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作为妊娠期女性常见疾病之一，妊娠期缺铁性贫血对于孕妇健康的影响相对较大，若不能及时进行合理干预，则对孕妇及新生儿造成严重威胁。在妊娠期间，由于受新生儿成长的影响，孕妇体内铁元素需求量增加，其体内铁元素储量容易出现不足，继而German Armed Forces诱发贫血。随着孕妇孕期的增加，其贫血症状会逐渐加剧，贫血严重时可合并重度妊娠水肿，活动后气短等，甚至出现充血性心力衰竭。近年来，为进一步提升妊娠期缺铁性贫血孕妇治疗综合水平，许多妇产科医疗人员结合临床经验与医疗专业知识对妊娠期缺铁性贫血患者的治疗进行了深入探究与分析。目前，临床针对妊娠期缺铁性贫血主要采用铁剂PF-03084014分子式、中药等治疗，均取得了良好的治疗效果。本文对妊娠期缺铁性贫血Roxadustat生产商治疗相关研究进展进行综述，以期为妊娠期缺铁性贫血孕妇提供治疗方案。

产肉性能是肉羊养殖的重要生产经济指标,直接影响肉羊的养殖效益。产肉量和肉品质是反映产肉性能的两类主要遗传性状。为了揭示山羊肉用性状的分子调控机制,以产肉量和肉品质差异显著的子午岭黑山羊和辽宁绒山羊为研究对象,在观测山羊背最长肌肌纤维和胶原纤维差异的基础上,应用RNA-Seq技术筛选了与肌肉生长发育、脂肪沉积和肌肉嫩度相关的非编码RNAs,进而通过体外细胞试验探索非编码RNAs调控山羊肌肉生长发育的分子机制。主要研究结果如下:1.辽宁绒山羊和子午岭黑山羊肌肉组织学特性有显著差异。辽宁绒山羊肌肉组织中的肌纤维直径、横截面积和胶原纤维含量均大于子午岭黑山羊,而肌纤维密度小于子午岭黑山羊(P<0.05)。2.Small RNA测序结果显示,在辽宁绒山羊和子午岭黑山羊背最长肌组织中共鉴定到了410个已知的山羊miRNAs,159个miRNAs在两个山羊品种间差异表达。其中,与子午岭黑山羊相比,24个miRNAs在辽宁绒山羊背最长肌中表达上调,135个miRNAs表达下调。功能注释结果表明上调miRNAs的靶基因富集在与肌肉发育和脂肪沉积相关的Ras和Rap1信号通路(P<0.05),而下调miRNAs的靶基因参与了肌纤维肥大相关的Hippo信号通路(P<0.05)。miRNAs-m RNAs调控网络分析发现差异表达miRNAs靶向SMPX、NOTCH1、PTEN和KLF10等与肌纤维肥大和脂肪沉积相关的基因。3.RNA-seq分析结果显示,在辽宁绒山羊和子午岭黑山羊背最长肌组织中共鉴定到了2302个lncRNAs,136个lncRNAs在两个山羊品种间差异表达(P<0.05)。其中,与子午岭黑山羊VEGFR抑制剂相比,62个lncRNAs在辽宁绒山羊背最长肌中表达上调,74个lncRNAs表达下调。GO和KEGG富集分析发现差异表达lncRNAs的靶基因富集到肌肉收缩、肌细胞分化、结缔组织发育过程和p53信号通路(P<0.05)。lncRNAs-m RNAs调控网络分析发现差异表达lncRNAs通过反式调控SMPX、MYL6B、RYR3和LOXL2等靶基因的表达来调控肌纤维肥大、脂肪沉积和肌肉嫩度。Ce RNA分析发现lncRNA(XR＿001917125.1)作为miR-34-3p和miR-460-5p的分子海绵调控NCAM2的表达,进而调控肌肉生长发育。XR＿001918832.1作为miR-200c和miR-200b的分子海绵调控肌细胞和脂肪细胞发育。4.RNA-seq分析结果显示,在辽宁绒山羊和子午岭黑山羊背最长肌组织中共鉴定到了10,875个circRNAs,214个差异表达circRNAs(P<0.05)。其中,与子午岭黑山羊相比,85个circRNAs在辽宁绒山羊背最长肌中表达上调,129个circRNAs表达下调。功能注释结果表明差异表达circRNAs的亲本基因富集到了与肌肉嫩度相关的结缔组织发育过程,以及与肌细胞和脂肪细胞发育相关的Rap1、c GMP-PKG、c AMP和Ras等信号通路(P<0.05)。