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采用网络药理学结合体内、外实验验证的方法探讨黄芪甲苷（astragaloside IV，AST IV）配伍三七总皂苷（PaImmunohistochemistry Kitsnax notoginseng saponins，PNS）调控血管生成治疗脑缺血的作用机制。运用网络药理学预测AST IV和PNS通过介导血管生成治疗脑缺血的可能机制。体内实验：SD大鼠随机分为假手术组、模型组、AST IV（10 mg·kg~(-1)）+PNS（25 mg·kg~(-1)）组，大脑中动脉栓塞模型(middle cerebral artery occlusion，MCAO)法建立脑缺血模型。AST IV及PNS灌胃给药，每天2次。采用Longa法测定神经功能缺损症状；苏木素-伊红（HE）染色观察脑组织病理损伤；免疫组化测定血友病因子（von Willebrand factor，vWF）的表达；免疫荧光测定血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A，VEGFA)的表达；蛋白质印迹法检测脑组织血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2)、VEGFA、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase，p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B，p-AKT）蛋白的表达。体外实验：原代培养并鉴定脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells，BMECs），取第3代rBMECs，设置对照组、模型组、AST IV+PNS（50 μmol·L~(-1)＋30 μmol·L~(-1)）组、LY294002（PI3K/AKT信号通路抑制剂）组、740Y-P组（PI3K/AKT信号通路激动剂）、AST IV+PNS+LY294002组及AST IV+PNS+740Y-P组，氧糖剥夺/复氧（oxygeVX-445生产商n glucose deprivation/re-oxygenation，OGD/R）建立缺血再灌注损伤模型。CCK-8检测rBEMCs细胞存活情况，划痕实验检测rBEMCs的迁移能力；人工基底膜(matrigel)检测rBEMCs的成管数；内皮细胞渗漏实验检测内皮细胞渗透率；蛋白质印迹分析检测rBEMCs细胞中VEGFR2、VEGFA、p-PI3K、p-AKT蛋白的表达。网络药理学分析结果显示，AST IV及PNS可调节脑梗死血管生成的21个靶点，包括VEGFA、AKT1等，在这21个靶点中，大部分涉及PI3K/AKT信号通路。体内实验发现，与模型组比较，AST IV+PNS配伍使用能降低脑缺血后神经功能缺损评分（P＜0.05）及脑组织细胞损伤率（P＜0.05），增加vWF蛋白及VEGFA蛋白的表达（P＜0.01），促进血管新生，且显著升高PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平（P＜0.05，P＜0.01）。体外实验发现，与模型组比较，AST IV+PNS、740Y-P、ASTIV+PNS+LY294002及AST IV+PNS+740Y-P均能增加OGD/R后rBEMCs的存活率，增强rBEMCs的迁移率，增加rBEMCs的成管数，增强PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平，降低内皮细胞渗透率（P＜0.05，P＜0.01）；与LY294002组比较，ASTIV+PNS+LY294002组rBEMCs的存活率、迁移率、成管数及PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平显著增加，内皮细胞渗透率显著减少（P＜0.01）；与ASTIV+PNS组和740Y-P组比较，ASTIV+PNS+740Y-P组rBEMCs的存活率、迁移率、成管数及PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平显著增加，内皮细胞渗NSC 127716试剂透率显著降低（P＜0.01）。该研究表明，AST IV和PNS在脑缺血后能促进血管生成，机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。

