肾阴虚证是中医常见证候,临床多表现为咽干口燥、失眠多梦、腰膝酸痛等,现代医学认为肾阴虚证与神经内分泌免疫网络密切相关。固本延龄丸源于明代《万病回春》,具有固本培元、滋阴补髓等功效,由28味药材组成,以人参和柏子仁为君药,其中人参挥发油具有抗衰老、镇静、抗肿瘤等药理作用,柏子仁挥发油有镇静催眠的功效。臣药石菖蒲、木香、五味子late T cell-mediated rejection等也具有丰富的挥发性成分,药理作用广泛。目前未有关于固本延龄丸挥发性成分以及药理作用的文献研究。为了固本延龄丸的进一步开发和利用,本课题建立了固本延龄丸气相色谱质谱(GC-MS)指纹图谱,通过复制肾阴虚证大鼠模型对其补肾阴药理作用进行研究,同时构建固本延龄丸补肾阴的谱效关系确定其补肾阴的药效物质。本课题的主要研究内容如下:1、固本延龄丸挥发性成分与GC-MS指纹图谱研究建立固本延龄丸GC-MS指纹图谱,并进行方法学验证,结果表明该方法精密度、稳定性和重复性均符合要求,可用于建立固本延龄丸指纹图谱。通过NIST库相似度检索结合Kovat’s保留指数法对其挥发性成分进行鉴别分析,共鉴定了67种成分。以β-细辛脑为参照峰,共标定了42个特征共有峰,20批固本延龄丸指纹图谱与对照指纹图谱相似度在0.672～0.954之间。采用正交偏最小二乘判别分析法分析20批固本延龄丸的指纹图谱,可明显区分大蜜丸和小蜜丸,并确定了11个差异性成分,其中6个被鉴定,分别为峰1(己酸)、2(2,5-二甲酰呋喃)、3(呋喃基羟基甲基甲酮)、4(麦芽酚)、5(3,5-二羟基-2-甲基-4-吡喃酮)和15(β-细辛脑)。2、固本延龄丸补肾阴药效作用研究采用灌胃氢化可的松的方式建立肾阴虚证大鼠模型,以体重、肛温、血清激素水平(皮质醇、甲状腺素)以及睾丸的病理组织切片作为评价指标,以常用于治疗肾阴虚的六味地黄丸作为阳性对照药物,探讨了5个批次的固本延龄丸的补肾阴药效作用。与空白对照组相比,肾阴虚模型大鼠出现毛色枯黄、体质量增长减慢、肛温升高等现象,血清皮质醇和甲状腺素水平显著升高,睾丸组织切片中观察到各级生精细胞排列紊乱、部分曲细精管明显坏死等病理变化,表明肾阴虚大鼠模型建立成功。与模型组相比,各批次固本延龄丸能显著升高体重增长率(P<0.01或Gefitinib0.05),显著降低血清皮质醇、甲状腺素水平和肛温(P<0.01GSK126 molecular weight或0.05),可使睾丸组织结构向正常水平调节,表明固本延龄丸对氢化可的松所致大鼠肾阴虚证有改善作用。该研究为探讨固本延龄丸补肾阴作用机制提供了理论基础。3、固本延龄丸补肾阴药效物质基础研究首先考察了谱效关系研究中使用较多的数据分析方法,结合各方法的优缺点以及本实验的实际情况,选择联用灰色关联度分析(GRA)和偏最小二乘回归分析(PLSR)方法,建立5个批次的固本延龄丸GC-MS指纹图谱的42个特征峰峰面积与3个补肾阴药效学指标(体质量增长率、皮质醇、甲状腺素)间的谱效关系,筛选出对补肾阴药效作用贡献较大的色谱峰。综合GRA和PLSR分析结果,表明峰9(顺式甲基异丁香酚)、峰18(未知)、峰21(β-木香醇)、峰27(未知)、峰28(β-环木香烯内酯)、峰39(铁锈醇)、峰41(未知)与补肾阴药效作用关联较大且呈正相关,很可能是固本延龄丸补肾阴的药效物质基础。