Ce RNA调控https://www.selleck.cn/products/repsox.html网络分析发现circ＿008879、circ＿004971和circ＿006117等可能作为miRNAs的分子海绵参与山羊骨骼肌生长发育和脂肪沉积。5.miR-381和miR-200b靶向调控Notch信号通路相关基因,进而影响山羊骨骼肌卫星细胞(SMSCs)增殖和分化。过表达miR-381和miR-200b抑制了山羊SMSCs的活性和增殖,促进了肌管生成和成肌分化。相反,沉默miR-381和miR-200b促进了山羊SMSCs的活性和增殖,抑制了肌管生成和成肌分化。双荧光素酶报告试验发现miR-381靶向Notch信号通路相关的JAG2和PTEN并负调控它们在SMSCs中的表达,而miR-200b靶向Notch信号通路重要分子NOTCH1,以及细胞增殖调控因子CDK2,并负调控它们的表达。6.circ CTAGE5对山羊SMSCs增殖和Cecum microbiota分化具有重要调控作用。沉默circ CTAGE5抑制了山羊SMSCs的活性和增殖。此外,沉默circ CTAGE5升高了成肌分化标志基因My HC、Myo G和MEF2C的表达量,降低了SMAD4和TGFB2的表达,促进了肌管生成。本研究获得了子午岭黑山羊和辽宁绒山羊肌肉组织miRNAs、lncRNAs和circRNAs表达谱,初步探索了非编码RNAs在山羊肌肉生长发育、脂肪沉积和肌肉嫩度中的作用,进而发现miR-381、miR-200b和circ CTAGE5影响了山羊SMSCs的增殖和成肌分化。该结果可作为揭示山羊肌肉发育分子机制的基础数据,也是制订山羊肉用分子标记的基础。

目的 探讨miR-325-3p通过靶向叉头框蛋白（FOX）M1调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及上皮间质转化（EMT）。方法 培养MCF-7细胞，根据转染质粒不同分为NC组（转染miRNA mimic阴性对照）、miR-325-3p组（转染miR-325-3p mimic）、miR-NC组（转染miRNA inhibitor阴性对照）、miR-325-3p inhibitor组（转染miR-325-3p inhibitor）、pc DNA3.1组（转染pc DNA3.1空质粒）、FOXM1组（转染pc DNA3.1-FOXM1）、si-NC组（转染si-NC无意义序列）、si-FOXM1组（转染si-FOXM1质粒）、miR-325-3p inhibitor+si-FOXM1组（转染miR-325-3p inhibitor+si-FOXM1质粒）及miR-325-3p inhibitor+si-NC组genetic offset（转染miR-325-3p inhibitor+si-NC无意义序列）。CCK-8检测细胞24、48、72 h增殖能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，划痕实验检测细胞迁移能力，RT-q PCR检测细胞miR-325-3p、FOXM1 m RNA水平，Western blot检测细胞FOXM1、E-cadherin、N-cadherin及VimenR428说明书tin蛋白水平，萤光素酶实验检测miR-325-3p与FOXM1的靶向关系。结果 miR-325-3p组miR-325-3p表达水平高于NC组（P<0.01）,miR-325-3p inhibitor组miR-325-3p水平低于miR-NC组（P<0.01）。48、72 h,miR-325-3p组光密度（OD）值、侵袭细胞数及迁移率低于NC组（P<0.01）,miR-325-3p inhibitor组OD值，侵袭细胞数及迁移率高于miR-NC组（P<0.01）。