Author: admin

目的 探讨低分子肝素钙在脊柱创伤患者椎弓根螺钉内固定术后的应用效果。方法 选取2019年3月至2021年3月铁岭市中心医院收治的84例脊柱创伤患者作为研究对象,按照随机数表法将其随机分为JNJ-42756493浓度观察组(42例)和对照组(42例),对照组患者于椎弓根螺钉内固定术后予以常规治疗,观察组患者于椎弓根螺钉内固定术后在常规治疗的基础上予以低分子肝素钙注射,对比观察两组患者血液流变学指标、凝血功能指标与血清炎症因子水平以及不良反应发生情况。结果 术后3d,观察组患者全血高切黏度、中切黏度、低切黏度均明显低于对照组(t=23.136、26.260、39.423,P均<0.001),活化部分凝血活酶时间(APTT)明显长于对照组(t=2.715,P=0.008),凝血酶原时间(PT)明显短于对照组(t=5.471,P<0.001),血清白细胞介素(IL)-6、IL-10、C反应蛋白(CRP)水平均明显低于对照组(t=16.557、4.465、20.663,P均<0.001);治疗期间,观察组患者深静脉血栓形成发生率明显低于对照组(χ~2=4.487,P=0.034),而出血倾向发生率无明显差biological targets异(χ~2=Alisertib分子式1.383,P=0.240)。结论 脊柱创伤患者椎弓根螺钉内固定术后应用低分子肝素钙,可有效降低血液黏度,改善血液高凝状态,抑制炎症反应,预防深静脉血栓形成,且安全性较高。

目的：探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)/膜铁转运蛋白1(FPN1)介导的铁稳态通路在有氧运动预防小鼠肝胰岛素抵抗中的调控作用。方法：40只5周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠，随机分安静对照组（NC组）、跑台运动组（NE组）、安静高脂组（HC组）、高脂+跑台运动组（HE组），每组10只。NC和NE组每日基础饲料喂养（AIN-93G）,HC和HE组喂养60%kcal SPF级高脂模型饲料，均自由进食。NC组和HC组不运动，NE和HE组进行跑台运动，5 d/w,60 min/d，坡度为0，第1～2周速度为13 m/min，每两周速度递增1 m/min，第13～14周速度为19 m/min。14周干预结束后测小鼠体脂含量，血糖及口服葡萄糖耐量试验。麻醉灌流后取材，肝切片进行HE染色，观察脂肪样变。ELISA检测血清铁蛋白（SF）、胰岛素（INS）、肝线粒体8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、4-羟基壬烯醛（4-HNE）。比色法测定肝糖原、甘油三酯（TG）、非血红素铁、血清铁（SI）含量。采用免疫共沉淀法（Co-IP）检测Nrf2与Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)结合量。Western blot检测肝FPN1、肝铁调素（hepcidin）、胰岛素受体（IR）、葡萄糖转运蛋白2 (GLUT2)、铁蛋白重链（FTH1）、铜蓝蛋白（CP）、细胞核Nrf2的表达量。结果：(1)运动可降低小鼠肝胰岛素抵抗（P<0.01），高脂显著增加胰岛素抵抗（P<0.01），有氧运动和高脂膳食对小鼠肝胰岛素抵抗的影响具有交互作用（P<0.01）。(2)运动可降低小鼠血清铁蛋Emricasan细胞培养白和肝铁含量（P<0.01），有氧运动和高脂膳食对血清铁蛋白（SF）、肝铁含量的影响具有交互作用（P<0.01）。(3)运动可降低小鼠肝线粒体8-OHdG和4-HNE(P<0.01)，高脂增加8-OHdG和4-HNE(P<0.01)，高脂和运动对8-OHdG和4-HNE的影响具有交互作用（P<0.01）。(4)运动增加肝Helicobacter hepaticusFPN1、CP、IR、FTH1、GLUT2表达量（P<0.01），降低Nrf2/Keap1结合量（P<0.01），运动和高脂对FPN1、IR、Nrf2/Keap1结合量的影响具有交互作用（P<0.01）。结论：14周高脂膳食诱发小鼠肝胰岛素抵抗，有氧运动明显改善肝胰岛素抵抗。运动通过增加细胞核内Nrf2，调控FTH1、FPN1表达，减少肝脏铁储存，减轻肝过氧化损伤和脂质沉积，增加胰岛素受体和葡萄糖转运载体，促进葡萄糖摄取和储存，缓解胰岛素抵抗。Nrf2/FPN1介导的铁稳态通路在运动改善由高脂引发的肝胰岛素抵selleck产品抗中发挥重要作用。

