背景胃癌是胃肠道最常见的恶性肿瘤之一Y-27632细胞培养,大量证据表明长链非编码RNA(Long non-coding RNAs,lncinappropriate antibiotic therapyRNAs)在胃癌(Gastric cancer,GC)中具有重要的调控作用。1 号染色体上的局部扩增 lncRNA(Focally amplified lncRNA on chromosome 1,FALEC)是一种新的lncRNA,已在甲状腺癌,大肠癌和子宫内膜癌等中反复被报道具有致癌效应,而其在胃癌细胞的增殖、凋亡、自噬selleck STM2457中的作用和机制尚不清楚。因此,本研究旨在探讨lncRNA FALEC在胃癌发生过程中的作用及其机制。方法1.采用qRT-PCR法检测FALEC在20对胃癌和癌旁组织及GC细胞中的表达水平。2.用 FALEC siRNA 转染 GC 细胞,通过 CCK8 检测法、Annexin-VFITC/PI 双染法、transwell迁移及侵袭实验、透射电镜、Western blot、免疫荧光检测干扰FALEC对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移侵袭和自噬的影响。3.通过StarBase数据库筛选FALEC的潜在靶miRNA,用qRT-PCR法验证FALEC与靶miRNA表达水平之间的相关性,用双荧光素酶报告基因检测确定二者的相互作用。4.对胃癌细胞NCI-N87转染miR-203b模拟物和过表达FALEC,通过上述2中的方法检测过表达miR-203b和同时过表达miR-203b及FALEC对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭和自噬的影响。5.通过TargetScan数据库筛选miRNA-203b的潜在靶基因。用免疫组化、Western blot、qRT-PCR方法检测靶基因PIM3在胃癌和癌旁组织中的表达情况。6.用 FALEC siRNA 转染 GC 细胞,通过 Western blot 检测 PIM3 与 miR-203b和FALEC表达水平的关系,通过双荧光素酶报告基因实验检测PIM3与miR-203b之间的相互作用。7.为了确定PIM3是否参与FALEC/miR203b对胃癌细胞功能的调控,我们通过上述2中的方法检测了 miR-203b过表达、miR-203b和PIM3同时过表达,以及miR-203b、PIM3、FALEC三者同时过表达对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移侵袭和自噬的影响。8.除了体外实验,我们还构建了裸鼠胃癌异种移植瘤模型进行了体内实验。用qRT-PCR检测了移植瘤组织中FALEC、miR-203b和PIM3的表达水平。通过HE染色法评估移植瘤的分化情况,用免疫组化检测移植瘤中PIM3的表达水平。用Western blot检测了移植瘤中PIM3和自噬相关蛋白P62和Beclin 1的表达水平。用透射电镜检测移植瘤中的自噬情况。结果本研究结果显示,FALEC在GC组织和细胞NCI-N87中表达明显升高。敲低FALEC在体外可以抑制GC细胞的生长、迁移、侵袭,诱导凋亡及自噬。在GC中,FALEC可以靶向调控miR-203b,二者的表达水平呈负相关,miR-203b在GC组织中低表达。MiR-203b可以抑制GC细胞NCI-N87的增殖、迁移和侵袭能力,促进其凋亡及自噬,而过表达FALEC可以部分逆转miR-203b对GC细胞的调控作用。更进一步,我们发现在GC中,PIM3是miRNA-203b的靶基因,二者的表达水平呈负相关,而PIM3的表达水平与FALEC呈正相关。PIM3在GC组织和GC细胞NCI-N87中高表达。MiR-203b的过表达可以抑制胃癌细胞NCI-N87的增殖、迁移和侵袭能力,促进其凋亡和自噬,而PIM3的过表达可以逆转miR-203b的作用,FALEC过表达又可以加强PIM3的逆转作用。更进一步,我们进行了体内实验,结果显示敲低FALEC显著降低了 GC细胞NCI-N87中FALEC和PIM3的表达水平,而升高了miR-203b的表达水平。在体内,敲低FALEC可抑制GC细胞NCI-N87的生长,促进自噬,其在小鼠体内形成的肿瘤分化良好。总的来说,我们的体内外实验结果一致显示,FALEC可通过miR-203b上调PIM3,FALEC是通过调控miR-203b/PIM3轴而促进GC的恶性行为。结论1.FALEC在GC组织和细胞中高表达,体外、体内实验均证实敲低FALEC可以抑制GC细胞的生长、迁移、侵袭,诱导凋亡及自噬,FALEC表现出癌基因的功能,可能与GC的发生发展密切相关。2.FALEC是通过调控miR-203b/PIM3轴促进GC的恶性行为,FALEC/miR-203b/PIM3轴可能成为治疗胃癌患者有希望的新靶点。