目的 构建5个PAH基因无义突变位点慢病毒载体并转染细胞，比较3种不同类型药物PTC124、Amlexanox和G418对PAH基因无义突变的通读效率。方法 选择5个突变频率较高的人PAH基因无义突变位点(R111X、Y166X、R176X、W326X、Y356X)构建慢病毒载体，与野生型慢病毒载体(6个载体均带有Flag标签DDDDK)分别转染HEK293细胞。取野生型(WT)及5种突变型细胞，采用不加药物(0μmol/L)、PTC124(50、100μmol/L)、Amlexanox(250、500μmol/L)、G418(1、2、5 g/L)分别处理48 h,采用CCK-8实验检测72 h细胞增殖率，采用实时荧光定量PCR法检测DDDDK mRNA相对表达量，采用Western blot法检测PAH、DDDDK蛋白相对表达量。结果 (1)WT细胞经5 g/L G418处理72 h后细胞增殖率低于0μmol/L(P<0.05),其余药物及浓度处理后细胞增殖率均不受影响；5种突变型细胞经50、100μmol/L PTC124处理72 h后细胞增殖率均不受影响；W326X、Y356X突变型细胞经500μmol/L Amlexanox处理72 h后细胞增殖率低于0μmol/L(P<0.05),其余突变型细胞经2Optical biosensor50、500μmol/L Amlexanox处理后细胞增殖率不受影响；R111X、Y166X突变型细胞经5 g/L G418处理72 h后细胞增殖率低于0μmol/L(P<0.05),1、2 g/L G418处理后细胞增殖率不受影响，R176X、W326X和Y356X经1、2、5 g/L G418处理72 h后细胞增殖率均低于0μmol/L(P<0.05)。(2)WT细胞经50、100μmol/L PTC124和250、500μmol/L Amleanox处理后DDDDK mRNA及PAH、DDDDK蛋白相对表达量均高于0μmol/L(P<0.05),5 g/L G418处理后均低于0μmol/L(P<0.05),1、2 g/L G418处理后与0μmol/L比较差异均无统计学意义(P>0.05)。5种突变型细胞经250、500μmol/L Amleanox和5 g/L G418处理后DDDDK mRNA相对表达量均高于0μmol/L(P<0.05),经50、100μmol/L PTC124处理后DDDDK mRNA相对表达量与0μmol/L比较差异均无统计学意义(P>0.05);5种突变型细胞不加药物(0μmol/L)处理后DDDDK mRNA相对表达量均低于WT细胞(P<0.05)。5种突变型细胞经不加药物(0μmol/L)、50、100μmol/L PTC124和250、500μmol/L Amleanox处理后几乎不表达PAH、DDDDK蛋白；RCH-223191111X、R176X、Y166X、Y356X突变型细胞经5 g/L G418处理后PAH、DDDDK蛋白相对表达量均高于0μmol/L(P<0.05),W326X突变型细胞经1、2、5 g/L G418处理后PAH、DDDDK蛋白相对表达量均高于0μmol/L(P<0.05),1、2 g/L G418均高于5 g/L G418(P<0.05),1 g/L G418与2 g/L G418比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Amlexanox和G418可提高PAH基因5种无义突变R111X、Y166X、R176X、W326X、Y356X转录水平，其中G418可使5种无义突变表达完整PAH蛋白；G418矫正W326X无义突变的有效浓度更多为1 g/L,而矫正其余4种无义突变的有效浓度为5 g/L。

