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目的 通过研究不同浓度臭氧化生理盐水对家兔膝关节软骨的影响，探索臭氧水运用的安全性。方法 将20只新西兰家兔按不同的臭氧化生理盐水浓度分为4组，即Ⅰ组(30μg/ml)，Ⅱ组(35μg/ml)，Ⅲ组(40μg/PLX4032 IC50ml)，Ⅳ组(45μg/ml)。分2次分别对家兔膝关节腔内注射臭氧化生理盐水，注射间隔时间为7天。第二次注射7天后进行病理活检及病理检查。结果 Ⅰ组中3例正常，2例出现轻度病理损伤。Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组均导致关节软骨不同类型的病理改变。参照骨关节炎研究国际学会(Osteoarthritis Research Society International,OARSI)骨关节炎病理评价系统中的软骨组织病理分级标准，病理分级结果如下：Ⅰ组0级3例，1级2例；Ⅱ组1级3例，2级1例，3级1例；Ⅲ组3级4例；Ⅳ组2级1例，3级IACS-010759溶解度3例。运用SpearChinese steamed breadman等级资料相关关系分析病理分级，结果示r=0.515,P=0.002，差异有统计学意义(P <0.05)。结论 臭氧化生理盐水浓度> 30μg/ml可能对正常家兔膝关节软骨造成损伤，且随着臭氧化生理盐水浓度的递增，引起膝关节损伤的程度也会增加。

(R)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯((R)-CHBE)是一种手性有机化合物。它是许多手性药物合成过程中不可或缺的中间体,可通过氯基的还原、置换或其他官能团的导入来合成相关药物。此外,以(R)-CHBE为中间产物合成的手性物质在医药和食品等领域广泛应用。近年来,主要通过手性拆分法和不对称合成法合成(R)-CHBE。手性拆分法由于其底物利用率低Microbiological active zones,产物(R)-CHBE后续纯selleck Rapamycin化步骤繁琐等缺点逐渐被淘汰。而不对称合成法包括化学合成法和生物合成法。化学合成法由于反应条件苛刻、对映选择率不高等缺点也逐渐退出市场。而生物合成法合成(R)-CHBE的反应条件温和,产物对映选择率高而逐渐步入工业生产。此外,由于底物4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)和产物(R)-CHBE在碱性条件下或者温度偏高的环境中容易水解。因此,本研究致力于寻找能够在酸性条件下能稳定地合成(R)-CHBE的酶。首先从耐酸性菌株植物乳杆菌DSM 20174(Lactobacillus plantarum DSM 20174)中成功筛选到能够在酸性环境中不对称合成(R)-CHBE的醛酮还原酶(LPAKR5和LPAKR9),然后构建了LPAKR9和葡萄糖脱氢酶(GDH)的共表达系统,实现了NADPH的再生和(R)-CHBE的合成。主要研究结果如下:(1)从实验室保存的菌株中得到酸耐性较好且具有(R)-CHBE合成能力的乳酸菌——L.plantarum DSM 20174。并基于对L.plantarum DSM 20174全基因组的分析预测,成功克隆了14个LPAKRs基因,并将其连接至p RSFDuet-1质粒,然后在E.coli BL21(DE3)中诱导表达。结果发现,只有LPAKR5和LPAKR9能够催化COBE,它们的蛋白质分子量约为31 kDa。(2)利用镍柱和脱盐柱对LPAKR5和LPAKR9进行纯化,然后对酶学性质进行研究。实验结果表明,LPAKR5和LPAKR9的最适p H均为6.0,并且在p H为6.0时,它们能够在12小时内保持较高的稳定性。此外,LPAKR5和LPAKR9的最适温度分别为30℃和40℃,在较低温度下也能保持较高的稳定性。以COBE为底物,对LPAKR5和LPAKR9的动力学参数进行分析,LPAKR5和LPAKR9的K_m值分别为9.5 m M和8.7 m M,V_(max)值分别为7.6 U·mg~(-1)和8.59 U·mg~(-1),k_(cat)/K_m值分别为2.40 L·mmol~(-1)·s~(-1)和1.95 L·mmol~(-1)·s~(-1)。(3)基于LZ-IETD-FMK使用方法PAKR9和Bacillus subtilis ATCC 13952的葡萄糖脱氢酶(GDH)基因,构建了E.coli BL21(DE3)/p RSFDuet-1-lpakr9-gdh双酶共表达体系,实现NADPH的再生。通过优化全细胞催化COBE合成(R)-CHBE的转化条件,最佳反应条件为:90 m M葡萄糖,20 m M磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(p H 6.0),20 g·L~(-1)全细胞催化剂,40 mM COBE,30℃,200 rpm反应4 h,产量最高为25.2 mM。

