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目的 探讨D-二聚体（D-D）、乳酸（Lac）和可溶性血小板内皮黏附分子-1(sPECAM-1)在预测脓毒症相关弥散性血管内凝血（DIC）预后中的价值。方法 收集2017年1月至2022年1月徐州医科大学附属医院ICU脓毒症相关DIC患者300例，按照预后情况分为死亡和存活两组。对比两组患者一般资料、APACHEⅡ评分、血清D-D、乳酸、sPECAM-1水平，采用Logistic回归分析筛选脓毒症相关DIC患者28 d死亡的危险因素，并采用受试者工作特征曲线（ROC）评价血清D-D、乳酸、sPECAM-1对脓毒症相关DIC患者预后不良的预测价值。结果 患者28 d病死率为22%，死亡组患者APACHEⅡ评分、血清D-RP56976 IC50D、Lac和s PECAM-1水平均高于存活组（P <0.05）；多因素logistic回归结果显示，血清D-D、乳酸、sPECAM-1是脓毒症相关DIC患者28 d死亡的危险因素；血清D-D、乳酸、sPECAM-1预测脓毒症相关DIC患者预后的ROC下AUC分别为0.863(95%CI:0.768～0.958)、0.831(95%CI:0.734～0.928)、0.774(95%CI:0.653～0.896)，三项指标联合预测的ROC下AUC是0.965(95%CI:0.928～1.000)，敏感度是0.864，特异度是0.974，较各指标单独预测高。结论 较高的血清D-D、乳酸、sPECAM-1水平与脓毒症相关DIC患者28 d死亡密切相关，血programmed necrosis清D-D、乳酸联合sPECAM-1对脓毒症相关DIC预后有较好的预测价值，可KD025临床试验用于指导临床治疗。

多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)是百合科黄精属的多年生草本植物,其根状茎为主要药用部位,是一种“药食同源”的大宗药材。多糖、黄酮和皂苷是根状茎中的主要成分之三,对人体有多种营养功效。光调节着植物形态发生、生理生化和代谢的各个方面,光照环境存在于整个植物的生长周期,并不断变化,光也是影响植物生长发育和代谢物质积累的重要的环境要素之一。本研究以多花黄精组培苗为材料,研究不同光照条件包括不同光周期、光强和光质对多花黄精组培苗植株和根状茎生长、以及对多花黄精根状茎主要代谢产物多糖、类黄酮和皂苷含量的影响,为多花黄精的离体快繁与工厂化生产奠定了基础。同时对多花黄精ACY1(PcACY1)基因成员进行鉴定与表达分析,并构建了多花黄精ACY1s过表达载体,对多花黄精根状茎进行瞬时转化。最后分析了PcACY1在不同光照条件处理下的表达情况。主要研究结论如下:1不同光照条件对多花黄精组培苗植株和根状茎生长的影响不同光周期处理多花黄精组培苗结果表明6h/18h光照时间相对来说是最适宜多花黄精的组培苗和根状茎生长的光照时长,测定的生长指标均随光照时间的增长呈现先上升后下降的趋势,在6 h/18 h或12 h/12h时表现出最大值,并且在6 h/18 h处理下的多花黄精根状茎增殖系数和增重系数均显著高于hereditary nemaline myopathy其他处理;不同光强处理多花黄精组培苗结果表明在光照强度为6000-8000 lx时显著促进多花黄精的组培苗增殖和根状茎的增重;不同光质处理多花黄精组培苗结果表明单一绿光对多花黄精组培苗生长及根状茎生长都具有较强的抑制作用,蓝光则显著抑制株高,但能够促进根状茎芽增殖,且有利于多花黄精组培苗叶片光合色素的积累,红光则促进多花黄精组培苗叶片的生长。2不同光照条件对多花黄精根状茎主要代谢产物的影响不同光周期处理中发现6h/18h光照时间可促进多糖含量快速积累,而18h/6h光照长光周期处理较为促进多花黄精根状茎类黄酮和皂苷含量的积累;不同光强处理结果显示,多糖、类黄酮和皂苷含量基本与光照强度呈正相关趋势,在6000-8000 lx高光强处理下含量表现出最高值;不同光质处理结果显示单一光质处理30 d以上会对多糖和皂苷含量积累有抑制效果,且随着时间的增长这种抑制效果会加深,但蓝光相较于CK可促进多花黄精根状茎类黄酮的积累。