猪流行性腹泻病毒nsp8蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

复制/转录复合物（RTC）在冠状病毒复制过程中具有重要作用。猪流行性腹泻病毒（PEDV）的非结构蛋白8(nsp8)参与病毒RTC的形成。因此，可将nsp8作为RTC的检测标志之一。为获得PEDV nsp8蛋白并制备其多克隆抗体，本研究通过同源重组的方法将PEDV nsp8基因与质粒behavioural biomarkerpET-28a（+）连接。将重组质粒pET-28a-nsp8转化至大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达。用镍柱纯化6His-nsp8蛋白并对其进行复性，然后用凝血酶酶切去除his标签，得到纯化的nsp8蛋白。SDS-PAGE结果显示，重组nsp8蛋白大小为27 ku。以纯化的nsp8蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。Western-blot结果表明，本研究制备的家FUT-175分子量兔抗nsp8多克隆抗体可与nsp8蛋白反应。用该多克隆抗体进行间接免疫荧光（IFA）试验，可在PEDV感染细胞的细胞核周围观察到明显的荧光，表明nsp8多克隆抗体可用于selleck产品病毒RTC的检测。上述研究结果为冠状病毒RTC的形成机制及其功能研究奠定了基础。