研究背景与目的脑肿瘤流行病学统计发现,原发性脑肿瘤约占所有癌症的2%,其发病随着年龄的增长而增加,其中32%为恶性脑肿瘤,68%为非恶性脑肿瘤。脑胶质瘤是最常见的原发性恶性肿瘤,产生于大脑及脊髓胶质细胞的癌变。因脑胶质瘤具有高发病率、高复发率、高死亡率以及低治愈率等特点成为当下肿瘤领域研究的热点。目前脑胶质瘤的治疗过程中应用的一线药物主要为替莫唑胺,还有其他治疗方案如PCV化疗方案(甲基苄肼(Procarbazine,PCZ),长春新碱(vincristine,VCR),洛莫司汀(lomustine,CCNU))。针对脑胶质瘤的治疗药物缺乏,患者愈后差、生存期短等问题,寻找新的药物具有很重要的治疗意义。研究发现吲哚类化合物在对抗肿瘤中是通过影响多种靶点来发挥作用的,包括影响蛋白质、核酸、血管生成、侵袭转移、同时可以调控多种信号转导通路等,具有重要的研究意义及广阔的应用前景,在抗癌药开发中也一直深受关注,且已有研究发现吲哚类药物也可透过血脑屏障作用于脑瘤。因此本文选择了实验室中吲哚类系列活性化合物进行筛选,发现化合物3r具有较好的抗脑胶质瘤作用,并深入研究化合物3r在体内外对脑胶质瘤增殖、侵袭、迁移、血管生成的影响,探讨了化合物3r对脑胶质瘤的潜在治疗作用及作用机制。实验方法和结果1.采用MTT方法,顺铂(Cisplatin,DDP)作为阳性对照药,筛选抗脑胶质瘤活性化合物及脑胶质瘤敏感细胞株。结果发现化合物3r活性最强,对U87和U251细胞的抑制作用优于C6细Community infection胞。2.采用MTT方法,顺铂作为阳MRTX1133性对照药,检测了化合物3r对多种人正常细胞(HUVECs、bEnd.3、NHA)的细胞毒性,结果发现化合物3r具有较低的细胞毒性。3.在倒置荧光显微镜下观察化合物3r对U87和U251细胞形态的影响。结果发现,化合物3r可改变细胞的形态,使细胞由扁平变圆,且碎片化增多。4.采用克隆形成实验检测化合物3r对U87和U251细胞增殖及克隆形成能力的影响,结果发现化合物3r浓度依赖性地抑制克隆形成能力。5.采用Transwell实验、划痕实验检测化合物3r对U87和U251细胞侵袭、细胞迁移能力的影响,Western blot方法研究了相关蛋白表达水平的变化。结果发现化合物3r浓度依赖性地降低细胞内N-cadherin、MMP9和MMP2蛋白表达,增加E-cadherin蛋白表达,显著抑制细胞EMT过程,从而抑制侵袭迁移能力。6.采用血管生成拟态(vasculogenicmimicry,VM)实验,检测化合物3r对U87和U251细胞拟态血管生成能力的影响。实验表明,化合物3r对U87和U251细胞的拟态血管生成具有明显抑制作用。7.通过计算机模拟技术、分子模拟软件Schrodinger将化合物3r与多种相关蛋白进行分子模拟对接,发现化合物3r与微管蛋白以及GSK3β结合。8.采用Western blot方法检测化合物3r抑制U87和U251细胞侵袭、迁移能力的分子机制。结果发现,化合物3r通过调控GSK3β/β-catenin信号通路,使GSK3β蛋白表达水平降低,β-catenin表达下降,进而减少β-catenin入核影响EMT过程抑制细胞侵袭迁移。9.通过免疫荧光实验检测化合物3r对U87和U251细胞微管组织的影响。化合物3r对细胞周期及周期相关蛋白的变化采用PI染色法,流式细胞仪和Western blot方法检测。结果显示,化合物3r能够浓度依赖性地抑制U87和U251细胞的微管形成,可以将细胞阻滞在G2/M期,其作用与降低G2/M期蛋白Cyclin B1、CDK1的表达水平有关。10.通过Hoechst 33342染色法定性,AnnexinV-FITC/PI双染法定量检测化合物3r对脑胶质瘤细胞U87和U251细胞凋亡的影响,Western blot方法检测了细胞凋亡蛋白表达水平的变化。