3多花黄精ACY1家族成员鉴定与表达分析通过生物信息学方法从多花黄精全长转录组中鉴定出2个PcACY1成员,并命名为PcACY1-1和PcACY1-2,它们的CDS区序列长度分别为1371 bp和1317 bp,2个成员等电点分别为5.35和5.42,表明其主要在弱酸性细胞环境中起作用,均为具有信号肽的亲水蛋白,无跨膜结构,同时从植物基因组数据库中筛选出32个物种的65个ACY1成员构建系统进化树,分析发现大部分植物物种的ACY1家族成员都是两个,表明这些物种中ACY1基因的数量相对恒定,植物ACY1进化具有较高的保守性,qPCR检测PcACY1基因在不同组织部位、盐胁迫以及高温胁迫下的表达情况发现,PcACY1-1在根状茎中的表达量较高,PcACY1-2在茎秆中的表达量最高,表明PcACY1成员表达具有组织特异性,PcACY1家族成员均受到盐胁迫和高温处理的诱导,表明多花黄精ACY1家族成员在抗逆和防御平衡方面起重要作用。4 PcACY1在不同光照条件处理的qPCR分析PcACY1家族成员在不同光照条件处理下表达情况存在差异,PcACY1-1的表达可能不响应光周期变化,而PcACY1-2的表达响应12 h/12 h光照时间处理,PcACY1-1的表达量在各个光强处理均下调表达,而PcACY1-2的表达量显著响应高光强6000-8000 lx处理而显著上调表达,PcACY1-1显著响应蓝光处理,而PcACY1-2的表达可能不受selleckchem AMG510单一光质如红蓝绿光的诱导。5多花黄精ACY1s过表达载体构建与瞬时转化成功构建 pCAMBIA1301-PcACY1-1和 pCAMBIA1301-PcACY1-2过表达载体并采用农杆菌介导法成功将过表达PcACY1-1和PcACY1-2瞬时转化进多花黄精组培苗根状茎中,并通过GUS组织化学染色法对瞬时转化条件进行比较,发现浸泡渗透法较注射器注射法操作简单,转化效率高,适于应用在多花黄精的转化体系中。此外通过实时荧光定量PCR分析多花黄精根状茎中PcACY1-1和PcACY1-2基因的表达量发现,瞬时转基因多花黄精根状茎中基因的表达量显著提高,且明显高于野生型,但在不同光质处理下表达量有所下降。综上可得,短光周期、高光强可促进多花黄精组培苗的获悉更多生长和根状茎代谢物的积累,而单一光质中蓝光抑制株高,促进根状茎增殖和类黄酮的积累,在多花黄精中鉴定获得2个ACY1成员,表达模式具有组织特异性,并在抗逆和防御平衡方面起重要作用,成功构建多花黄精ACY1s过表达载体也为其功能的进一步深入研究奠定了基础。

研究背景:糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是胰岛素分泌绝对或相对不足,并以高血糖、高血脂为特征的代谢紊乱综合征。炎症在许多代谢性疾病的进展中起着关键作用。糖尿病呈一种低度全身性炎症状态,表现为炎症因子产生异常和炎症信号通路的激活。糖尿病早期高血糖引起的炎性应激可导致交感神经兴奋,交感神经兴奋可加重炎性反应。外周神经节内,神经节神经元的胞体由卫星胶质细胞(Satellite glial cells,SGC)围绕包裹。神经元与卫星胶质细胞关系密切。嘌呤能信号参与神经元-胶质细胞双向通信。P2Y_(12)受体属于G蛋白偶联受体家族,P2Y_(12)受体内源性激动剂ADP、ATP可激活P2Y_(12)受体。P2Y_(12)受体涉及周围神经损伤及感觉功能异常。表达于卫星胶质细胞的P2Y_(12)受体参与神经病理痛的病理变化。在神经病理痛模型中,基因敲除P2Y_(12)受体或选择性P2Y_(12)受体拮抗剂可抑制炎性细胞因子的产生,缓解炎性病变和模型动物神经病理性痛行为。研究表明,交感神经去神经可明显改善胰岛素敏感性和糖代谢,交感神经活动可能和糖尿病及其并发症密切相关。腹腔神经节(celiac ganglion,CG)是椎前交感神经节,其神经节后纤维投射到肝脏,影响肝脏的功能。肝脏是人体的代谢中心,在调节糖原合成和脂质代谢等方面发挥重要的作用。交感神经兴奋可导致肝糖原合成减少,血糖水平升高。目前,研究人员还没有明确表明上调的P2Y_(12)受体是否影响腹腔交感神经节和肝脏并参与糖尿病的发病机制。糖尿病心脏自主神经病变(Diabetic cardiac autonomic neuropathy,DCAN)是2型糖尿病的常见并发症,主要指支配心脏和血管的自主神经纤维因慢性高血糖而受损和丢失的情况,可导致心血管异常和心血管危重症风险增加。颈胸交感星状神经节(stellate ganglion,SG)主要支配心脏,其神经纤维可分布至心神经丛影响心脏的活动。我们实验室的前期研究观察到星状神经节中的P2Y_(12)参与了糖尿病心脏自主神经病变的过程,但P2Y_(12)在糖尿病引起颈部交感神经节损伤诱发心交感神经病变的详细作用机理尚不清楚。