目的:通过生信信息学分析大样本数据寻找与骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)转移预后相关的自噬基因,并构建风险预后模型。探究小GTP酶SAR1A对骨肉瘤细胞的增殖能力和迁移侵袭能力的影响。进一步探究SAR1A与自噬的关系,以及其在骨肉瘤中影响转移内在机制。方法:1、从公共数据库获取了大样本骨肉瘤转移与未转移患者的测序数据集;2、通过WGCNA分析出与转移临床性状最相关的模块,并且进一步构建出风险预测模型。进一步筛选出研究的目标基因,并通过免疫组化检测SAR1A的表达差异。3、对基因SAR1A进行敲低和过表达,通过CCK-8、划痕实验、Transwell实验、Western Blfood-medicine plantsot检测EMT标志蛋白检测其对骨PCI-32765临床试验肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。4、Liraglutide核磁通过Western Blot和免疫荧光检测SAR1A对自噬的影响。5、通过Western Blot检测SAR1A影响的通路。结果:1、分析出了与转移最相关的两个模块2、建立了风险模型公式:0.3130MYC+(-0.5750)PEA15+0.2087SAR1A,对临床患者的生存预后具有重要的临床意义。3、SAR1A在转移患者组织中表达量增加,低表达SAR1A对抑制了骨肉瘤细胞系MG63的增殖、迁移和侵袭能力,而在骨肉瘤细胞系ZOS中高表达基因SAR1A后作用相反。4、SAR1A的过表达抑制了骨肉瘤的自噬的发生,并可以通过PI3K/AKT/GSK-3β途径促进肿瘤的转移。结论:我们建立了SAR1A相关的分析预后模型,具有重要的临床意义。在体外试验中,在体外试验中,在骨肉瘤肺转移患者中SAR1A表达量显著升高。而对SAR1A进行敲低后促进了自噬,抑制了骨肉瘤细胞的转移,而过表达作用相反。因此SAR1A有望成为骨肉瘤治疗的新的靶点。

目的 研究黄曲霉毒素B_1 (aflatoxin B_1, AFB_1)暴露对鸡蛋过敏原卵白蛋白(ovalbumin, OVA)激发人外周血嗜碱性白血病细胞(KU812)脱颗粒的影响,以阐明AFB_1暴露与食物过敏的相关性。方法 构建AFB_1暴露下OVA激发KU812细胞脱颗粒模型,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测AFB_1对其生物活性介质β-氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase,β-HEX)和组胺,以及细胞因子白细胞介素-4(interleukin-4, IL-4)、白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6)、白细胞介素-1β (interleukin-1β, IL-1β)释放量的影响;然后采用实时定量荧光聚合酶链反应法分析对IL-4和IL-6的mRNA表达水平的影响。结果 OVA刺激KU812细胞后会使其释放更多生物活性介质,包括β-HEX、组胺及细胞因子(IL-4、IL-6、IL-1β);当有AFB_1同时暴露,则会不同程度地加重这些生物活性介质的释放量。其中,AFB_1对β-HEXRP56976和组胺的释放量影响较小;但能够显著提高细胞因子IL-4、IL-6以及IL-1β的分此网站泌量(P<0.01),Medical dictionary construction尤其是对IL-1β的影响更显著,相较于对照组其分泌量提高84%。同时IL-4和IL-6的mRNA基因的表达水平也被提高。结论 OVA激发KU812会导致其脱颗粒并释放与食物过敏相关的一些活性介质和细胞因子。而AFB_1质量浓度为10000ng/mL的同时暴露,会提高这些相关活性介质和细胞因子的释放量,从而加重OVA所引发的食物过敏反应。