Hoechst 33342染色法、AnnexinV-FITC/PI双染法检测表明,化合物3r可以促进U87和U251细胞的凋亡,增加Bax表达水平,使Bcl-2表达水平下调。11.采用吖啶橙(acridineorange,AO)染色法,检测化合物3r对脑胶质瘤细胞U87和U251细胞自噬的影响。结果发现,化合物3r对U87和U251细胞自噬的影响不明显。12.采用Chemdraw及ADMET软件预测化合物3r透过BBB的动力学性质。通过体外细胞摄取实验,质谱成像代谢Bemcentinib小鼠组学检测化合物3r透过血脑屏障(BBB)的能力。结果发现,化合物3r具有透过BBB的动力学性质,在体外可以被脑微血管内皮细胞及脑胶质瘤细胞所摄取,同时化合物3r可透过血脑屏障分布在脑内,积累于脑肿瘤部位。13.建立裸鼠U87细胞原位脑胶质瘤的模型,通过小动物活体成像系统检测化合物3r对裸鼠U87细胞原位脑胶质瘤生长的影响。实验结果证实,随着化合物3r浓度的增加,对脑内肿瘤的抑制作用越来越显著。实验结论化合物3r对高侵袭性脑胶质瘤细胞的生长和侵袭迁移具有较好地抑制作用,可抑制脑胶质瘤U87和U251细胞增殖、侵袭、迁移及血管生成等。作用机制研究发现,化合物3r可抑制微管组织的形成、影响其结构促进细胞G2/M期阻滞并且诱导细胞凋亡。另外化合物3r对脑胶质瘤高侵袭性特点的抑制作用与β-catenin上游GSK3β的结合有关,该作用是通过影响β-catenin的表达,降低β-catenin的入核进而抑制EMT过程发挥。两方面的作用机制介导了其抑制脑胶质瘤增殖和迁移作用。但是化合物3r与GSK3β分子结构中的结合位点及更深入的机制还需进一步探讨。研究意义本论文在筛选了系列吲哚类化合物的抗脑胶质瘤活性基础上,研究了活性化合物3r对脑胶质瘤的治疗作用。通过一系列体外实验及体内实验验证其抗高侵袭性脑胶质瘤的作用,并寻找化合物新的作用靶点GSK3β,进一步对化合物3r治疗脑胶质瘤的机制进行了探讨。为化合物3r成为一种新型靶向抑制剂用于脑胶质瘤治疗提供了理论与实验依据,对系列吲哚类化合物进一步的修饰合成开发提供新的思路。

目的 构建5个PAH基因无义突变位点慢病毒载体并转染细胞，比较3种不同类型药物PTC124、Amlexanox和G418对PAH基因无义突变的mindfulness meditation通读效率。方法 选择5个突变频率较高的人PAH基因无义突变位点(R111X、Y166X、R176X、W326X、Y356X)构建慢病毒载体，与野生型慢病毒载体(6个载体均带有Flag标签DDDDK)分别转染HEK293细胞。取野生型(WT)及5种突变型细胞，采用不加药物(0μmol/L)、PTC124(50、100μmol/L)、Amlexanox(250、500μmol/L)、G418(1、2、5 g/L)分别处理48 h,采用CCK-8实验检测72 h细胞增殖率，采用实时荧光定量PCR法检测DDDDK mRNA相对表达量，采用Western blot法检测PAH、DDDDK蛋白相对表达量。结果 (1)WT细胞经5 g/L G418处理72 h后细胞增殖率低于0μmol/L(P<0.05),其余药物及浓度处理后细胞增殖率均不受影响；5种突变型细胞经50、100μmol/L PTC124处理72 h后细胞增殖率均不受影响；W326X、Y356X突变型细胞经500μmol/L Amlexanox处理72 h后细胞增殖率低于0μmol/L(P<0.05),其余突变型细胞经250、500μmol/L Amlexanox处理后细胞增殖率不受影响；R111X、Y166X突变型细胞经5 g/L G418处理72 h后细胞增殖率低于0μmol/L(P<0.05),1、2 g/L G418处理后细胞增殖率不受影响，R176X、W326X和Y356X经1、2、5 g/L G418处理72 h后细胞增殖率均低于0μmol寻找更多/L(P<0.05)。(2)WT细胞经50、100μmol/L PTC124和250、500μmol/L Amleanox处理后DDDDK mRNA及PAH、DDDDK蛋白相对表达量均高于0μmol/L(P<0.05),5 g/L G418处理后均低于0μmol/L(P<0.05),1、2 g/L G418处理JQ1价格后与0μmol/L比较差异均无统计学意义(P>0.05)。