CpG寡脱氧核苷酸(CpG ODN)是合成的短单链DNA分子,可激活TLR9受体,发挥强大的免疫刺激作用。CpG ODN已被证明具有心脏保护和细胞保护作用。但尚不知CpG ODN是否在DCAN中发挥保护作用,以及这种有益的保护是否涉及对P2Y_(12)介导的心脏交感神经损伤的调节。肾素-血管紧张素系统(Renin angiotensin systems,RAS)的功能失调在糖尿病慢性并发症的发生发展中发挥着重要作用。RAS是机体内重要的内分泌调节系统,由经典的血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)-血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)-血管紧张素Ⅱ受体1(Angiotensin type l receptor,AT1R)和非经典的血管紧张素转化酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)-血管紧张素1-7(Angiotensin 1-7,Ang 1-7)-Mas受体2条轴组成,具有调节电解质平衡、维持心血管稳态等生理功能。越来越多的研究表明,RAS不仅存在于体液系统,也存在于神经系epigenetic factors统中。自主神经系统中的血管紧张素能神经传递是许多常见心血管疾病治疗干预的潜在新靶点。现已确定,SG拥有自己的RAS。然而,在DCAN背景下,SGEPZ-6438 MW中RAS发挥怎样的调节的作用以及与嘌呤能P2Y_(12)受体是否存在相互作用尚不清楚。目的:1、探讨P2Y_(12)受体对2型糖尿病大鼠腹腔神经节交感系统调节肝脏代谢的作用,重点关注嘌呤能P2Y_(12)受体对肝葡萄糖激酶(Glucokinase,GK)功能的影响。2、通过实验研究CpG ODN 1826对SG中P2Y_(12)受体介导的心脏交感神经病理变化的作用及机理。3、观察心交感神经损伤过程中SG中AngⅡ/AT1R轴和ACE2/Ang1-7轴的变化,探讨RAS在心脏自主神经系统稳态调节中的作用,并观察短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)靶向P2Y_(12)对DCAN中RAS两条轴的影响。方法:1、通过高糖高脂喂养配合小剂量链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)注射构建2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,通过尾静脉注射P2Y_(12) shRNA/P2Y_(12)拮抗剂替格瑞洛。分别监测各组大鼠腹腔交感神经放电(Sympathetic nerve discharge,SND)活动;检测各组大鼠空腹血糖、胰岛素水平、肝糖原含量、血脂水平;实时定量荧光PCR(Quantitative Real-time PCR,q-PCR)和蛋白印迹(Western blotting,WB)法检测大鼠腹腔神经节和肝脏中P2Y_(12) mRNA和蛋白表达;q-PCR检测肝脏GK、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated spot-like protein,ASC)、半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)和白介素-1β(IL-1β)mRNA的表达;蛋白印迹检测各组大鼠肝脏GK、NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β蛋白表达变化以及NF-κB p65表达水平。2、建立2型糖尿病大鼠模型,通过selleck腹腔注射CpG ODN 1826。