miR-325-3p组E-cadherin蛋白表达水平高于NC组，Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平低于NC组（P<0.01）;miR-325-3p inhibitor组E-cadherin蛋白表达水平低于miR-NC组，Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平高于miR-NC组（P<0.01）。FOXM1组细胞FOXM1蛋白、m RNA表达水平高于pc DNA3.1组（P<0.01）;si-FOXM1组FOXM1蛋白、m RNA表达水平低于si-NC组（P<0.01）。48、72 h,FOXM1组OD值、侵袭细胞数及迁移率高于pc DNA3.1组（P<0.01）;si-FOXM1组OD值，侵袭细胞数及迁移率低于si-NC组（P<0.01）。FOXM1组E-cadherin蛋白表达水平低于pc DNA3.1组，Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平高于pc DNA3.1组（P<0.01）;si-FOXM1组E-cadherin蛋白表达水平高于si-NC组，Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平低于si-NC组（P<0.01）。48、72 h,miR-325-3p inhibitor+si-FOXM1组OD值、侵袭细胞数及迁移率低于miR-325-3p inhibitor+si-NC组（P<0.01）。miR-325-3p inhibitor+si-FOXM1组E-cadherin蛋白表达水平高于miR-325-3p inhibitor+si-NC组，Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平低于miR-325-3p inhibitor+si-NC组（P<0.01）。miR-3BMN 673临床试验25-3p组FOXM1蛋白、m RNA表达水平低于NC组（P<0.01）;miR-325-3p inhibitor组FOXM1蛋白、m RNA表达水平高于miR-NC组（P<0.01）。NC+WT-FOXM1组与NC+MUT-FOXM1组萤光素酶活性比较，差异无统计学意义（P>0.05）;miR-325-3p+WT-FOXM1组萤光素酶活性低于miR-325-3p+MUT-FOXM1组（P<0.01）。结论 miR-325-3p在乳腺癌组织中低表达，过表达miR-325-3p可靶向FOXM1抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移及EMT。

目的 观察运脾补血汤辅助治疗小儿营养性缺铁性贫血脾胃虚弱证的临床疗效。方法 选取2020VX-661 IC50年4—9月嘉兴市中医医院儿科收治的小儿营养性缺铁性贫血脾胃虚弱证患儿70例，按照随机数字表法分为对照组和治疗组，各35例。对照组予葡萄糖酸亚铁糖浆口服，治疗组在对照组治疗方法的基础上予中药运脾补血汤治疗，2组均连续治疗4周后统计临床疗效。结果 对照组总有效率为77.14%(27/35),治疗组为97.14%(34/35),2组总有效率比较，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前，2组血清血红蛋白(Hb)Medically fragile infant、红细胞平均血红蛋白量(MCH)、红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHselleck DocetaxelC)水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性；治疗后，2组的上述指标水平均明显升高，与同组治疗前比较，差异有统计学意义(P<0.05),且治疗组升高更显著(P<0.05)。