5种突变型细胞经250、500μmol/L Amleanox和5 g/L G418处理后DDDDK mRNA相对表达量均高于0μmol/L(P<0.05),经50、100μmol/L PTC124处理后DDDDK mRNA相对表达量与0μmol/L比较差异均无统计学意义(P>0.05);5种突变型细胞不加药物(0μmol/L)处理后DDDDK mRNA相对表达量均低于WT细胞(P<0.05)。5种突变型细胞经不加药物(0μmol/L)、50、100μmol/L PTC124和250、500μmol/L Amleanox处理后几乎不表达PAH、DDDDK蛋白；R111X、R176X、Y166X、Y356X突变型细胞经5 g/L G418处理后PAH、DDDDK蛋白相对表达量均高于0μmol/L(P<0.05),W326X突变型细胞经1、2、5 g/L G418处理后PAH、DDDDK蛋白相对表达量均高于0μmol/L(P<0.05),1、2 g/L G418均高于5 g/L G418(P<0.05),1 g/L G418与2 g/L G418比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Amlexanox和G418可提高PAH基因5种无义突变R111X、Y166X、R176X、W326X、Y356X转录水平，其中G418可使5种无义突变表达完整PAH蛋白；G418矫正W326X无义突变的有效浓度为1 g/L,而矫正其余4种无义突变的有效浓度为5 g/L。

研究背景:雄激素性脱发(AGA)是以头皮毛囊微小化为特征的一种常见的皮肤科疾病,不仅严重影响患者的生活质量,部分selleck化学患者还要面临治疗药物带来的副作用。AGA的发病机制可能和雄激素代谢相关,睾酮(TS)在5α-还原酶的作用下转化为二氢睾酮(DHT),DHT与毛囊细胞中的雄激素受体(AR)结合进而导致脱发。目前AGA治疗方式包括口服非那雄胺(FNS)、度他雄胺(DUT),外用米诺地尔(MXD)等。其中DUT对5α-还原酶的抑制作用优于FNS,但口服DUT可能导致患者出现男性乳房发育、睾丸疼痛和性功能受损等副作用。而外用MXD可能造成脱屑、瘙痒等不良反应。所以我们尝试新型可控的给药方式,如将口服DUT改为局部给药,减少因全身给药引起的不良反应。此外,靶向AR的药物同样是研究热点。siRNA作为一种特异性基因沉默工具可以靶向敲低目的基因,却因系统循环稳定性差、生物膜渗透性低,限制了应用。因此,需要合适的载药系统共同递送药物和siRNA,达到双重靶向治疗的效果。聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)因具有良好的生物相容性、低毒性、可生物降解等优势,常被用作递送药物的纳米载体。细胞膜伪装技术可用于修饰纳米粒子(NPs),使NPs获得了细胞膜所特有的功能和性质,提高生物相容性及靶向性。研究目的:本研究旨在通过仿生纳米载药系统共递送DUT以及针对AR的siRNA(siAR),以局部给药的方式双重靶向治疗AGA,从而达到使毛乳头细胞(DPC)增殖,促进毛发生长的效果,并减少口服DUT所带来的副作用。研究方法:1.DPC的分离、培养及鉴定:显微解剖法结合一步酶消化法进行DPC的分离、提取。通过以下方法进行DPC的鉴定:观察细胞形态,成骨、成脂诱导分化,特异性碱性磷酸酶染色,流式细胞术检测DPC对间充质干细胞标志物的表达,Western blot、RT-PCR、免疫荧光技术对DPC特征性标志物进行鉴定。2.PLGA-DUT/siAR@DPCMNPs 的制备及表征:W/O/W 复乳法制备 PLGA-DUT/siAR NPs;膜挤压法合成毛乳头细胞膜(DPCM)伪装的共载DUT以及siAR 的 PLGA 纳米粒子(PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs)。RT-qPCR 方法对三条备选siAR的敲除效果进行评估,用于确定敲除率最高的siAR。动态光散射(DLS)、透射电镜(TEM)检测 PLGA-DUT/si AR NPs 以及 PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs粒径、电位及形貌。检测纳米粒子中DUT含量,计算DUT载药量和包封率,确定最佳投入比例;检测纳米粒子上清液中siRNA含量,计算siRNA的载药量及包封率。