分别检测各组大鼠空腹血糖、胰岛素水平、血脂水平;测量大鼠血压(BP)、心率(HR)、心率变异性(HRV)和交感神经放电活动;q-PCR检测各组大鼠SG中P2Y_(12)、肿瘤坏死因子-α受体(TNF-α)、IL-1βmRNA的表达;蛋白印迹检测各组大鼠Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)、P2Y_(12)、TNF-α、IL-1β、核受体共激活剂4(Nuclear receptor coactivator 4,NCOA4)、谷胱甘肽过氧化酶4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达变化以及NF-κB p65磷酸化水平;试剂盒检测SG中ATP、组织铁、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、活性氧(Reactive oxygen species,ROS)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的水平;免疫荧光双标检测各组大鼠SG中TLR9受体与Neu N(神经元标志物)、P2Y_(12)受体与GFAP(卫星胶质细胞激活标志物)的共表达水平;分子对接模拟CpG ODN 1826与P2Y_(12)的结合;透射电子显微镜观察SG线粒体结构变化;培养PC12细胞,检测不同处理条件下细胞内cAMP水平。3、建立2型糖尿病大鼠模型,通过舌下静脉注射P2Y_(12)shRNA质粒。分别检测各组大鼠空腹血糖、胰岛素水平;测量大鼠血压(BP)、心率(HR)、心率变异性(HRV)和交感神经放电活动;q-PCR检测各组大鼠SG中P2Y_(12)、TNF-α、IL-1βmRNA的表达;蛋白印迹检测各组大鼠P2Y_(12)、TNF-α、IL-1β、AngⅡ、AT1R、ACE2、蛋白表达变化以及NF-κB p65磷酸化水平;试剂盒检测SG中AngⅡ、Ang1-7、ROS的水平;免疫荧光双标检测各组大鼠SG中AngⅡ受体与Neu N(神经元标志物)、P2Y_(12)受体与GFAP(卫星胶质细胞激活标志物)的共表达水平。结果:1、研究发现,2型糖尿病大鼠腹腔神经节和肝脏中P2Y_(12)受体的表达水平增加,同时出现腹腔交感神经放电的活性增强。此外,T2DM大鼠出现高血糖和血脂紊乱,肝葡萄糖激酶表达显著降低,同时肝糖原合成减少,而NLRP3、ASC、活性caspase-1、NF-κB和IL-1β水平升高。用靶向P2Y_(12)的shRNA处理后,腹腔神经节和肝脏中P2Y_(12)受体表达下调,但不影响正常大鼠P2Y_(12)的表达,血糖和血脂异常得到明显改善,肝脏NLRP3、ASC、活性caspase-1和IL-1β水平明显下降。P2Y_(12) shRNA和替格瑞洛都可以提高肝葡萄糖激酶表达,促进肝糖原合成,降低NF-κB表达水平。2、研究结果表明,T2DM大鼠P2Y_(12) mRNA和蛋白表达升高,荧光双标结果显示T2DM大鼠SG中P2Y_(12)和GFAP的共表达水平较高。分子对接结果显示CpG ODN 1826与P2Y_(12)有较高的亲和性。cAMP水平检测显示,CpG ODN1826处理显著拮抗了ADP对Forskolin刺激的PC12细胞内cAMP水平的抑制作用。CpG ODN 1826处理显著降低了T2DM大鼠P2Y_(12)表达以及在SG中与GFAP的共表达水平。CpG ODN 1826激活TLR9受体,改善了糖尿病大鼠血脂紊乱、异常的血压(BP)、心率(HR)、心率变异性(HRV)和交感神经放电(SND)活动,并降低SG中上调的磷酸化(p)-NF-κB、TNF-α和IL-1β表达,降低组织铁、ROS和MDA水平,升高了GPX4和GSH水平。此外,CpG ODN 1826有助于改善SG中线粒体结构的异常变化。3、研究结果表明,T2DM大鼠P2Y_(12)mRNA和蛋白表达升高,免疫荧光双标结果显示,P2Y_(12)和GFAP在T2DM大鼠星状神经节中高度共表达。P2Y_(12)shRNA处理显著降低了P2Y_(12)表达以及与GFAP的共表达水平。与对照大鼠比较,糖尿病大鼠血脂异常、血压(BP)和心率(HR)升高、心率变异性(HRV)降低、交感神经放电(SND)活动增加。此外,蛋白印迹结果显示T2DM大鼠AngⅡ、AT1R、TNF-α、IL-1β、p-NF-κB蛋白表达升高,ACE2蛋白表达下降,ELISA结果显示SG中AngⅡ水平升高,AngⅡ/Ang 1-7比值增加、ROS的水平上升。免疫荧光双标显示T2DM大鼠SG中AngⅡ受体与Neu N(神经元标志物)共表达水平升高。P2Y_(12) shRNA处理改善了T2DM大鼠异常的BP、HR、HRV和颈部SND活动,降低了Ang II/AT1R的过度激活,并增加ACE2/Ang 1-7的表达。此外,经P2Y_(12) shRNA处理,SG中TNF-α和IL-1β的表达水平、磷酸化NF-κB和ROS水平降低。