B族链球菌(Group B streptococcus,GBS),属于一种条件致病菌,广泛定植在胃肠道和泌尿生殖道中。B族链球菌感染常发生于孕妇和新生儿当中,是新生儿脑膜炎和败血症的首要病原体,严重威胁孕妇和新生儿的健康。乳糖三糖糖苷脂(Globotriaosylceramide,Gb3)是一种中性鞘糖脂,存在于细胞膜的胞外小叶中,参与生物的胚胎发育、凋亡、细胞粘附、细胞间协调、细胞分化、信号转导和癌症发生。与此同时,Gb3在对宿主细胞的粘附过程中也发挥着重要作用。作为细胞表面分子,它能够与多种细菌组分结合,例如志贺毒素,猪链球菌Fhb等,在许多细菌感染过程中都发挥重要的作用。但是,Gb3在B族链球菌感染过程中是否也发挥着一定的作用,以及如何发挥作用仍然是未知的。为了探究以上问题,我们首先利用Gb3合成酶缺失小鼠(A4galt~(-/-))通过尾静脉注射构建小鼠感染模型。通过评价小鼠血和各脏器中细菌载量以及小鼠生存情况,揭示Gb3在B族链球菌感染中发挥的作用。结果发现,Gb3缺失后能够延缓B族链球菌的感染,在感染早期对小鼠有一定的保护作用。但是随着感染时间的延长,细菌在体内增殖,这种保护逐渐减弱消失。然后,为了探究与Gb3相互作用的细菌配体,利用磁珠偶联Gb3与蛋白体外结合,通过质谱鉴定得到细菌表面蛋白Rib是与Gb3相互作ABT-263 MW用的潜在配体。随后构建了Rib蛋白缺失菌株(BJCH＿SA4Δrib)来研究Rib蛋白在细菌感染中发挥的作用。我们用突变菌株和野生型菌株分别感染小鼠,在不E-616452研究购买同时间点评价小鼠血中细菌载量,感染后48h各脏器中细菌载量。感染突变型菌株的小鼠5h后血中细菌载量相较于感染野生型菌株的小鼠有着显著的降低,感染48h后,肾脏和脑中的细菌载量也明显低于感染野生型菌株的小鼠。在小鼠生存实验中,感染突变型菌株小鼠的存活率也明显高于感染野生型小鼠。将两种菌株混合后感Repeat fine-needle aspiration biopsy染小鼠,通过血和脏器中细菌载量的统计发现,野生型菌株占比显著高于突变型菌株。这说明Rib蛋白作为B族链球菌重要的毒力因子之一,在B族链球菌感染中发挥重要作用,可以帮助GBS逃避天然免疫的清除。然后我们利用人脑微血管内皮细胞(h CMEC/D3)评价了两种菌株粘附力的变化。实验结果显示,Rib基因缺失后,细菌对细胞的粘附能力有明显的下降,Rib蛋白可能在感染过程中起着粘附细胞的作用。综上所述,Gb3在B族链球菌感染中发挥一定的作用,Gb3缺失后能够延缓细菌感染进程。B族链球菌细胞表面蛋白Rib是与Gb3相互作用的细菌配体,作为细菌毒力的组成部分,参与细菌粘附过程,在细菌感染过程中起着促进作用。

目的:本研究通过临床观察维奈克拉(Ven)治疗的急性髓系白血病(AML)患者,明确不同遗传学背景对Ven治疗AML患者的疗效影响;确定BCL-2家族蛋白MCL-1、Bcl-2、BFL-1在Ven治疗敏感和耐药的AML患者细胞中异常表达情况;通过检测耐药和敏感的白血病患者细胞中的铁死亡抑制蛋白GPX4、血清铁蛋白和铁离子,判定铁死亡在Ven治疗的AML患者中的激活状态;探讨铁死亡通路能否成为克制维奈克拉治疗髓系白血病耐药的潜在机制提供基础理论支持。方法:1)AML患者在Ven治疗两个疗程后评估Ven疗效,并在初治状态和治疗两个疗程后采集AML患者骨髓血标本,并提取单个白血病细胞并通过流式细胞仪分选标记为CD117、CD33、CD13、MPO的白血病细胞,采用WB蛋白印迹法测定Ven治疗前后的白血病细胞Bcl-2、MCL-1和BFL-1蛋白的表达水平。2)采用WB、酶联免疫法和比色法,检测初治和Ven治疗后AML患者的白血病细胞中铁死亡抑制蛋白GPX4以及激活条件因子血清铁蛋白(SF)、Fe~2+水平,并通过对Ven各治疗组AML患者的细胞GPX4蛋白、血清铁蛋白和铁离子的含量分析,推测在Ven治疗各组中铁死亡的状态。结果:1)各遗传学风险分层中,Ven治疗的中低风险组患者的平均PFS为21.5个月较高危风险组患者平均PFS为17.7个月有明显生存优势(P<0.05)。Ven治疗Ven治疗敏感组AML患者PFS平均为24月较Ven治疗耐药组AML患者平均PFS为14.2个月有明显生存优势(P<0.05)。2)在遗传学各风险组中,Ven治疗后AML患者的白血病细胞MCL-1、BFL-1蛋白含量均高于初治状态AML患者的白血病细胞中的MCL-1、BFL-1蛋白含量(P<0.05);而Ven治疗后AML患者的白血病细胞中Bcl-2蛋白含量则低于初治状态AML患者的白血病细胞Bcl-2蛋白含量(P<0.05)。