SDS-PAGE凝胶电泳结合考马斯亮蓝染色鉴定细胞膜裂解物及PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs的蛋白质分布。体外释放实验检测不同时间点释放介质中DUT的含量,判断PLGA-DUT NPs以及PLGA-DUT@DPCM NPs体外释放的情况。使用激光共聚焦显微镜(CLSM)进行共定位检测。3.体外实验:CCK8法检测 PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs对DPC增殖作用。流式细胞术、CLSM分别观察DPC对PLGA-FITC NPs和PLGA-FITC@DPCM NPs的摄取情况。Western blot及RT-qPCR检测AR基因沉默效率。皮肤渗透与保留实验中,检测PLGA-DUT NPs及PLGA-DUT@DPCM NPs组在不同时间点,接收室、角质层、毛囊及皮肤组织中的DUT含量。4.体内实验:皮下注射TS构建AGA小鼠模型,分组治疗后通过直观观察及组织病理学检测评估毛发覆盖率、密度和直径;毛发生长指数评估毛发生长情况。对AGA小鼠皮肤组织进行免疫荧光检测来判断目的基因AR的体内沉默效果。体内皮肤渗透实验观察纳米粒子在皮肤中的渗透情况。对主要脏器的组织病理学检测评估纳米粒子安全性。对皮肤组织中Bcl-2、TGF-β2行免疫荧光检测,评估不同组别的毛囊细胞凋亡情况;对皮肤组织中Wnt3a、β-catenin、MMP3行免疫荧光检测,探索毛囊生长相关机制。研究结果:1.DPC的分离、培养及鉴定:成功提取DPC,细胞成活率高,可以正常培养、传代。成骨、成脂诱导分化实验中分别出现矿盐沉积结节以及圆又大的脂滴,对应的染色检测结果均为阳性。随着DPC传代次数增高,碱性磷酸酶染色变浅,DPC活力变低。DPC表达间充质干细胞标志物CD73、CD90、CD105,且表达 DPC 特征性标志物 SOX2、ALP、Versican、α-SMA、Nestin。2.纳米粒子的制备及表征:成功制备PLGA-DUT/siAR NPs和PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs。PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs 形态为均匀分布的核-壳结构;PLGA-DUT/siARNPs 和 PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs 的平均直径分别为157.23 ± 1.16 nm 和 194.83± 3.18 nm;Zeta 电位检测中,PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs与细胞膜囊泡的电位相似。当DUT投入量为0.8mg,PLGA 10mg时,药物包封率较高,达到53.31±0.64%,载药量为6.45±0.12%,纳米粒子中siRNA的包封率为47.1±0.3%,载药量为21.2±0.2μg/10mg。筛选出siAR-2843对目的基因敲除率最高。SDS-PAGE凝胶电泳后染色观察到DPC细胞膜囊泡ICU acquired Infection和PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs具有相似的蛋白质分布。共定位实验可以观察到DPCM、FITC、siRNA三者之间荧光区域重合。体外释放实验PLGA-DUT NPs 累积释放量约 57.35±1.84%,高于 PLGA-DUT@DPCM NPs 的累计释放量(40.54±1.77%)。3.体外实验结果:CCK8实验中,PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs组显示出最高的细胞活性。流式细胞术及CLSM结果均观察到PLGA-FITC@DPCM NPs在两个Imidazole ketone erastin纯度检测时间点的摄取效率高于PLGA-FITC NPs。PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs有良好的基因沉默效率。