结论:1、结果表明,shRNA对P2Y_(12)的沉默可以有效地改善腹腔SND的异常活性,并通过降低肝细胞炎症和抑制可能由于激活的NLRP3炎症小体和caspase-1信号而导致的肝细胞焦亡,来改善功能失调的肝葡萄糖激酶,从而降低T2DM大鼠的高血糖。2、总体而言,CpG ODN 1826通过激活TLR9受体降低P2Y_(12)相关的颈交感神经兴奋性和异常的神经元-胶质细胞信号传递,以实现心自主神经系统活动的平衡并缓解大鼠的DCAN。该机制可能涉及通过减少ATP释放和p-NF-κB表达来调节SG中P2Y_(12)受体表达与激活,从而减轻SG中上调的P2Y_(12)介导的交感神经炎症和铁死亡。3、P2Y_(12)介导的DCAN与SG中Ang II/AT1R和ACE2/Ang 1-7信号传导失调有关。P2Y_(12) shRNA处理减少了P2Y_(12)的过度表达,并改善了RAS中AngⅡ/AT1R和ACE2/Ang 1-7信号传导失衡,从而减轻了糖尿病大鼠心脏自主神经病变。

目的:探究苍耳子含药血清对免疫球蛋白E(IgE)致敏的肥大细胞脱颗粒的抑制作用和调控途径。方法:小鼠喂服苍耳子水溶液，制备含药血清；MTT法检测不同浓度苍耳子含药血清对肥大细胞活性的影响。controlled infectionIgE致敏肥大细胞，实验分为正常对照组、模型对照组、10%苍耳子含药血清组和富马酸酮替芬组。药物干预后，乳酸脱氢酶(LDH)法和甲苯胺蓝染色检测细胞毒性和脱颗粒率；ELIAMG510使用方法SA检测细胞炎症活性介质β氨基己糖苷酶A (β-hexosaminidase A)、白三烯C4(LTC4)和组胺(histamine)的释放情况；F-actin微丝染色观察细胞形态变化。结果:苍耳子含药血清对正常肥大细胞活性无明显影响(P>0.05)。与正常对照细胞相比，模型对照组细胞毒性和脱颗粒率增加，β氨基己糖苷酶A~、白三烯C4、组胺的释放显著增加，细胞变形数量显著增加(P<0.01)。与模型对照组相比，10%苍耳子含药血清和富马酸酮替芬组细胞毒性和脱颗粒率显著降低，β氨基己糖苷酶A、白三烯C4、组胺的释放显著下降，细胞变形数量显著减少(P<0.01)。结论:苍耳子含药血清可抑制肥确认细节大细胞变形、脱颗粒，并减少β氨基己糖苷酶A、白三烯C4、组胺的释放。

目的 探讨阿替普酶对急性脑梗死大鼠海马区脑组织闭合蛋白5(Claudin-5)及铁死亡的影响。方法 选择雄性SD大鼠36只，按照随机数字表法分为假手术组，脑梗死组，药物组，每组12只。采用大脑中动脉凝血酶栓塞法建立急性脑梗死模型。Longa评分评价大鼠神经功能，TTC染色观察脑梗死体积，比色法检测Fe~(2+)含量，免疫组织化学及Western blot检测Claudin-5及谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)及胱氨酸谷氨酸逆转运体轻链蛋白(xCT)表达。结果 脑梗死组Longa评分、脑梗死体积、脑组织FeAZD9291使用方法~(2+)含量、ClaLY2157299试剂udin-5表达较假手术组明显升高，GPX4及xCT表达较假手术组明显降低(P<0.01)。与脑梗死组比较，药物组Longa评分[(1.33±0.50)分vs(2.90±1.66)分，P<0.01]、脑梗medical management死体积[(32.09±11.78)%vs(41.38±7.45)%,P<0.01]、脑组织Fe~(2+)含量[(6.02±1.93)ng/L vs(9.10±1.97)ng/L,P<0.01]、Claudin-5阳性细胞数[(78.93±16.62)个vs(91.31±7.41)个，P<0.01]、Claudin-5蛋白(0.56±0.24 vs 0.81±0.21,P<0.01)表达明显降低，GPX4[(79.80±7.74)个vs(63.60±5.15)个，P<0.01]、xCT[(81.30±19.31)个vs(71.40±21.48)个，P<0.01]阳性细胞数及GPX4蛋白(0.47±0.23 vs 0.34±0.04,P<0.01)、xCT(0.64±0.10 vs 0.46±0.11,P<0.01)蛋白表达明显升高。结论 阿替普酶可减轻急性脑梗死大鼠脑组织铁死亡，减少脑梗死体积，改善神经功能，其机制可能与抑制Claudin-5蛋白有关。