高危组与中低危组BCL-2家族亚蛋白均无显著性差异(P>0.05)。3)Ven治疗敏感与耐药AML患者的白血病细胞组的AML患者的白血病细胞中MCL-1、BFL-1蛋白含selleck NMR量均高于初始状态AML患者的白血病细胞中的BFL-1、MCL-1蛋白含量(P<0.05)。且Ven治疗后AML患者的白血病细胞中的Bcl-2蛋白含量则低于初始状态AML患者的白血病细胞中的含量(P<0.05)。同时Ven耐药组AML患者的白血病细胞中的MCL-1蛋白含量高于敏感组AML患者的白血病细胞中MCL-1蛋白含量(P<0.05)。但BFL-1和Bcl-2蛋白在Ven治疗敏感与耐药组中无统计学意义。4)在遗传学各风险组中,Ven治疗的AML患者血清中的铁蛋白、铁离子含量均高于初始状态AML患者血清中selleckchem Baf-A1铁蛋白、铁离子含量(P<0.05)。但GPX4蛋白在Ven治疗后的AML患者的白血病细胞中降低,且在Ven治疗敏感与耐药组的AML患者细胞及血清中GPX4、铁蛋白、铁离子含量均高于初治状态白血病细胞中的GPX4、铁蛋白、铁离子含量(P<0.05);同时耐药组AML患者血清及细胞中铁蛋白、GPX4蛋白含量均高于敏感组AML患者血清中铁蛋白、GPX4蛋白含量(P<0.05);但敏感组AML患者血清铁离子含量高于耐药组AML患者血清铁离子含量(P<0.05)。结论:1)Ven治疗后的遗传学中低危组的AML患者有明显生存优势。2)遗传学背景在Ven治疗的AML患者中不干扰BCL-2家族蛋白表达;3)在Ven治疗后白血病细胞中,无论耐药或敏感组中Bcl-2蛋白均持续低表达状态,而MCL-1蛋白表达水平较初治状态增高vaccine-associated autoimmune disease;且在耐药组中表达显著高于敏感组,故MCL-1蛋白可能在Ven治疗后的AML耐药产生中发挥作用。4)Ven耐药组AML患者中GPX4与铁蛋白高表达、铁离子含量低,而Ven治疗敏组的白血患者中GPX4、铁蛋白低表达、铁离子高表达,这提示耐药白血病中,高表达MCL-1同时,铁死亡活动抑制;而相对低表达MCL-1的敏感组患者铁死亡则呈活跃状态。

恶性肿瘤患者在接受化疗、放疗、靶向治疗及免疫治疗等抗肿瘤治疗时都可能引发恶心呕吐。化疗所致恶心呕吐（chemotherapy-induced nausea and vomiting,CINV）是最为常见也是目前研究最为深入的不良反应；放疗所致恶心呕吐（radiation-induced nausea and vomiting,RINV）、靶向治疗及免疫治疗所致恶心呕吐（targeted therapy and immunotherapyinduced nausea and vomiting,TIINV）也越来越受到关注。本专家组在《化vocal biomarkers疗所致恶心呕吐全程管理上海专家共识（2018年版）》的基础上，根据近年来抗肿瘤治疗所致恶心呕吐（antineoplastselleck合成ic-induced nausea and vomiting,AINV）领域的循证医学新证据，结合上海一线肿瘤治疗专家的实际临床经验，最终形成《抗肿瘤治疗所致恶心呕吐全程管理上海专家共识（2024年版）》，以便进一步在上海地区积极、合理、规范、全程Barasertib地预防和处理AINV，保障患者的治疗强度和医疗安全。

目的：探讨循证理念指导下的CICARE沟通模式对青光眼合并白内障患者围术期的临床护理效果。方法：选择2021年1月1日～2022年12月31R428日华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科收治的行白内障超声乳化术+房角分离术治疗的青光眼合并白内障患者106例，采用随机数字表法分为对照组53例(60眼)和观察组53例(63眼);对照组采用围术期常规护理+CICARE沟通模式，观察组采用围术期常规护理+循证理念指导Q-VD-Oph下的CICARE沟通模式。比较两组汉密顿焦虑量表(HAMA)、汉密顿抑郁量表(HAMD)评分，眼压、前房深度、视力水平及中文版低视力者生活质量量表(CLVQOL)评分。结果：干预后，两组HAMA、HAMD评分均低于干预前(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);干预后，两组眼压水平均逐渐改善(P<0.05),且观察组优于对照组(P<0.05);干预后，两组前房深度、视力水平及CLVQOL评分均高于干预前(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05)。结论：采取循证理念指导下的CICARE沟通模式可提高青光眼合并白内障患者围术期护理效果，降低眼压，Recurrent ENT infections改善视力。