治疗前，2组血清铁(SI)、铁蛋白(SF)、转铁蛋白(TRF)水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性；治疗后，2组血清SI、SF水平均明显升高，TRF水平明显下降，与同组治疗前比较，差异有统计学意义(P<0.05),且治疗组升高或下降更显著(P<0.05)。治疗前，2组面色、纳食、精神和腹胀便溏积分以及总积分比较，差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性；治疗后，2组上述积分均明显下降，与同组治疗前比较，差异有统计学意义(P<0.05),且治疗组下降更显著(P<0.05)。2组治疗过程中均未发生肝肾功能损害，对照组不良反应总发生率为17.14%(6/35),治疗组为11.43%(4/35),2组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 运脾补血汤辅助治疗小儿营养性缺铁性贫血脾胃虚弱证，疗效确切，不仅能明显改善患儿的临床症状、贫血相关指标及铁代谢水平，而且无明显不良反应，值得临床推广应用。

背景脑炎是脑实质弥漫性或多灶性疾病的统称,是临床常见的中枢神经系统感染(central nervous system infection,CNSI)性疾病。病毒感染则是脑炎的主要病因,占脑炎患者的20%-50%。因病毒感染而死亡的人群在亚非地区每年约55000例患者。同时在全球地区每年有15万-30万的新发患者。诱发脑炎的病毒具有神经侵袭或噬神经的作用,或者通过诱发炎症反应导致神经损伤。目前临床上仍以对症治疗为主,缺乏抗病毒感染药物,因此需要更深入探究病毒性脑炎的致病机理以寻找有效的治疗手段,为防治感染病毒脑炎提供新思路。Tim-3在巨噬细胞等天然免疫细胞均发挥关键调控作用,课题组前期发现Tim-3可通过抑制抗病毒蛋白NF90的泛素化介导免疫耐受,促进病毒的免疫逃逸;同时发现Tim-3同STAT1存在相互作用关系,Tim-3通过抑制其磷酸化及核转位,最终使巨噬细胞向M2型极化;此外Tim-3还能通过MARCH8这一E3泛素连接酶促进巨噬细胞上MHC-I分子的泛素化降解。USP25作为一种泛素特异性蛋白酶,能够通过去泛素化调节多种目标蛋白,参与机体抗病毒感染免疫应答、神经退行性疾病、肿瘤等多种疾病发生发展进程。如在参与机体抗DNA或RNA病毒感染免疫应答反应的进程中,USP25能作为一种正向调控分子参与到免疫相关的多种信号通路来调节机体的先天免疫反应。在前期研究中我们发现Tim-3抑制USP25的表达,并可能存在相互作用,然而具体机制尚未明确。Tim-3是否通过抑制USP25的表达促进病毒的免疫逃逸是非常值得探讨的课题。目的本论文旨在探讨Tim-3抑制USP25表达的机制,以及Tim-3-USP25通路在病毒免疫逃逸中的作用。为新的抗病毒策略提供新思路。方法1.通过实验室保有的HAVCR2(Tim-3)-Flox重组转基因小鼠交配筛选出Flox~(+/+)纯合型小鼠,利用其与Lyz2-Cre重组转基因小鼠(髓系细胞特异性表达Cre酶,可在巨噬细胞敲除相应基因)交配并筛选出Flox~(+/+)Cre~+小鼠。提取小鼠基因组DNA、脑组织m RNA及总蛋白,通过琼脂糖凝胶电泳、PCR、实时荧光定量PCR(RT-PCR)及蛋白质免疫印迹(WT)等多种方式检验Tim-3敲除效果。2.野生型(Wild type,WT)小鼠和巨噬细胞特异性敲除Tim-3鼠(Tim-3-CKO),使用脑立体定位仪颅内注射的方式建立以VSV脑炎为研究对象的病毒模型。观察记录小鼠发病情况、体重及存活数。通过数据分析找到每组老鼠体重数据和Q-VD-Oph临床试验生存率的拐点,以便后续实验开展。3.同上所述,WT鼠和Tim-3-CKO小鼠分组后,构建稳定的感染模型,以病毒感染后6天作为检测时间点,具体通过RT-PCR的方法检测小鼠各组织内VSV病毒载量;对脑组织进行HE染色,根据病毒载量富集水平和HE染色结果,评价模型建立情况。