目的 探讨乳腺良性肿瘤、恶性肿瘤与自身免疫性甲状腺疾病的关系。方法 回顾性选取2020年2月至2022年2月福建省立医院收治的107例乳腺良性肿瘤患者（良性肿瘤组）和107例乳腺癌患者（恶性肿瘤组）作为研Cytoskeletal Signaling抑制剂究对象，另选取同期107例进行体检的女性作为对照组。三组研究对象取空腹静脉血3 mL，离心取血清，采用COBAS 6000全自动电化学发光免疫分析仪行促甲状腺激素（thyroid stimulating hormone,TSH）、游离三碘甲状腺原氨酸（free triiodothyronine,FT3selleck产品）、游离甲状腺素（free thyInfected aneurysmroxine,FT4）、抗甲状腺球蛋白抗体（anti-thyroglobulin antibodies,TGAb）、抗甲状腺过氧化物酶抗体（antithyroid peroxidase autoantibody,TPOAb）检测，比较三组研究对象的甲状腺患病情况、甲状腺激素异常率。结果 三组研究对象甲亢、甲减、甲状腺炎、甲状腺癌及总患病率比较，恶性肿瘤组高于良性肿瘤组和对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。三组研究对象TSH、FT4异常率比较，恶性肿瘤组高于良性肿瘤组和对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 乳腺良性肿瘤、恶性肿瘤与自身免疫性甲状腺疾病具有一定相关性，乳腺恶性肿瘤患者更易发生自身免疫性甲状腺疾病。

目的 探讨黏蛋白13(Mucin13,MUC13)对人喉鳞癌细胞增殖、化疗药物5-氟尿嘧啶细胞毒性、周期、凋亡、迁移、侵袭能力等生物学行为的影响。方法 将MUC13-RNAi序列包装入慢病毒并转染人喉鳞癌细胞株TU177，特异性阻低MUC13的表达。利用CCK-8法、平板克隆实验、Transwell小室迁移实验和流式细胞术观察MUC13对人喉鳞癌细胞TU177的增殖、化疗药物5-氟尿嘧啶细胞毒性、周期、凋亡、迁移、侵袭能力的影响。结果 与空白对照组(Blank组)及阴性对照组(NC组)相比，MUC13-RNAi组TU177细胞CCK-8测试光密度(OD)值增大率随培养时间延长而下降，化疗药物5-氟尿嘧啶对MUC13-RNAi组TU177细胞毒性增强；MUC13-RNAi组较Blank组TU177细胞相对克隆形成率为54·1%(P<0·05)；迁移实验中，MUC13-RNAi组与Blank组相比TU177细胞相对迁移率为53·2%,MUC13-RNAi组与NC组相比TU177细胞相对迁移率为56·3%，差异均有统计学意义(P值均<0·05)；侵袭实验中，MUC13-RNAi组与Blank组相比喉癌细胞相对迁移率为65·9%,MUC13-RNAi组与Blank组相比喉癌细胞相对迁移率为69·2%，差异均有统计学意义(P值均<0·05)；同时MUC13-RNAi组TU1selleck产品77细胞发生G1期阻滞及早期凋亡倾向增加，表明MUC13-RNantibiotic-bacteriophage combinationAi组TU177细胞增殖能力下降。结论 特异性阻低MUC13在喉鳞癌细胞系TU177中的表达后，细胞的增殖能力下降、化疗药物5-氟尿嘧啶对细胞毒性增强、细胞迁移能力下降、细胞稍有G1阻滞并且凋亡倾向增加，这表明MUC13参与调控了喉鳞癌细胞的多种生物学行为，具有作为Alpelisib分子量喉鳞癌治疗靶标的潜力。

目的 调查分析基层医院房颤患者流行病学资料、抗凝治疗，实现房颤患者抗凝治疗率、房颤患者抗凝治疗有效率的提升提供可靠资料，从而促进房颤患者的规范化管理治疗。方法 收集2019年1月—2020年12月在冕宁县人民医院及昭觉县人民医院内科住院部住院患者，根据纳入标准和排除标准，收集房颤患者的年龄、性别、栓塞风险评分、出血风险评分、抗凝治疗情况以及合并疾病等基本信息，分析房颤患者的流行病学资料及抗凝治疗现状。结果 根据纳入、排除标准筛选后纳入359例房颤患者，平均年龄（70.5±12.3）岁，合并疾病前3位为冠心病（39.8%）、高血压（32antibiotic loaded.0%）、慢性肺病（17.5%）。所有房颤患者总体抗凝药物使用率为26.5%,11.9%房颤患者仅使用抗血小板药物治疗，仍有61.6%的房颤未给予抗凝或抗血小板治疗。抗凝患者中，93.7%的患者服用华法林抗凝治疗；风湿性心脏病房颤患者使用的抗凝药均为华法林。