在渗透与保留实验中,PLGA-DUT NPs组及PLGA-DUT@DPCM NPs组在6h和12h,角质层中的DUT含量相似;PLGA-DUT@DPCM NPs组在6h和12h时在毛囊和皮肤中检测出比PLGA-DUT NPs组更高的DUT含量。4.体内实验结果:PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs组和阳性对照组在直观观察及病理检测中均显示理想的毛发覆盖率、密度和直径,同时有较高的毛发增长指数。免疫荧光染色观察到实验组对AR有明显的敲低效果。体内皮肤渗透实验中荧光已到达真皮层,经过荧光标记的NPs分布在毛囊及周围。主要脏器的组织病理学检测中未观察到明显损伤。另外,免疫荧光观察到PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs组中Bcl-2的表达高于模型组,而TGF-β2表达极少。PLGA-DUT/siAR@DPCMNPs 组中 Wnt3a、β-catenin、MMP3 的荧光强度均高于模型组。研究结论:1.成功分离、培养、鉴定并扩增DPC,利用其制备DPCM,并合成DPCM伪装的共载药物和基因沉默工具的纳米粒子PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs。2.PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs在细胞水平上能被更高效地摄取,缓释后达到促进DPC增殖的效果,且无细胞毒性,可以有效降低DPC中AR表达,同时具有良好的毛囊靶向能力。3.PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs作为一种体外涂抹的药物,可以到达毛囊及周围组织,同时降低给药频率,对AGA动物模型有良好的促进毛发生长的效果。PLGA-DUT/siAR@DPCM NPs可以抑制毛囊细胞凋亡,促进毛发进入生长期,并通过上调Wnt/β-catenin通路发挥作用。

目的:结直肠癌在临床肿瘤中的发病率一直居高不下。目前手术联合局部放疗、全身化疗是治疗结直肠癌的主要治疗方案。尽管放射治疗技术已有所进步,但放射治疗抗性的存在,仍是导致恶性肿瘤患者的转移、复发、放疗失败和预后不良的重要原因。因此,增加放疗敏感性是重要的挑战。溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶-1(Lysophosphatidylcholine acyltransferase 1,LPCAT1)是磷脂代谢途径中此网站的重要酶类物质,在结直肠肿瘤细胞中呈高表达。本研究通过敲低结直肠癌细胞株中LPCAT1基因表达,检测敲低LPCAT1与联合放疗对细胞增殖能力的影响,进而探讨LPCAT1在结直肠癌放疗中的作用及意义。方法:培养结直肠癌细胞SW620、SW480、HCT116,通过聚合酶链式反应(Reverse transcription-PCR,RT-PCR)及Western-blot检测三株细胞中LPCAT1的表达,从中筛选出LPCAT1表达水平较高的结直肠癌细胞系。通过慢病毒转染技术敲低细胞内LPCAT1表达,获得稳定转染的敲低组细胞及阴性对照组细胞。将敲低组及阴性对照组细胞给予6Gy放射线照射处理,获得并设置阴性对照联合放疗组及敲低联合放疗组。采用CCK-8实验检测阴性对照组、敲低组、阴性对照联合放疗组、敲低联合放疗组四组的细胞活率,克隆形成实验进一步检测四组细胞的增殖能力变化并绘制细胞存活曲线。随后采用RT-PCR及Western-blot检测敲低联合放疗组及阴性对照联合放疗组细胞内LPCY-27632细胞培养AT1的相对表达量,以明确在放疗作用后细胞内LPCAT1的表达是否存在变化。为进一步探究敲低LPCAT1联合放疗对结直肠癌细胞放疗敏感性的影响及具体机制,分别收集阴性对照组、敲低组、阴性对照联合放疗组、敲低联合放疗组细胞蛋白样本行蛋白质组学检测及生物信息学分析,筛选与结直肠癌发生发展相关的蛋白,在体外实验中采用RT-PCR进一步验证。所得实验结果数据应用统计软件SPSS 23.0行统计与分析处理,两组间计量资料采用t检验human‐mediated hybridization,多组间比较采用方差分析。结果:1.在结直肠细胞HCT116中LPCAT1的m RNA及蛋白相对含量较高。通过慢病毒转染技术可下调HCT116细胞内LPCAT1的表达,成功构建敲低LPCAT1表达的结直肠癌细胞系。