胰腺癌起病隐匿,病程进展快,治疗效果差,预后不良。2020年数据显示,胰腺癌病死率在恶性肿瘤中排名第四,是消化系统第二常见的恶性肿瘤;预计2030年,胰腺癌的病死率将跃居肿瘤死因第二位,仅次于肺癌。由于胰腺癌发病隐匿,早期诊断困难,大部分患者在诊断时即为局部进展期或晚期,可直接手术的患者不超过25%。胰腺癌发病率约为5.1/10万人,相对其他恶性肿瘤较低,开展大规模人群筛查的收益小,因此锁定胰腺癌的高危人群进行针对性的检查,可以提高阳性检出率,减少医疗资源浪费。罹患胰腺癌的危险因素可以分为:非遗传性因素,取决于生活方式和环境对于人体的影响;遗传性因素,与个体的遗传背景息息相关。一项10,389例散发肿瘤病例的胚系基因研究显示,近15%的胰腺癌患者携带致病性的胚系突变,超越乳腺癌,位居恶性肿瘤第三位。国际胰腺癌病例对照联盟(Pancreatic Cancer Case-Control Consortium,Pan C4)最新公布的数据显示,胰腺癌的遗传率可能是既往预测的两倍之多,达到21.2%。另一研究表明,近一半的胰腺癌高危人群携带肿瘤易感性基因胚系突变。由于致病性胚系突变在胰腺癌临床治疗和家系管理中具有重要CP-690550抑制剂意义,并且高通量测序为识别携带易感基因胚系突变的患者提供了更为简单且准确的检测方式,美国国家综合癌症网络(National Comprehensive Cancer Network,NCCN)最新临床指南提出,即使没有明显的家族史,所有新诊断的胰腺癌患者都应进行遗传综合征的风险评估,也需要考虑进行基因胚系突变检测。随着二代测序技术的发展及其在临床实践中的广泛应用,众多研究团队积累了大量的临床样本测序数据,为大规模人群的胚系研究奠定了坚实的基础。此外,各大学术联盟建立了大量的人群测序数据库,如基因组聚合数据库(Genome Aggregation Database,gnom AD)和千人基因组(1000 Genome,1000G)等,收集和整理了各种大规模的全外显子组测序(whole exome sequencing,WES)和全基因组测序(whole genome sequence,WGS)数据。不同于体细胞突变,胚系突变更具有种族异质性,现有研究和测序数据大多聚焦于欧洲人,并不能充分指示中国人群胚系突变特征。因此,建立大型的中国人群胰腺癌胚系突变研究队列,对研究中国人群胰腺癌胚系突变特征和胰腺癌遗传背景特征有重要意义。此外,胚系突变中还有大量的意义未明变异有待进一步探索,以明确其致病性,这对患者的疾病风险管理及对基因测序技术在临床的应用均有极为重要的意义。基于国内外胰腺癌胚系突变的研究现状,我们建立了2,944例中国健康人群对照队列和1,123例中国胰腺癌患者队列,首次从基因组学、转录组学、表观遗传学等多组学层次描绘了中国人群胰腺癌胚系突变全景图谱,将意义未明变异纳入研究,并首次鉴定到囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)在中国人群胰腺癌中的高频突变,明确了CFTR在胰腺癌中的表达特征,并结合临床数据分析了CFTR对胰腺癌预后的影响,最后通过体外实验验证了CFTR的抑癌基因功能,探索了CFTR意义未明变异对其功能的影响。第一部分中国人群胰腺癌胚系突变基因图谱绘制目的:改进和优化胚系突变检测、过滤和注释流程;描绘中国人群胰腺癌胚系突变全景图谱;鉴定突变基因的“二次打击”事件;分析有害胚系突变和临床病理的相关性;比较胰腺癌和其他癌种的胚系突变谱。