给予抗凝治疗组，年龄更小，合并更高比例的扩心病、风心病和心衰；而未Lorlatinib给予抗凝治疗组，非瓣膜病性心房颤动患者发生脑卒中危险（CHA2DS2-VASc）评分、心房颤动抗凝治疗出血风险（HASBLED）评分显著更高，合并高血压、冠心病、脑卒中比例均更高。年龄更大的患者虽然出血风险增加，但栓塞风险同样增加，而这部分患者很大程度上未得到合理抗凝治疗。当CHA2DS2-VASc评分为2～5分时抗凝占比较高，CHA2DS2-VASc评分为6分时，抗病比例显著下降。结论 本研究中基层医院房颤患者有效抗凝治疗率不足1/3，抗凝药物主要为华法林、非维生素K拮抗剂口服抗凝药（non-vitSB431542 IC50amin K antagonist oral antucoagulants,NOAC）使用率仅为6.3%；大部分房颤患者未得到合理规范的抗凝治疗。

目的：探讨丙泊酚缓解大鼠皮下注射氯喹所致瘙痒的可能机制。方法：建立SD大鼠氯喹瘙痒模型并确定给药时间；18只皮下注射氯喹所致瘙痒模型成功的大鼠随机分为NS组、I组、P组，分别于皮下注射氯喹5 min后经颈内静脉导管注入生理盐水80μL/kg、脂肪乳剂80μL/kg、丙泊酚0.8 mg/kg。另随机抽取6只大Etoposide鼠设为C组，于颈背部皮下和颈内静脉导管注射与其余3组同等体积生理盐水。在颈内静脉注射相应药物16min后处死，用Western blot检测脊髓中香草素受体亚型1(TRPV1)以及大麻素受体1(CB1)受体的表达情tetrapyrrole biosynthesis况。结果：与NS组和I组相比，P组大鼠脊髓中TRPV1受体表达含量明显升高，差异有统计学意义（P<0.01），而C组、NS组、I组之间差异无统计学意义；CB1受体表达水平高于C组、NS组及I组，差异有统计学意义（P<0.05），而C组、NS组、I组之间差异无统计学意义。结论：丙泊酚可明显缓解大鼠皮下注射氯喹所致瘙痒，其可能通过增加大鼠脊髓中Z-VAD-FMKTRPV1以及CB1受体表达发挥止痒作用。

研究背景:骨质疏松是一种以骨量降低和骨微环境破坏为主要特征的全身性骨代谢疾病。在骨质疏松症患病群体中,女性群体所占比例高达70%。由于绝经引发的雌激素水平的降低,是女性患骨质疏松症的主要因素。普遍认为规律运动能够改善骨重塑进程,提高机体的骨密度及骨量。破骨细胞主导的骨吸收是骨重塑进程的重要环节,对骨量的调控起到关键的作用。但是运动在调控破骨细胞介导的骨吸收进程中的具体机制,目前尚不清楚。研究发现G蛋白偶联受体81(G protein-coupled receptor 81,GPR81)在调控破骨细胞分化和功能中发挥重要作用,而且乳酸是GPR81的唯一内源性的配体。由此提出我们的研究假设:运动产生的乳酸,通过循环系统作用于破骨细胞膜上的受体GPR81,进而调控破骨细胞的功能和骨吸收进程,改善骨重塑,防治雌激素水平降低诱导的骨质疏松。研究目的:本研究构建Gpr81基因敲除小鼠模型和去卵巢手术(OVX)诱导骨量丢失小鼠模型,采用产生乳酸的HIIT(High-intensity Interval Training,HIIT)作为运动干预方案,通过体内组织和体外细胞实验,分析运动调控骨量丢失小鼠骨吸收进程的作用,并进一步揭示潜在的分子机制,为防治骨代谢相关疾病提供潜在的治疗靶点。研究方法:(1)实验分组:实验小鼠一共分为8组:WT+Sham(野生型+假手术)、WT+OVX(野生型+去卵巢手术)、WT+OVX+HIIT(野生型+去卵巢手术+高强度间歇运动)、WT+OVX+Lac(野生型+去卵巢手术+乳酸注射)、Gpr81-KO+Sham(基因敲除+假手术)、Gpr81-KO+OVX(基因敲除+去卵巢手术)、Gpr81-KO+OVX+HIIT(基因敲除+去卵巢手术+高强度间歇运动)、Gpr81-KO+OVX+Lac(基因敲除+去卵巢手术+乳酸注射);(2)Gpr81基因敲除小鼠模型:利用CRISPR/Cas9技术敲除Gpr81基因,获得Gpr81全敲小鼠模型(Gpr81-KO);(3)骨量丢失小鼠模型的构建:8周龄雌性小鼠进行双侧去卵巢手术,去卵巢第10周后检测小鼠骨密度降低了约50%,达到了降低20%的建模标准;(4)运动干预方式:每周5次,每次1小时的HIIT干预。