2.与阴性对照组细胞相比,敲低组细胞活率下降,克隆集落减小,增殖能力降低。在敲低LPCAT1联合放疗的作用下,细胞的增殖能力进一步下降(P<0.05)。3.通过检测放疗后细胞内LPCAT1的含量,发现阴性对照组细胞经放射线照射后,LPCAT1的m RNA及蛋白含量下降(P<0.01)。敲低联合放疗组细胞中LPCAT1表达水平进一步减低(P<0.0001)。4.蛋白组学技术分析各组细胞内差异蛋白,将差异表达蛋白进行KEGG功能分类及功能富集分析,筛选出CCNB1作为差异下调关键蛋白。进一步通过RT-PCR验证发现,与阴性对照组相比,阴性对照联合放疗组、敲低联合放疗组细胞内CCNB1的m RNA相对表达量下降(P<0.0001);敲低联合放疗组细胞内CCNB1的m RNA表达量显著低于阴性对照联合放疗组(P<0.01)。结论:1.敲低LPCAT1可抑制HCT116细胞的增殖能力,敲低LPCAT1联合放疗可进一步降低细胞的增殖能力。2.给予结直肠癌细胞行放疗后,可降低细胞内LPCAT1的表达水平。3.敲低LPCAT1后可能通过抑制CCNB1表达而增加结直肠癌细胞的放射敏感性。LPCAT1可能是调控结直肠癌放疗敏感性的潜在靶点。

目的 探究舍曲林联合富马酸喹硫平对抑郁症患者心理状态及睡眠质量的影响。方法 选取2019年5月至2022年12月江西省荣军优抚医院收治的86例抑郁症患者，根据随机数字表法分为对照组（n=43）、观察组（n=43），对照组接受舍曲林治疗，观察组接受舍曲林联合富马酸喹硫平治疗，疗程2个selleck月，比较两组疗Biogents Sentinel trap效；于治疗前、后，比较两组心理状态[汉密尔顿抑郁量表（Erastin供应商HAMD）、焦虑自评量表（SAS）]，睡眠质量[匹兹堡睡眠质量指数（PSQI）]。结果观察组总有效率为95.35%，高于对照组的79.07%，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后，两组HAMD、SAS、PSQI评分均下降，且观察组较对照组低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 舍曲林联合富马酸喹硫平治疗抑郁症患者能够提高治疗效果，改善心理状态，提高睡眠质量。

目的:为了有效选择粪菌移植的保护剂,本研究对初筛后的粪菌移植中的保护剂进行了一个系统评价。方法:不同配方的保护剂进行初筛,先对含有10种不同配方保护剂的供体菌群在冷冻制备和冻干制备后并储存1个月时运用平板计数方法进行活菌检测。接着,含有初筛后的不同配方保护剂的供体菌群在冷冻制备和冻干制备后并储存2个月时,运用平板计数、CCLaduviglusib供应商K8、细菌死活染色后流式细胞检测及荧光强度检测技术等方法进行体外活菌检测。另外,在不同的制备条件下,将含有初筛后的不同配方保护剂的供体菌群移植到抗生素处理后的SPF级小鼠中,每组3只,共5组,移植后第14天的收集粪便进行宏基因组测序以观察在受体小鼠体内菌群定植情况。结果:(1)初筛的实验结果表明:5%海藻糖保护剂肠道菌群存活率(F2组85.33%,FD2组85.65%)和5%蔗糖+5%菊粉+1%半胱氨酸盐酸盐复合保护剂组肠道菌群存活率(F3组84.65%,FD3组84.45%)粪菌液样品中的细菌存活率高于无保护剂组肠道菌群存活率(F0组30.50%,FD0组28.33%),并且Hospital infection比其他组的保护剂存活率稍高,则从初筛的结果中筛选出最有潜力的两种保护剂分别是5%海藻糖保护剂和5%蔗糖+5%菊粉+1%半胱氨酸盐酸盐复合保护剂;(2)初筛后的保护剂进行多种活菌检测方法均得到同一个相似的结果趋势:在不同条件的粪菌移植样品制备中,含有5%海藻糖保护剂(T)和5%蔗糖+5%菊粉+1%半胱氨酸盐酸盐复合保护剂(SI)的肠道菌群存活性均显著高于未含有保护剂的肠道菌群活性(P<0.05),并且保护细菌活性的能力与10%甘油保护剂效果相当,并且SI比T有更能保护厌氧LXH254体内实验剂量菌的趋势。(3)对含有初筛后的供体菌群的保护剂进行移植到受体小鼠体内,受体小鼠内的肠道菌群α多样性、PCOA、与供体菌群的相关性分析(F2A和L2A的Pearson相关系数分别为0.75和0.78)以及菌群构成的结果均显示所有含有保护剂的供体菌群均可有效在受体小鼠体内定植,并且含有SI保护剂的供体肠道菌群在受体小鼠体内菌群定植效果更佳。