SH-SY5Y细www.selleck.cn/products/dorsomorphin-2hcl胞后IL-11的产生(P<0.05)。利巴韦林通过共处理、预处理、后处理三种方式处理TBEV感染的A549细胞和SH-SY5Y细胞,通过观察CPE发现利巴韦林以共处理、后处理方式对TBEV感染的两种细胞具有明显的保护作用。空斑实验显示,与TBEV感染的细胞相比,利巴韦林通过共处理、后处理方式显著降低TBEV感染两种细胞后上清中的病毒滴度(P<0.05),呈浓度梯度依赖性降低。q RT-PCR检测显示,与TBEV感染的细胞相比,利巴韦林通过共处理、后处理方式显著降低TBEV感染两种细胞内的TBEV RNA水平(P<0.05),呈浓度梯度依赖性降低。与未感染病毒的细胞相比,TBEV感染A549细胞内抗病毒蛋白Mx A m RNA表达升高(P<0.05)。与TBEV感染的细胞相比,利巴韦林通过共处理、后处理方式显著提高TBEV感染A549细胞内抗病毒蛋白Mx A m RNA的表达(P<0.05),呈浓度梯度依赖性升高。ELISA实验显示,与TBEV感染的细胞相比,利巴韦林仅通过后处理方式显著降低TBEV感染A549细胞后TNF-α的产生(P<0.05)。为评估药物在体内的抗TBEV作用,本研究首先通过皮下注射和腹腔注射途径建立TBEV感染BALB/c小鼠模型。通过感染症状、生存率、体重、空斑实验、免疫组织化学、苏木素-伊红染色、相关炎症因子的m RNA表达水平等分析TBEV感染小鼠后的各项指标。TBEV通过两种途径感染小鼠后均出现明显的感染症状,如弓背、后肢瘫痪等。TBEV通过皮下注射途径感染BALB/c小鼠,10~3PFU/只(Plaque forming unit,PFU)和10~4PFU/只的攻毒剂量均不能完全致死,小鼠存活率分别为40%、20%;通过腹腔注射途径,两个攻毒剂量均完全致死。TBEV通过两种攻毒途径感染小鼠后,在脑、脾、肾组织中均可检测到TBEV抗原,并引起脑组织的病理改变。TBEV通过皮下注射途径感染小鼠后,空斑实验显示小鼠感染后第5天脾内可检测到TBEV,感染后第7天脑、肾中可检测到TBEV,三种组织中的病毒滴度呈TBEV感染时间依赖性升高。q RT-PCR检测显示,TBEV通过两种途径感染小鼠后,脑、脾、肾组织中TNF-α、干扰素βm RNA的表达水平随TBEV感染时间呈动态变化。结果表明TBEV通过皮下注射和腹腔注射途径均在小鼠体内成功建立感染。在TBEV感染的BALB/c小鼠体内初步评估千金藤素对TBEV感染小鼠的保护作用。与TBEV感染组小鼠相比,提前给药组小鼠存活率达66.7%,并显著抑制脑、脾、肾中TBEV抗原表达,减轻脑组织的病理损伤。研究表明千金藤素通过提前给药方式对TBEV感染的小鼠具有明显的保护作用。综上所述,本研究在细胞水平上证实了千金藤素、利巴韦林具有抗TBEV作用。在动物水平上初步表明千金藤素通过提前给药方式对TBEV感染的BALB/c小鼠具有明显的保护作用。在今后的研究中将加强药物的作用机理研究,为治疗TBE提供潜在的候选药物。

背景目前,肺炎是全球第四大死因,每年大约造成240万人死亡。重症肺炎的形势更加严峻,住院患者死亡率甚至高达50%,此外我们对重症肺炎Disseminated infection高死亡率的原因也了解甚少。2017年的一篇荟萃分析显示糖皮质激素的治疗可以降低成年重症社区获得性肺炎患者的死亡率,但同时也可能造成各种各样的副作用。此外,哪些患者、何时使用激素等免疫抑制剂以及免疫抑制剂的具体作用机制仍不明确。加之,近年来药物抵抗和Gefitinib使用方法新型冠状病毒肺炎的流行也使得肺炎的形势更加复杂。因此,我们需要进一步地探索肺炎的新机制以及新疗法。分析一种疾病的转录物组能让我们了解疾病的特殊基因表达模式,增加对已知致病机制的理解或发现新的致病机制,同时也有利于我们探索新的治疗方法。除此之外,应用中药治疗也是一种很有前景的治疗手段。目前,已有研究表明中药对于重症肺炎具有一定的治疗效果。