每次运动干预10个循环,跑台速度为80%～90%最大速度的高强度运动,每次持续4分钟,中间进行2分钟速度为40%～50%最大速度的间歇运动;(5)外源性乳酸注射:根据运动干预的时间和频率,腹腔注射1g/kg的L-乳酸钠;(6)骨组织形态计量学指标:骨量、骨密度和骨小梁等指标,取小鼠新鲜股骨,用Micro-CT进行检测,取生长板下100帧用CTAnalysis软件进行分析;(7)破骨细胞分化功能实验:将骨髓源巨噬细胞(Bone marrow-derived macrophages,BMMs)以每孔1×10~4个接种于96孔板中,加入含有10%FBS的α-MEM培养基,同时分别加入终浓度10ng/ml和50ng/ml的M-CSF和RANKL将其诱导分化成破骨细胞,隔天换液,定向分化7天后,用TRAP染色分析破骨细胞分化功能;(8)蛋白提取和购买DS-3201WB:不同条件下处理后的破骨细胞使用PBS洗涤后注入RIPA溶解液,汇集细胞裂解液上清,并使用化学试剂盒进行蛋白质提取。在BCA法测定蛋白质浓度后,进行SDS-PAGE蛋白质电泳,之后经历转膜、封闭、洗膜、最后用ECL发光液使其在X-光胶片上曝光显示条带。研究结果:(1)与WT+Sham组相比,WT+OVX组小鼠体重显著增加(P<0.01);与WT+OVX小鼠相比,WT+OVX+Lac和WT+OVX+HIIT小鼠的体重均显著降低(P<0.01)。此外,WT+OVX+HIIT组和WT+OVX+Lac组小鼠的血乳酸水平显著高于WT+OVX小鼠(P<0.01)。(2)在野生型小鼠中,与WT+Sham组相比,WT+OVX组小鼠松质骨的BMD、BV/TV、TB.N和Tb.Th等指标显著降低(P<0.05)。与WT+OVX组相比,WT+OVX+HIIT组小鼠的松质骨的BMD、BV/TV和TB.N等指标显著升高(P<0.05)。此外,WT+Sham组、WT+OVX组、WT+OVX+Lac组和WT+OVX+HIIT组小鼠的皮质骨形态计量学指标无显著变化。(3)在基因敲除小鼠中,与Gpr81-KO+Sham组相比,Gpr81-KO+selleck合成OVX组小鼠的松质骨BMD、BV/TV和TB.N等指标显著降低(P<0.01)。与Gpr81-KO+OVX相比,Gpr81-KO+OVX+HIIT组小鼠松质骨BMD、BV/TV水平显著提升(P<0.05),但是WT+OVX+Lac组小鼠的松质骨BMD、BV/TV不存在显著的差异。此外,Gpr81-KO+Sham、Gpr81-KO+OVX、Gpr81-KO+OVX+HIIT、Gpr81-KO+OVX+Lac四组的皮质骨形态计量学指标无显著变化。(4)在体内实验中,相比WT+Sham组,WT+OVX组破骨细胞的活性显著增强,与WT+OVX组相比WT+OVX+HIIT组的破骨细胞活性显著减弱。在基因敲除小鼠骨组织切片的TRAP染色实验中,发现HIIT及乳酸注射均能够显著抑制OVX手术引起的破骨细胞活性增强。(5)在体外细胞实验中,与WT+Sham相比,来源WT+OVX组的BMMs定向诱导向破骨细胞分化的数目和面积均显著增多(P<0.01)。与WT+OVX组相比,来源WT+OVX+HIIT组的破骨细胞数量显著降低(p<0.01)。此外,来源WT小鼠的BMMs,在乳酸刺激后定向诱导向破骨细胞分化的数目显著减少(P<0.01),而来源KO组小鼠的BMMs,在乳酸刺激后定向诱导向破骨细胞分化的数目没有显著的变化。(6)分子机制层面:与WT+Sham相比,来源WT+OVX小鼠的破骨细胞中GPR81的表达无显著差异,但NF-k B(p-p65)蛋白表达显著升高(P<0.01),并且Tak1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。相比WT+OVX组,WT+OVX+HIIT组和WT+OVX+Lac组小鼠体外分化的破骨细胞中GPR81蛋白表达显著增加(P<0.01),NF-k B(p-p65)表达显著降低(P<0.01),而Tak1蛋白表达量显著增加(P<0.01)。与Gpr81-KO+OVX+medicinal and edible plantsHIIT组相比,Gpr81-KO+OVX+Lac组小鼠的NF-k B(p-p65)和Tak1蛋白表达无显著差异。研究结论:(1)OVX能够增加小鼠的体重,并引起骨量的丢失,HIIT能够提高小鼠体内血乳酸的水平,并抑制OVX引起的体重增加和骨量丢失。(2)8周HIIT干预和体外乳酸注射均能够通过抑制破骨细胞的分化,抑制骨吸收进程,提高小鼠的骨密度和骨量。(3)HIIT能够引起机体循环水平乳酸浓度的增加,通过激活破骨细胞膜上的乳酸受体GPR81,抑制胞内下游NF-k B(p-p65)信号通路,提高Tak1蛋白的表达,抑制了破骨细胞的分化。