4.同上所述,WT鼠和Tim-3-CKO小鼠分组后,构建稳定的感染模型,以病毒感染后5d作为检测时间点(即取样前一天)进行行为学检测,用旷场实验的方法评估小鼠运动功能的受损情况。5.在前期网络相关性分析Tim-3抑制USP25的基础上验证体内Tim-3对USP25的影响。并在巨噬细胞RAW264.7和小胶质细胞BV2中进行病毒感染及Tim-3敲低试验后,利用WB和RT-PCR检测细胞内病毒载量以及USP25的蛋白质表达水平和m RNA表达水平。6.在HEK293T细胞中共转染USP25-promoter、STAT1及Tim-3-Flag,通过双荧光素酶报告基因的检测验证STAT1是否能够偶联Tim-3抑制USP25的表达。7.在HEK293T细胞中转染相关质粒的方法培养细胞后用免疫沉淀CO-IP技术收集细胞并用Westren blot分析Tim-3与USP25是否存在相互作用。8.在HEK293T细胞中转染相关质Panobinostat小鼠粒并用CO-IP和Westren blot等技术分析在Tim-3-USP25抗病毒感染通路中是否影响TRAF3蛋白的泛素化进而影响下游分子,并同时寻找去泛素化作用的位点,探究Tim-3抑制USP25表达并调控宿主免疫的分子机制。9.通过RT-PCR的方法检测小鼠颅内干扰素如IFN-α4、IFN-β、IFN-γ等炎症因子的表达水平和体外感染巨噬细胞和小胶质细胞后细胞内炎症因子m RNA的表达水平以明确Tim-3抑制USP25表达的意义。结果1.在VSV病毒性脑炎模型中,巨噬细胞Tim-3特异性敲除小鼠的生存率显著升高、病毒载量显著降低,脑内炎症显著缓解、小鼠的行为认知损伤显著改善;2.在VSV病毒性脑炎模型中,巨噬细胞Tim-3特异性敲除小鼠体内抗病毒蛋白USP25的表达显著升高,病毒载量与野生型小鼠相比显著下调,病理结果显示巨噬细胞特异性敲除Tim-3小鼠脑组织损伤程度显著减轻;3体外VSV病毒性脑炎感染模型中敲低Tim-3基因的巨噬细胞和小胶质细胞USP25的表达也显著升高此时细胞内病毒载量同样显著降低;4.Tim-3与USP25存在相互作用;5.在转录水平上STAT1可作为转录因子参与USP25的调节,Tim-3可能通过STAT1抑制USP25的转录进而抑制后续USP25的功能活性;6.在病毒感染条件下,高表达的Tim-3通过抑制USP25表达促进抗病毒关键蛋白TRAF3的泛素化降解,减少体内外炎症因子的表达,进而促进病毒的免疫逃逸。总结本研究主要以免疫检查点分子Tim-3和去泛素特异性酶USP25为主要研究对象,在体内水平上通过建立稳定的matrix biology巨噬细胞Tim-3特异性敲除模式小鼠VSV病毒脑炎模型,探究Tim3与去泛素化酶USP25的关系,实验结果显示,Tim-3对USP25表达有抑制作用,且巨噬细胞特异性敲除Tim-3对病毒性脑炎小鼠有保护作用;在体外水平上敲低Tim-3后巨噬细胞和小胶质细胞中USP25含量升高;Tim-3通过STAT1抑制USP25的转录进而影响下游抗病毒关键蛋白TRAF3泛素化降解过程,减少炎症因子的表达、最终促进病毒的免疫逃逸。本课题研究发现Tim-3调控免疫耐受,促进病毒免疫逃逸的一种新机制,同时也是深入探讨USP25在病毒感染中的表达调节机制,并从中寻求基于USP25的特异性干预策略对于克服病毒感染耐受、开发新的抗感染免疫治疗手段。