方法:1.回顾性收集本中心数据库中符合入排标准的患者,另外建立前瞻性研究队列,根据患者基因测序数据类型将患者划分为发现队列,验证队列和功能验证队列。2.处理测序数据,根据GATK和Var Scan2标准流程检测突变,建立胚系突变的过滤和注释流程;利用Control Free C和GISTIC软件分析整合拷贝数变异数据;结合突变和拷贝数变异结果鉴定杂合性缺失事件。3.采用统计软件R(Version 4.1.0)进行统计学分析。计数资料的组间比较通过χ2或者Fisher’s精确检验计算,计量资料的组间比较通过t检验或两独立样本MannWhitney U秩和检验计算。双侧p<0.05为差异具有统计学意义。结果:1.建立了中国最大人群的胰腺癌胚系研究队列,共纳入1,123例胰腺癌患者及类器官样本和2,499例健康对照人群,包括发现队列(N=389,WGS数据108例,WES数据281例)、验证队列(N=665,PANEL数据)和功能验证队列(N=69,类器官样本,WGS数据),健康人群队列(N=2,944)。2.描绘了中国人群胰腺癌胚系突变图谱,发现了6条高频突变通路,其中CFTR是最高频突变的基因,并在26个抑癌基因中检测到35个杂合性缺失事件。3.通过分析发现携带有害胚系突变及CFTR胚系突变的患者更年轻(携带有害胚系突变患者年龄vs.未携带有害胚系突变患者年龄=60.00 vs.62.00,p=0.025,携带CFTR胚系突变患者年龄vs.未携带CFTR胚系突变患者年龄=56.00 vs.62.00,p=0.033),这些患者有更高比例的家族肿瘤史(携带有害胚系突变vs.未携带有害胚系突变=27.63%vs.15.69%,p=0.002,携带CFTR胚系突变vs.未携带CFTR胚系突变=42.42%vs.24.32%,p=0.019),和更高比例的个人肿瘤史(携带有害胚系突变vs.未携带有害胚系突变=10.53%vs.4.58%,p=0.015,携带CFTR胚系突变vs.未携带CFTR胚系突变=15.15%vs.5.83%,p=0.047),并且CFTR胚系突变患者中女性患者比例更高(57.58%vs.38.44%,p=0.027),CFTR胚系突变患者也更易罹患慢性胰腺炎(18.18%vs.2.98%,p<0.001)。4.比较胰腺癌和其他12种肿瘤中CFTR突变频率,发现CFTR在胰腺癌中突变频率最高,为3.9%,其次是宫颈癌和子宫内膜癌,分别为3.8%和3.6%,其余肿瘤突变频率均小于2%。结论:本研究首次发现了CFTR是胰腺癌高频的胚系突变基因,在胰腺癌中突变频率为3.9%,携带有害胚系突变及CFTR胚系突变的患者更年轻,有更高比例的家族肿瘤史和个人肿瘤史,且CFTR胚系突变中女性患者占比更高,且更易有慢性胰腺炎病史。上述发现为下一步研究确定了方向。第二部分CFTR的表达特征及其与胰腺癌预后的相关性分析目的:结合临床患者的病理、预后信息数据,分析CFTR在胰腺癌组织、癌旁组织的表达,阐明CFTR表达与胰腺癌预后的相关性,探索其可能的调控机制,以及启动子甲基化和胚系突变对CFTR表达的影响。方法:1.分析108例胰腺癌患者肿瘤/癌旁组织RNA测序数据得到CFTR的表达量,按照CFTR表达量中位数将患者分为高低两组,分析两组预后差异;为避免肿瘤纯度影响,利用类器官测序数据再次进行分析;并利用公共数据库中的大块组织测序和显微切割样本测序数据验证结果。2.免疫组化染色分析胰腺癌患者肿瘤/癌旁组织中CFTR的表达,并通过软件进行定量分析,根据CFTR表达量中位数将患者分为高低两组,分析两组预后差异。3.利用类器官和细胞系样本,通过甲基化特异性PCR和染色质开放性测序分析CFTR启动子甲基化和染色质开放性对其表达的影响。结果:1.通过比较肿瘤和癌旁组织的CFTR RNA表达量和免疫组化定量结果,发现CFTR在肿瘤组织中表达下调。2.