但鉴于中药的机制复杂我们仍需要更深入的研究,同时也可结合中药和疾病共同进行研究,以期实现中药的精准治疗。方法我们分别从差异基因、差异长链非编码RNA(Longnoncoding RNA,lncRNA)的靶向基因、发生转录通读(Transcriptional read-through,TRT)基因对的下游基因三个方面分析了 56例重症社区获得性肺炎患者外周血白细胞的转录物组数据,并计算了 NETosis相关基因的表达量与患者氧合指数的相关性,以期望发现潜在的治疗靶点。在中药方面,对于245味中药饮片汤剂中的小RNA,我们分别预测了其与患者的上调信使RNA(messenger RNA,mRNA)、上调lncRNA的结合。结果我们发现NETosis通路在多个分析方面的通路富集结果中均位居前列。在NETosis相关基因中H4C15、H3-5的表达量与氧合Enasidenib说明书指数呈显著负相关,而DNASE1、PRKCB的表达量和氧合指数呈显著正相关。此外,基于中药小RNA的预测结果显示所有的上调mRNA和上调lncRNA都能被245味中药中某些小RNA所靶向,且有20味中药的小RNA能靶向超过一半的mRNA。结论首先,我们发现NEToiss是多种病原体感染的重症社区获得性肺炎的共同通路,并且H4C15、H3-5、DNASE1、PRKCB是其潜在的治疗靶点。其次,对于中药小RNA的研究加深了我们对中药治疗机制的了解并提供了一种更精准的中药治疗方法。

目的 探讨髓磷脂蛋白零样蛋白1(MPZL1)沉默后是否通过调控β-catenin表达对A549/Tax耐药性和细胞干性产生影响。方法 采用不同浓度阿霉素和紫杉醇处理A549和A549紫杉醇耐药性(A549/Tax)细胞，观察两种细胞的耐药性差异。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western blot检测A549和A549/Tax细胞中MPZL1的表达量差异。对A549/Tax细胞沉默或者过表达MPZL1,进一步将细胞分为对照(control)组、短发卡RNA阴性对照(sh-NC)组、MPZL1沉默(sh-MPZL1)组、过表达阴性对照(OE-NC)组、MPZL1过表达(OE-MPZL1)组,运用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和平板克隆实验分别检测MPZL1的表达变化对Aselleck产品549/Tax细胞增殖和克隆形购买IDN-6556成能力的影响。Western blot检测Wnt/β-catenin抑制剂XAV939和激活剂CHIR-99201处理细胞后，不同蛋白的表达变化。结果 A549/Tax细胞对阿霉素和紫杉醇的半数抑制浓度(IC_(50))较A549细胞明显增加(P<0.01)。MPZL1在A549/Tax中呈更高的表达趋势。MPZL1敲除后A549/Tax对阿霉素和紫杉醇的IC_(50)分别为2.731 mg/ml和4.939μg/ml,较阴性对照组的4.541 mg/ml和13.55μg/ml降低(P<0.01)。CCK-8和克隆形成实验结果显示，MPZL1敲除抑制肺癌A549/Tax细胞的增殖活力和克隆形成能力(P<0.05);Western blot结果显示，与阴性对照组相比，MPZL1、肿瘤干性相关蛋白(CD44和CD133)、多药耐药蛋白1(MDR1)、肺耐药相关蛋白(LRP)和β-catenin在sh-MPZL1中的表达水平明显减少(P<0.01)。此外，XAV939可抑制MPZL1、CD44、CD133、MDR1、LRP和β-catenin的表PDCD4 (programmed cell death4)达。CHIR-99201处理细胞后部分逆转敲除MPZL1对上述蛋白的抑制作用。结论 MPZL1在肺癌A549/Tax细胞中高表达。敲除MPZL1可抑制肿瘤干性和细胞增殖，增强肺癌A549/Tax细胞对阿霉素和紫杉醇的敏感性。