木薯是世界重要的粮食作物、能源作物和工业原料。木薯绵粉蚧genitourinary medicine（Phenacoccus manihoti Matile-Ferrero）是一种世界危险性检疫性害虫，培育和利用抗虫木薯品种可以有效阻断其定殖为害。挖掘具有抗虫作用的次生代谢物质及其调控基因是开展抗虫育种的重要策略之一。而类黄酮是植物抵御生物与非生物胁迫的特有次生代谢物质，但类黄酮及其合成通路基因在木薯抗木薯绵粉蚧中的功能尚不清楚。据此，本研究分析了抗虫木薯品种（C1115、SC9、缅甸）和感虫木薯品种（KU50、SC205、面包）被木薯绵粉蚧为害不同时间（0、1、4、8d）后，叶片中类黄酮合成通路相关基因（CHSMicrotubule Associat抑制剂、CHI、FLS、LAR、寻找更多DFR、F3H、CCoAOMT、C4H、C3’H、ANR）表达量以及类黄酮含量的变化情况。结果表明：木薯绵粉蚧取食后，叶组织中CCoAOMT、C3’H、ANR、C4H虽然上调表达，但与为害前相比并无显著差异，且抗、感木薯品种间的表达量也无显著差异；与之相对，CHS、CHI、FLS、F3H、DFR、LAR基因表达量均比为害前显著提高，并且在相同的为害时间内，这6个基因在抗虫木薯品种中的表达量也显著高于感虫木薯品种。进一步通过相关性分析发现，CHS、CHI、FLS、F3H、LAR基因的表达量与木薯品种的抗虫性呈显著正相关。此外，总黄酮含量测定结果表明：木薯绵粉蚧为害1 d时总黄酮含量与为害前相比均显著上升，为害4 d后抗虫木薯品种总黄酮含量显著高于感虫木薯品种。相关性分析显示，总黄酮含量也与木薯品种的抗虫性呈显著正相关。因此推测，类黄酮含量的上升及其调控基因CHS、CHI、FLS、F3H、LAR在抗虫木薯品种中的显著上调表达与其对木薯绵粉蚧的抗性有关。本研究为深入解析类黄酮合成基因调控木薯对木薯绵粉蚧的抗虫防御反应分子机制，以及木薯抗虫分子设计育种提供重要的前期基础。

目的:1.研究白背飞虱中β-1,3-葡聚糖识别蛋白(βGRPs)的分子结构特点及在不同发育阶段和不同组织中的发育表达模式;2.研究βGRPs对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的免疫应答作用,为揭示βGRPs在白背飞虱先天免疫中的作用奠定基础。方法:利用在线数据库及相关软件对βGRP1及βGRP2进行序列特征及进化关系分析;使用qRT-PCR方法明确白背飞虱中βGRP1及βGRP2基因的时空表达模式及被不同细菌诱导后的转录表达水平的变化;通过SDS-PAGE和Western Blot分析纯化后的βGRP1与βGRP2蛋白;用荧光显微镜检测βGRP1与βGRP2对E.coli及S.aureus的凝集作用;通过平板生长抑制法和CCK-8法明确βGRP1与βGRP2对E.coli和S.aureus生长的抑制作用;通过RNAi技术抑制βGRP1与βGRP2基因的表达,Preclinical pathologyqRT-PCR检测Toll通路及Imd通路基因的表达。结果:1.通过对白背飞虱转录组的比对分析,筛选获得2个βGRP基因,βGRP1和βGRP2。其中,βGRP1蛋白在靠近C端212-557 aa之间存在一个糖苷水解酶结构域(Glyco＿hydrolase＿16,selleck PF-02341066GH16),在第345-556 aa之间存在凝集素/葡聚糖酶结构域。βGRP2蛋白在靠近C端234-541 aa之间存在一个糖苷水解酶结构域GH16,在第318-539 aa之间存在凝集素/葡聚糖酶结构域。Inter Pro GO项分析表明,βGRP1及βGRP2具有水解酶活性,可以参与糖类的结合和水解;2.进化树结果显示,这两个βGRPs与同科目的褐飞虱的亲缘关系最近;3.βGRP1和βGRP2基因在白背飞虱的所有发育阶段和组织中都有表达。