目的 探讨芪血颗粒联合多糖铁复合物胶囊治疗女性缺铁性贫血的临床疗效及对患者铁代谢的影响。方法 按照随机数字表法将2019年11月至2022年11月该院收治的92例女性缺铁性贫血患者分为对照组和观察组，每组46例。对照组给予多糖铁复合物胶囊治疗，观察组给予芪血颗粒联合多糖铁复合物胶囊治疗。比较两组患者的临床疗效、血象指标、铁代谢及不良反应发生情况。结果 观察组transmediastinal esophagectomy临床总有效率高于对照组(93.48%vs.78.26%),差异有统计学意义(χ~2=4.389,P=0.036)。治疗后两组患者血清血红蛋白(Hb)水平、平均血红蛋白点击此处含量(MCH)、红细胞平均体积(MCV)均升高(P<0.05),且治疗后观察组血清Hb水平、MCH、MCV均高于对照组(P<0.05)。治疗后两组患者血清红细胞分布宽度(RDW)均降低(P<0.05),且治疗后观察组血清RDW低于对照组(P<0.05)。治疗后两组患者血清铁(SI)、铁蛋白(SF)、铁调素水平均升高(P<0.05),且治疗后观察组SI、SF、铁调素水平均高于对照组(P<0.05)。治疗后两组患者血清总铁结合力(TIBC)、可溶性转铁蛋白受体(sTFR)水平均降低(P<0.05),且治疗后观察组血清TIBC、sTFR水平均低于对照组(P<0.05)。对照组不良反应发生率高于观察组(17.39%vs. 4.35%),差异有统计学意义(χ~2=4.039,P=0.044)。结论 芪血颗购买BMS-354825粒联合多糖铁复合物胶囊治疗女性缺铁性贫血的临床疗效显著，能显著改善患者的血象指标和铁代谢，且不良反应少、安全性高，有临床推广价值。

目的 探讨新疆医科大学附属肿瘤医院病理科10余年间确诊为EB病毒阳性的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的临床病理特征。方法 收集2010年1月至2022年4月期间所有在新疆医科大学附属肿瘤医院经组织学活检确诊为DLBCL的623例患者的临床及病理资料，将Laser-assisted bioprinting其中EB病毒阳性的DLBCL患者15例selleckchem Belumosudil纳入本研究，应用苏木精-伊红染色了解EB病毒阳性的DLBCL患者的形态学特点，应用免疫组化检测相关蛋白的表达水平，电话随访患者。结果 623例DLBCL患者，男性332例，女性291例，中位年龄为59岁。EB病毒阳性的DLBCL的患者15例，占比为2.4%,男女比例为1.14∶1;形态学以免疫母细胞型为主；Han’s分型GCB型2例，non-GCB型13例；15例EB病毒阳性的DLBCL的患者中Ann Arbor分期早期4例，晚期11例；随访期间死亡6例，均为Ann Arbor分期晚期(确认细节Ⅲ～Ⅳ),生存时间在(5～54)个月之间，中位生存期为23.5个月。结论 新疆地区EB病毒阳性的DLBCL患者形态学特征以免疫母细胞型为主，免疫分型以non-GCB型为主，晚期患者占多数，且死亡率高，采取综合治疗的患者例数少，值得临床及病理医生重视。

细胞焦亡是一种由焦孔素家族介导的炎性细胞死亡方式，能够促进炎性介质的释放从而活化肿瘤微环境(tuselleckchem R428mor microenvironment,TME)中的NK细胞、T细胞、巨噬细胞等免疫细胞群发挥调控免疫抗肿瘤作用。胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)是最严重、最恶性的胶质瘤，被诊断GBM的患者中位生存期<2年，并且由于血脑屏障的存在导致药物难以抵送至脑部从而影响药物抗GBM的作用。因此探索新的措施及机制来治疗GBM是十分重要的。GBM具有复杂的TME，其TME中存在大量的免疫细胞群，然而这些免疫细胞群往往受到GBM的影响处于免疫抑制状态。细胞焦亡作为一种能够激活免疫的细胞死亡方式，具有活化机体的免疫帮助逆转TME免疫抑制的作用。本综述以细胞焦亡为出发点阐述细胞焦亡与免疫系统之间的关系、细胞焦亡如何影响GBM的TME的免疫细胞群以及细胞SBE-β-CD配制焦亡途径在GBM治inborn genetic diseases疗中的药物研究新进展，为未来临床治疗GBM提供新的方向和策略。

