犬副流感病毒F基因原核表达及多克隆抗体的制备

本研究利用原核表达系统表达犬副流感病毒（CPIV）F蛋白，并制备CPIV-F蛋白多克隆抗体。依据CPIV SH2021株F基因设计引物，扩增获得去除信号肽的F基因片段，并构建了重组表达质粒pET-42a-CPIV-F，经测序验证正确后转化至大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导表达重组蛋白，并优化了BIBW2992临床试验诱导剂浓度及诱导时间。采用包涵体粗纯化法对重组CPIV-F蛋白进行纯化，并测定了重组蛋白浓度。用纯化的重组CPIV-F蛋白制备其兔源多克隆抗体，通过Western blot和ELISA鉴定了多克隆抗体特异性和效价。结果显示，试验成功构建pET-42a-CPIV-F原核表达质粒并表达出重组CPIV-F蛋白。SDS-PAGE法和anti-infectious effectWestern blot结果表明，重组CPIV-F蛋白可在大肠杆菌中的表达，大小约为89kDa。优化后的IPTG终浓度为1 mmol/L，诱导4h表达量最大，重组蛋白浓度为2.3 mg/mL。Western blot结果表明兔抗CPIV-F抗体可以与重组蛋白发生特异性反应。间接ELISA测得兔抗CPIV-F蛋白多克隆抗体效价为1:102 400。本研究制备的兔源多克隆抗体特异和高效，表明F蛋白具有良好的免疫原性，为进一步研究CPIV F蛋白的生物学功能及建立相关的免疫学检测方法奠定确认细节了基础。