其中,βGRP1在若虫的第3天到5龄第2天表达量逐渐增加,然后开始下降,成虫期又逐渐增加。βGRP2在若虫的第2天更为丰富,然后从5龄第2天到成虫的第1天逐渐减少;另外,βGRP1在脂肪体中的表达量最高,其次是肠,而βGRP2在肠中的表达量最高,其次是脂肪Q-VD-Oph细胞培养体;4.肠和脂肪体中βGRP1及βGRP2基因在E.coli和S.aureus诱导后的表达均出现不同程度的增加;5.成功表达并纯化了βGRP1与βGRP2重组蛋白,且重组蛋白βGRP1与βGRP2对E.coli和S.aureus具有很强的凝聚力,能够与两种细菌发生凝集;6.平板生长抑制法和CCK-8法实验均显示出重组蛋白βGRP1与βGRP2对S.aureus的生长具有明显的抑制作用,而对E.coli的生长则没有明显影响;7.利用注射RNAi技术下调βGRP1与βGRP2的基因表达,再用S.aureus感染后可显著下调Toll通路的Toll和Dorsal基因的表达,但对Imd通路的Imd和Relish基因的表达没有明显影响。结论:βGRP1及βGRP2蛋白均具有水解酶活性,可以参与糖类的结合和水解且可能主要参与白背飞虱脂肪体和肠中病原菌感染的免疫应答;βGRP1及βGRP2虽然能与S.aureus和E.coli都发生凝集,但只能抑制S.aureus的正常生长,并且抑制作用主要通过对Toll信号通路的激活实现。

研究背景及目的:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是以脂质蓄积和炎症细胞浸润为主要特征的慢性炎症性过程,是冠心病、心肌梗死、脑卒中等众多心脑血管急性事件的病理基础。AS发病机制复杂,与多种因素密切相关,多项研究已证实血管内皮细胞衰老是AS发生发展的初始变化和重要环节。铁死亡是一种铁依赖的新型细胞死亡方式,参与了血管平滑肌细胞、内皮细胞等多种细胞的衰老,在AS进展中发挥了重要作用。白藜芦醇(Resveratrol,Res)是一种植物多酚化物,可以通过改善氧化应激、缓解炎症反应、改善线粒体功能等机制延缓细胞衰老,发挥抗AS作用,但对血管内皮细胞铁死亡的影响至今尚未见报道。因此,本研究旨在探讨Res是否可以通过拮抗血管内皮细胞铁死亡进而延缓细胞衰老,从而对AS发挥保护作用。研究方法:1、构建内皮细胞衰老模型:通过血管紧张素IIselleck激酶抑制剂(Angiotensin II human,AngⅡ)处理人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)48 h建立HUVECs细胞衰老模型,CCK-8法检测HUVECs细胞活力,筛选AngⅡ的最佳处理浓度;β-半乳糖苷酶染色检测HUVECs细胞衰老;流式细胞术检测细胞周期;免疫印迹法(Western Blot,WB)检测细胞衰老相关蛋白P53、P16和P21的水平变化。2、在AngⅡ诱导的衰老HUVECs中进行铁死亡相关检测:根据处理方式,将细胞分为对照组(正常培养基)、AngⅡ组(10-5 mol/L AngⅡ)、AngⅡ+Fer-1组(10-5 mol/L AngⅡ+10μmol/L铁死亡抑制剂Fer-1)、Fer-1组(1genetic distinctiveness0μmol/L Fer-1)。利用谷胱甘肽(Glutathione,GSH)和丙二醛(Malonaldehyde,MDA)检测试剂盒检测细胞内GSH和MDA水平,DCFH-DA和C11-BODIPY581/591荧光探针法检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和脂质ROS水平,WB检测铁死亡相关蛋白铁蛋白重链(Ferritin heavy chain1,FTH1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)和溶质载体家族7成员11(Solute carrier protein 7 family member 11,SLC7A11)的水平变化;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老的情况;WB检测细胞中P53、P21和P16衰老相关蛋白表达的变化。3、检测Res对衰老HUVECs中铁死亡的影响及机制。