比较肿瘤中不同CFTR RNA表达量和免疫组化定量的biopolymer extraction患者临床特征差异,发现CFTR高表达的患者有更好的预后[高表达vs.低表达,大块组织测序(总生存期):22.9(14.0-31.8)vs.15.9(11.1-20.7),p>0.05;类器官(无病生存期):13.8(9.5-29.0)vs.3.3(5.9-18.7),p<0.05;公共数据库大块组织测序(总生存期):23.3(3.6-43.0)vs.16.5(12.0-21.0),p>0.05;公共数据库显微切割样本(总生存期):21.9(13.6-30.2)vs.6.6(3.7-9.5),p<0.01],其结果在纯度更高的类器官和显微切割样本中更为明显。通过免疫组化定量分析也得到相同的结果[总生存期:高表达组vs.低表达组=27.7(22.9-32.5)vs.15.0(8.3-21.7),p<0.05]。3.甲基化特异性PCR和染色质开放性测序分析发现,CFTR低表达的类器官样本中,CFTR启动子区域呈现出高甲基化的状态,并且染色质开放性更低。4.通过比较CFTR野生型样本和突变型样本的RNA表达量和免疫组化定量数据发现,胚系突变可引起CFTR的表达下调。结论:本研究发现CFTR表达与胰腺癌患者的预后具有相关性,CFTR在胰腺癌中具有抑癌基因的特征,且CFTR表达受到表观遗传调控,其具体功能有待进一步研究。第三部分CFTR及其突变亚型的抑癌功能目的:通过体外实验明确CFTR在胰腺癌中的抑癌功能,并明确不同的突变亚型对其功能的影响。方法1.构建PANC03.27和SU86.86 CFTR敲减细胞株,ASPC1和PANC-1 CFTR过表达细胞株,并利用PANC-1细胞株构建9株CFTR突变过表达稳转株。2.通过q PCFG-4592配制R和WB实验鉴定转染结果。3.通过CCK-8实验、平板克隆形成实验评价胰腺癌细胞增殖活性;检测胰腺癌细胞的迁移/侵袭能力,利用流式细胞术分析胰腺癌细胞的凋亡和检测细胞周期。结果:1.成功构建和鉴定了CFTR敲减/过表达和9株突变过表达稳转株。2.CFTR过表达导致胰腺癌细胞系增殖、迁移/侵袭能力减弱,细胞凋亡增加,促使更多细胞停留在G0-G1期。CFTR敲减促进胰腺癌细胞系增殖。3.相较于CFTR过表达细胞株,9株突变CFTR细胞株对细胞增殖功能的抑制相对减弱。结论:CFTR在体外可抑制胰腺癌细胞的增殖活性,降低其迁移/侵袭能力,并促进细胞凋亡,发挥抑癌基因功能,CFTR特定位点突变导致其功能受损。

目的 观察醒脑开窍针刺联合化瘀祛痰汤对急性脑梗死痰瘀互结证患者血小板相关参数、认知功能及神经功能的影响。方法 选取无锡市中医医院2019年2月-2022年8月收治的100例急性脑梗死痰瘀互结证患者为研究对象，采用单双数标记法分为2组。对照组（n=48）予常规西药治疗，针药ABT-199分子量结合组（n=52）在对照组基础上予醒脑开窍针刺联合化瘀祛痰汤治疗。结果 与治疗前相比，2组Fugl-Meyer评分、日常生活能力（ADL）评分、Mo CA评分治疗后均升高，且针药结合组更高（P <0.05）。2组中医证候积分、NIHSS评分治疗后下降，且针药结合组更低acute oncology（P <0.05）。与治疗前相比，2组血小板分布宽度（PDW）、平均血小板体积（MPV）、大血小板比率（P-LCR）治疗后下降，且针药结合组更低（P <0.05）。针药结合组不良反应率为13.46%更多(7/52)与对照组的10.42%(5/48)比较，未见统计学差异（P> 0.05）。结论 醒脑开窍针刺联合化瘀祛痰汤治疗急性脑梗死痰瘀互结证可抗血小板聚集，改善神经功能，促进认知功能的恢复。