三类动物疫病病原伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,Cp)可感染多种动物和人,主要引起炎性化脓性反应。三结构域蛋白家族(Tripartite motif,TRIM)是一类参与重要生命过程如肿瘤杀伤、抑制病毒复制和细胞凋亡的E3连接酶家族。TRIM家族成员之一的TRIM21是一种调控免疫反应如抗病毒感染、细胞因子和趋化因子分泌的蛋白。众多研究都强调了TRIM21在抗病毒免疫中的重要性,但对其在抵抗细菌或其他病原体中的作用知之甚少。本实验室前期研究证实TRIM21负调控Cp感染小鼠巨噬细胞诱导的炎症反应,然而其调控机制尚不清楚。因此,本试验首先通过转录组学测序筛选可能参与TRIM21调控Cp感染巨噬细胞致炎过程的信号通路;其次通过将Trim21基因敲除或过表达研究所筛选关键信号通路在TRIM21调控Cp感染巨噬细胞致炎反应中的作用及机制;同时利用Cp磷脂酶D(Phospholipase D,PLD)编码基因(pld)缺失株感染小鼠巨噬细胞,研究PLD与TRIM21调控Cp感染巨噬细胞致炎作用的关系。主要研究结果如下:1.基于转录组学测序分析TRIM21调控Cp感染巨噬细胞致炎的信号通路以感染复数(Multiplicity of infection,MOI)为10的Cp ATCC19410感染野生型小鼠(WT)和Trimselleckchem LY-18801121基因敲除(Trim21~(-/-))小virological diagnosis鼠腹腔巨噬细胞,并进行转录组学测序,同时通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q PCR)方法对转录组测序结果进行验证。本次测序共筛选出1757个差异表达基因(Differential Genes,DEGs),q PCR检测结果显示所选基因的m RNA表达情况与转录组测序结果的表达趋势一致,表明转录组测序数据准确性高。对DEGs进行KEGG富集分析,发现与未受感染的WT和Trim21~(-/-)小鼠巨噬细胞相比,Cp感染巨噬细胞组后,DEGs可富集到NF-κB、MAPK、Ras和Fox O等信号通路上;而与Cp感染WT小鼠巨噬细胞相比,被感染的Trim21~(-/-)小鼠巨噬细胞DEGs可以在Jak-STAT、Fox O和NF-κB等信号通路上富集,提示这些通路可能与TRIM21调控Cp感染巨噬细胞致炎作用相关。2.TRIM21对Cp感染小鼠巨噬细胞NF-κB和p38 MAPK信号通路关键分子磷酸化水平的调控作用基于转录组学分析筛选的Cp感染致炎通路及本实验室前期的研究基础,进一步对NF-κB和p38 MAPK信号通路进行研究。以MOI=10的Cp感染WT小鼠腹腔巨噬细胞,在不同时间点采用Western blot分别检测NF-κB和p38MAPK信号通路关键分子磷酸化水平。结果显示,与未感染组相比,Cp感染2h后NF-κB信号通路关键分子IκBα和p65的蛋白磷酸化水平升高。此外,p-p38在Cp感染后表达水平也升高。以上结果提示,NF-κB和p38 MAPK信号通路参与巨噬细胞应答该病原感染。为进一步明确TRIM21在该过程中的作用,以Western blot检测Cp感染WT和Trim21~(-/-)小鼠巨噬细胞p65、IκBα、p38及其磷酸化蛋白的表达水平。结果显示,与被感染的WT巨噬细胞相比,Cp感染Trim21~(-/-)巨噬细胞细胞后p-p65、p-IκBα及p-p38表达水平均显著升高。同时将Trim21基因过表达,发现p-p65和p-IκBα的表达水平均显著降低。表明TRIM21可通过降低Cp感染小鼠巨噬细胞IκBα、p65和p38分子的磷酸化水平负调控该病原感染巨噬细胞致炎作用。3.TRIM21对Cp感染小鼠巨噬细胞NF-κB信号通路关键分子泛素化水平的调控作用除了磷酸化,泛素化修饰途径也与NF-κB信号通路激活有关。为研究TRIM21对Cp感染巨噬细胞激活NF-κB通路关键分子泛素化的影响,首先通过Co-IP检测TRIM21能否与p65、IκBα发生相互作用。