在HUVECs中分别加入5、10、20μmol/L Res进行干预,CCK-8法检测HUVECs细胞活力,筛选Res的最佳药物浓度;根据处理方式,将细胞分为对照组(正常培养基)、AngⅡ组(10-5 mol/L AngⅡ)、Res组(10-5 mol/L AngⅡ+20μmol/L Res)、Erastin组(10-5 mol/L AngⅡ+20μmol/L Res+30μmol/L SLC7A11抑制剂Erastin)、RSL3组(10-5 mol/L AngⅡ+20μmol/L Res+3μmol/L GPX4抑制剂RSL3)。CCK-8法检测各组HUVECs细胞活力变化,GSH和MDA检测试剂盒检测细胞内GSH和MDA水平,DCFH-DA和C11-BODIPY581/591探针法检测HUVECs细胞内ROS和脂质LiraglutideROS水平和WB检测铁死亡相关蛋白FTH1、GPX4和SLC7A11水平的变化;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老,WB检测细胞衰老相关蛋白P53、P21和P16水平的变化。研究结果:1、AngⅡ诱导内皮细胞衰老模型:根据CCK-8实验结果,本研究选择10-5mol/L AngⅡ浓度作为诱导细胞衰老的最佳造模浓度。HUVECs经AngⅡ处理后,β-半乳糖苷酶阳性着色细胞增多;流式细胞术检测结果显示,细胞发生周期阻滞,G0/G1期细胞增多;WB结果显示,衰老相关蛋白P53、P21和P16蛋白表达升高。2、衰老HUVECs中铁死亡相关检测结果:与对照组相比,AngⅡ组HUVECs中,MDA、ROS和脂质ROS水平升高,GSH水平降低;抗铁死亡因子FTH1、GPX4和SLC7A11蛋白表达水平下降。与AngⅡ组相比,AngⅡ+Fer-1组中细胞增殖活力增强,MDA、ROS和脂质ROS水平降低、GSH水平升高,抗铁死亡因子FTH1、GPX4和SLC7A11蛋白表达水平增高;β-半乳糖苷酶阳性染色细胞数目下降,细胞衰老相关蛋白P53、P21和P16表达水平降低。3、Res对衰老HUVECs中铁死亡的影响及机制:与AngⅡ组相比,Res组中HUVECs细胞活力增强,MDA、ROS和脂质ROS水平降低,GSH水平升高,细胞中抗铁死亡因子FTH1、GPX4和SLC7A11蛋白表达水平升高,β-半乳糖苷酶阳性染色细胞数目下降,细胞衰老相关蛋白P53、P21和P16蛋白表达水平降低。而与Res组相比,Erastin组、RSL3组均减弱了Res对AngⅡ诱导的HUVECs衰老及铁死亡的抑制作用。结论:铁死亡参与AngⅡ诱导的HUVECs细胞衰老,抑制铁死亡可减轻AngⅡ诱导的HUVECs衰老;Res可通过SLC7A11/GPX4通路抑制铁死亡从而延缓AngⅡ诱导的HUVECs衰老。

目的 探究高分辨率超声（HRUS）与数字化彩色超声在胆囊腺肌增生症中的诊断效能。方法 选取2018年https://www.selleck.cn/products/ferrostatin-1.html9月至2021年8月天津市三潭医院收治的70例疑似胆囊腺肌增生症患者为研究对象，均接受HRUS、数字化超声检查及联合检查，以病理Intra-familial infection诊断结果为金标准，比较HRUS、数字化超声检查及联合检查在胆囊腺肌增生症中的诊断效能。结果 病理诊断结果显示，70例疑似胆囊腺肌增生症患者中阳性43例，阴性27例；HRUS检查结果显示，70例疑似胆囊腺肌增生症患者中阳性38例，阴性32例；数字化彩色超声检查结果显示，70例疑似胆囊腺肌增生症患者中阳性37例，阴性33例；联合检查结果显示，Gefitinib价格70例疑似胆囊腺肌增生症患者中阳性43例，阴性27例。以病理结果为金标准，联合检查诊断胆囊腺肌增生症的灵敏度、准确度均高于HRUS、数字化超声检查，漏诊率低于HRUS、数字化超声检查，差异有统计学意义（P <0.05）。HRUS、数字化彩色超声检查及联合检查诊断胆囊腺肌增生症的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.730、0.712、0.856(P <0.05)。结论 HRUS、数字化超声联合检查能够提升诊断胆囊腺肌增生症的灵敏度和准确度，降低漏诊率，建议临床选择联合检查对胆囊腺肌增生症实施评估诊断。