目的 通过网络药理学、模拟分子对接和细胞炎症模型的方法，研究巴蜀颗粒治疗气道炎症的作用靶点和机制.方法 通过TCMSP和GeneCard等数据库对巴蜀颗粒中药材成分和靶点，气道炎症相Belnacasan配制关靶点进行搜集；用富集分析对相关靶点进行生物生理过程分Emricasan体内析，通路分析；采用PyMOL软件将筛选出来的潜在活性成分与核心蛋白靶点进行分子对接.建立细菌脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞炎症模型，用Western-blot法检测巴蜀颗粒及不同活性成分对iNOS和p65等蛋白表达量的影响.结果 网络药理学结果显示巴蜀颗粒治疗气道炎症的药效成分有8个，作用靶点为9个；GO富集分析得到1368个生理过程；KEGG富集得到134条相关信号通路；蛋白分子模拟对接发现槲皮素、山奈酚和木犀草素等成分与AKT1、MAPKs的结合能最低，为最优结合位点.细胞实验结果显示巴蜀颗粒对比LPS刺激组可降低iNOS蛋白的表达量，明显抑制p65蛋白磷酸化.预测出的潜在活性成分也可以不同程度降低iNOS表达量.结论 巴蜀颗粒可能通过槲皮adoptive cancer immunotherapy素、山奈酚、木犀草素等成分调控iNOS、p65等蛋白对气道炎症发挥治疗作用.

采用网络药理学结合体内、外实验验证的方法探讨黄芪甲苷（astragaloside IV，AST IV）配伍三七总皂苷（PaImmunohistochemistry Kitsnax notoginseng saponins，PNS）调控血管生成治疗脑缺血的作用机制。运用网络药理学预测AST IV和PNS通过介导血管生成治疗脑缺血的可能机制。体内实验：SD大鼠随机分为假手术组、模型组、AST IV（10 mg·kg~(-1)）+PNS（25 mg·kg~(-1)）组，大脑中动脉栓塞模型(middle cerebral artery occlusion，MCAO)法建立脑缺血模型。AST IV及PNS灌胃给药，每天2次。采用Longa法测定神经功能缺损症状；苏木素-伊红（HE）染色观察脑组织病理损伤；免疫组化测定血友病因子（von Willebrand factor，vWF）的表达；免疫荧光测定血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A，VEGFA)的表达；蛋白质印迹法检测脑组织血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2)、VEGFA、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase，p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B，p-AKT）蛋白的表达。体外实验：原代培养并鉴定脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells，BMECs），取第3代rBMECs，设置对照组、模型组、AST IV+PNS（50 μmol·L~(-1)＋30 μmol·L~(-1)）组、LY294002（PI3K/AKT信号通路抑制剂）组、740Y-P组（PI3K/AKT信号通路激动剂）、AST IV+PNS+LY294002组及AST IV+PNS+740Y-P组，氧糖剥夺/复氧（oxygeVX-445生产商n glucose deprivation/re-oxygenation，OGD/R）建立缺血再灌注损伤模型。CCK-8检测rBEMCs细胞存活情况，划痕实验检测rBEMCs的迁移能力；人工基底膜(matrigel)检测rBEMCs的成管数；内皮细胞渗漏实验检测内皮细胞渗透率；蛋白质印迹分析检测rBEMCs细胞中VEGFR2、VEGFA、p-PI3K、p-AKT蛋白的表达。网络药理学分析结果显示，AST IV及PNS可调节脑梗死血管生成的21个靶点，包括VEGFA、AKT1等，在这21个靶点中，大部分涉及PI3K/AKT信号通路。体内实验发现，与模型组比较，AST IV+PNS配伍使用能降低脑缺血后神经功能缺损评分（P＜0.05）及脑组织细胞损伤率（P＜0.05），增加vWF蛋白及VEGFA蛋白的表达（P＜0.01），促进血管新生，且显著升高PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平（P＜0.05，P＜0.01）。