初筛后不同配方的保护剂对受体小鼠体内定植后的益生菌菌株的保护能力具有物种特异性,以及对受体小鼠体内菌群代谢功能保护能力的同样具有特异性。结论:(1)在众多的粪菌移植保护剂的初筛中,5%海藻糖保护剂(T)与5%蔗糖+5%菊粉+1%半胱氨酸盐酸盐复合保护剂(SI)最具有活性潜力。(2)初筛后的不同配方保护剂基于肠道菌群体外活性检测以及移植到小鼠体内后定植的分析这2方面进行了一个系统评价。在进行冷冻或冻干粪菌移植样品制备时相比于5%海藻糖保护剂(T),5%蔗糖+5%菊粉+1%半胱氨酸盐酸盐复合保护剂(SI)既可以更好保护肠道中厌氧菌活性又能有效促进供体肠道菌群在受体小鼠体内菌群有效定植,亦有潜力提高粪菌移植产品的最终疗效,有利于粪菌移植疾病治疗作用的发挥,其实验结果可在粪菌移植样品制备中的保护剂选择起到一个参考作用。

为了解绵羊巨噬细胞清道夫受体1（Macrophage Scavenger Receptor 1，MSR1）基因的生物学信息特征，本研究对绵羊MSR1进行了克隆鉴定，与其他物种的MSR1氨基酸序列进行比对、构建进化树，并https://www.selleck.cn/products/ve-822.html进行生物信息分析，预测了MSR1的理化性质。结果显示：绵羊MSR1基因ORF区全长1 362 bp，编码453个氨基酸，分子量约为50 khelminth infectionDa，构建了MSR1真核表达载selleck INCB28060体；绵羊MSR1与山羊、羚羊、马鹿、水牛、白鲸、野猪、人、家兔、小鼠的同源性分别为98.90%、96.03%、93.16%、93.16%、81.28%、78.81%、74.17%、73.51%、63.77%，同属于牛科动物的序列同源性在90%以上，进化树上在同一分支；该蛋白分子式为C_(2188)H_(3473)N_(629)O_(680)S_(19)，理论等电点为6.00，蛋白质性质为弱酸性，51～73号氨基酸为跨膜结构，有7个潜在的糖基化位点和多个磷酸化位点，存在2个棕榈酰化位点和5个乙酰化位点，169～180位氨基酸序列区域为优势抗原决定簇。这为以后研究绵羊MSR1的功能奠定了基础。

目的 制备并评价类风湿关节炎伴发抑郁症动物模型。方法 32只大鼠随机分为正常组(N组)、抑郁组(D组)、关节炎组(RA组)、模型组(RAD组),每组8只。N组正常饲养，D组施加1周孤养与3周慢性不可预知温和刺激(chronic unpredictable mild stress, CUMS),RA组予胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)方法建立关节炎模型，RAD组在建立CIA动物模型基础上施加1周孤养与3周CUMS建立RAD动物模型。通过观测大鼠足趾容积、关节炎指数(arthrits index, AI),滑膜、踝关节病理和血清白介素-1β(interleukin-1β,IVX-661采购L-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平评价大鼠类风湿关节炎模型是否制备成功；通过测定体重、摄食量、糖水偏好率、旷场行为学(运动总格数、直立次数),血清促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone, CRHBaf-A1化学结构)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone, ACTH)、皮质酮(corticosterone, CORT)水平及海马病理变化评价大鼠抑郁状态。模型大鼠同时符合上述抑郁状态与类风湿关节炎相关指标检测，则表明RAD动物模型制备成功。结果 与N组比较，RA组与RAD组大鼠足趾容积、AI评分及血清IL-1β、IL-6水平显著增加(P<0.05),关节间隙增宽，滑膜增生明显并延伸至关节腔，可见大量炎细胞浸润，D组与RAD组大鼠体重、摄食量、运动总格数、直立次数、糖水偏好率有不同程度降低，血清CRH、ACTH、CORT水平有不同程度升高，神经元细胞减少，伴有部分细胞核萎缩，模型组尤为明显(P<0.05)。结论 胶原诱导性关节炎联合孤养与CUMBiological data analysisS可较好地模拟RAD模型动物外在表现与内在指标变化，可为RAD疾病的研究提供动物模型参考。