结果显示,在Cp感染前后,TRIM21均能与p65、IκBα发生相互作用。为明确Cp感染是否会引起NF-κB通路关键分子的泛素化,以Western blot和IP分别检测了Cp感染WT巨噬细胞后总蛋白的泛素化水平及p65、IκBα分别在K48及K63位点的泛素化情况。结果发现,Cp感染巨噬细胞的总蛋白泛素化及IκBα在K48位点的泛素化水平均升高,而IκBα在K63位点的泛素化水平未见明显变化。提示Cp感染会增强细胞总蛋白的泛素化水平,且该病原感染巨噬细胞后IκBα主要在K48位点发生泛素化。为进一步研究TRIM21对Cp感染小鼠巨噬细胞NF-κB信号通路关键分子泛素化的影响,用Cp分别感染TriElexacaftor研究购买m21过表达和Trim21~(-/-)巨噬细胞,检测总蛋白泛素化及IκBα在K48位点的泛素化水平。结果显示,与被感染的WT巨噬细胞相比,Cp感染Trim21~(-/-)巨噬细胞后总蛋白泛素化水平及IκBα在K48位点的泛素化水平均降低;而Cp感染Trim21过表达巨噬细胞后,总蛋白泛素化水平及IκBα在K48位点的泛素化的水平均升高。表明TRIM21对Cp感染小鼠巨噬细胞IκBα在K48位点的泛素化水平起正调控作用。4.磷脂酶D在Cp感染小鼠巨噬细胞NF-κB信号通路激活中的作用用MOI=10的ATCC19410及其pld缺失株(ATCC19410Δpld)感染WT小鼠巨噬细胞,以Western blot检测通路关键蛋白的磷酸化水平,以IP和Western blot检测IκBα在K48位点的泛素化水平及总蛋白泛素化水平。结果发现,是否缺失pld对Cp感染巨噬细胞p65、p-p65、IκBα、p-IκBα的蛋白表达水平无显著性影响,提示PLD不参与NF-κB信号通路激活中的IκBα和p65磷酸化。与未感染的巨噬细胞相比,ATCC19410及ATCC19410Δpld感染巨噬细胞后总蛋白泛素化水平及IκBα在K48位点的泛素化水平均升高;但与野生株感染巨噬细胞相比,pld缺失株感染巨噬细胞后,其总蛋白泛素化水平及IκBα在K48位点的泛素化水平均降低,提示PLD与Cp感染小鼠巨噬细胞促进IκBα泛素化有关。综上,本研究表明TRIM21负调控Cp感染巨噬细胞介导NF-κB通路关键分子IκBα和p65的磷酸化水平,以及p38MAPK通路关键分子p38的磷酸化水平,而对被感染巨噬细胞NF-κB通路关键分子IκBα泛素化起正调控作用。缺失pld不影响Cp感染巨噬细胞介导的IκBα和p65磷酸化,但与该病原感染巨噬细胞促进IκBα泛素化有关。

目的：探讨血清B型脑钠肽（BNP）、半乳糖凝集素-3(Gal-3)联合左房容积指数（LAⅥ）对非体外循环冠状动脉搭桥术（OPCAB）患者术后新发房颤的预测效能。方法：选择2020年1月至2022年1月我院心血管外科收治的196例拟行OPCAB患者，根据术后住院期间是否新发房颤将患者分为新发房颤组（36例）和CoQ biosynthesis非新发房颤组（160例）。检测两组血清BNP、Gal-3水平和LAⅥ，收集所有患者MCC950采购的临床资料。采用多因素Logistic回归分析OPCAB患者术后新发房颤的影响因素。受试者工作特征（ROC）曲线分析BNP、Gal-3及LAⅥ预测OPCAB患者术后新发房颤的效能。结果：新发房颤组血清BNP、Gal-3水平及LAⅥ高于非新发房颤组（P<0.05）。术后IABP辅助、年龄偏大、高水平BNP、高水平Gal-3、确认细节高LAⅥ是OPCAB患者术后新发房颤的危险因素（P<0.05）。联合BNP、Gal-3和LAⅥ预测OPCAB患者术后新发房颤的曲线下面积为0.872，高于BNP、Gal-3、LAⅥ单独检测的0.773、0.711、0.766。结论：OPCAB术后新发房颤患者血清BNP、Gal-3水平和LAⅥ均升高，上述指标均可辅助性预测OPCAB患者术后新发房颤的风险，且联合检测的预测效能更高。