体外实验发现，与模型组比较，AST IV+PNS、740Y-P、ASTIV+PNS+LY294002及AST IV+PNS+740Y-P均能增加OGD/R后rBEMCs的存活率，增强rBEMCs的迁移率，增加rBEMCs的成管数，增强PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平，降低内皮细胞渗透率（P＜0.05，P＜0.01）；与LY294002组比较，ASTIV+PNS+LY294002组rBEMCs的存活率、迁移率、成管数及PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平显著增加，内皮细胞渗透率显著减少（P＜0.01）；与ASTIV+PNS组和740Y-P组比较，ASTIV+PNS+740Y-P组rBEMCs的存活率、迁移率、成管数及PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平显著增加，内皮细胞渗NSC 127716试剂透率显著降低（P＜0.01）。该研究表明，AST IV和PNS在脑缺血后能促进血管生成，机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。

目的 构建5个PAH基因无义突变位点慢病毒载体并转染细胞，比较3种不同类型药物PTC124、Amlexanox和G418对PAH基因无义突变的通读效率。方法 选择5个突变频率较高的人PAH基因无义突变位点(R111X、Y166X、R176X、W326X、Y356X)构建慢病毒载体，与野生型慢病毒载体(6个载体均带有Flag标签DDDDK)分别转染HEK293细胞。取野生型(WT)及5种突变型细胞，采用不加药物(0μmol/L)、PTC124(50、100μmol/L)、Amlexanox(250、500μmol/L)、G418(1、2、5 g/L)分别处理48 h,采用CCK-8实验检测72 h细胞增殖率，采用实时荧光定量PCR法检测DDDDK mRNA相对表达量，采用Western blot法检测PAH、DDDDK蛋白相对表达量。结果 (1)WT细胞经5 g/L G418处理72 h后细胞增殖率低于0μmol/L(P<0.05),其余药物及浓度处理后细胞增殖率均不受影响；5种突变型细胞经50、100μmol/L PTC124处理72 h后细胞增殖率均不受影响；W326X、Y356X突变型细胞经500μmol/L Amlexanox处理72 h后细胞增殖率低于0μmol/L(P<0.05),其余突变型细胞经2Optical biosensor50、500μmol/L Amlexanox处理后细胞增殖率不受影响；R111X、Y166X突变型细胞经5 g/L G418处理72 h后细胞增殖率低于0μmol/L(P<0.05),1、2 g/L G418处理后细胞增殖率不受影响，R176X、W326X和Y356X经1、2、5 g/L G418处理72 h后细胞增殖率均低于0μmol/L(P<0.05)。(2)WT细胞经50、100μmol/L PTC124和250、500μmol/L Amleanox处理后DDDDK mRNA及PAH、DDDDK蛋白相对表达量均高于0μmol/L(P<0.05),5 g/L G418处理后均低于0μmol/L(P<0.05),1、2 g/L G418处理后与0μmol/L比较差异均无统计学意义(P>0.05)。5种突变型细胞经250、500μmol/L Amleanox和5 g/L G418处理后DDDDK mRNA相对表达量均高于0μmol/L(P<0.05),经50、100μmol/L PTC124处理后DDDDK mRNA相对表达量与0μmol/L比较差异均无统计学意义(P>0.05);5种突变型细胞不加药物(0μmol/L)处理后DDDDK mRNA相对表达量均低于WT细胞(P<0.05)。5种突变型细胞经不加药物(0μmol/L)、50、100μmol/L PTC124和250、500μmol/L Amleanox处理后几乎不表达PAH、DDDDK蛋白；RCH-223191111X、R176X、Y166X、Y356X突变型细胞经5 g/L G418处理后PAH、DDDDK蛋白相对表达量均高于0μmol/L(P<0.05),W326X突变型细胞经1、2、5 g/L G418处理后PAH、DDDDK蛋白相对表达量均高于0μmol/L(P<0.05),1、2 g/L G418均高于5 g/L G418(P<0.05),1 g/L G418与2 g/L G418比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Amlexanox和G418可提高PAH基因5种无义突变R111X、Y166X、R176X、W326X、Y356X转录水平，其中G418可使5种无义突变表达完整PAH蛋白；G418矫正W326X无义突变的有效浓度更多为1 g/L,而矫正其余4种无义突变的有效浓度为5 g/L。

B族链球菌(Group B streptococcus,GBS),属于一种条件致病菌,广泛定植在胃肠道和泌尿生殖道中。B族链球菌感染常发生于孕妇和新生儿当中,是新生儿脑膜炎和败血症的首要病原体,严重威胁孕妇和新生儿的健康。乳糖三糖糖苷脂(Globotriaosylceramide,Gb3)是一种中性鞘糖脂,存在于细胞膜的胞外小叶中,参与生物的胚胎发育、凋亡、细胞粘附、细胞间协调、细胞分化、信号转导和癌症发生。与此同时,Gb3在对宿主细胞的粘附过程中也发挥着重要作用。作为细胞表面分子,它能够与多种细菌组分结合,例如志贺毒素,猪链球菌Fhb等,在许多细菌感染过程中都发挥重要的作用。但是,Gb3在B族链球菌感染过程中是否也发挥着一定的作用,以及如何发挥作用仍然是未知的。为了探究以上问题,我们首先利用Gb3合成酶缺失小鼠(A4galt~(-/-))通过尾静脉注射构建小鼠感染模型。通过评价小鼠血和各脏器中细菌载量以及小鼠生存情况,揭示Gb3在B族链球菌感染中发挥的作用。结果发现,Gb3缺失后能够延缓B族链球菌的感染,在感染早期对小鼠有一定的保护作用。但是随着感染时间的延长,细菌在体内增殖,这种保护逐渐减弱消失。然后,为了探究与Gb3相互作用的细菌配体,利用磁珠偶联Gb3与蛋白体外结合,通过质谱鉴定得到细菌表面蛋白Rib是与Gb3相互作ABT-263 MW用的潜在配体。随后构建了Rib蛋白缺失菌株(BJCH＿SA4Δrib)来研究Rib蛋白在细菌感染中发挥的作用。我们用突变菌株和野生型菌株分别感染小鼠,在不E-616452研究购买同时间点评价小鼠血中细菌载量,感染后48h各脏器中细菌载量。感染突变型菌株的小鼠5h后血中细菌载量相较于感染野生型菌株的小鼠有着显著的降低,感染48h后,肾脏和脑中的细菌载量也明显低于感染野生型菌株的小鼠。在小鼠生存实验中,感染突变型菌株小鼠的存活率也明显高于感染野生型小鼠。将两种菌株混合后感Repeat fine-needle aspiration biopsy染小鼠,通过血和脏器中细菌载量的统计发现,野生型菌株占比显著高于突变型菌株。这说明Rib蛋白作为B族链球菌重要的毒力因子之一,在B族链球菌感染中发挥重要作用,可以帮助GBS逃避天然免疫的清除。然后我们利用人脑微血管内皮细胞(h CMEC/D3)评价了两种菌株粘附力的变化。实验结果显示,Rib基因缺失后,细菌对细胞的粘附能力有明显的下降,Rib蛋白可能在感染过程中起着粘附细胞的作用。综上所述,Gb3在B族链球菌感染中发挥一定的作用,Gb3缺失后能够延缓细菌感染进程。B族链球菌细胞表面蛋白Rib是与Gb3相互作用的细菌配体,作为细菌毒力的组成部分,参与细菌粘附过程,在细菌感染过程中起着促进作用。