目的:探讨USPs家族成员USP3在胆管癌中的作用,USP3可以通过促进胆管癌细胞的糖酵解激活Wnt/MYC途径,并通过与MYC结合抑制其泛素化水平,最终促进胆管癌的增殖和侵袭性转移。以证实USP3可能是胆管癌的潜在预后标志物,并能够调节癌细胞的生存和侵袭性,有望成为治疗胆管癌的一个新的分子靶点。方法:选取2015年7月至2022年5月在海南医genetic ancestry学院第一附属医院采集临床样本,共采集45对胆管癌组织和相应的正常组织。所有的手术标本都被冷冻并储存在-80℃下进行进一步的RNA和蛋白质分析,并嵌入蜡块中进行后续的IHC实验。统计学分析:使用Graph Pad Prism 8.0(Graph Pad Software,La Jolla,CA,USA)分析并呈现数据。使用SPPS-341体内实验剂量SS软件构建Kaplan-Meier生存曲线。通过t检验分析两组之间的统计差异,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1)USP3高表达的胆管癌患者预后较差,两种胆管癌细胞中USP3的表达均高于正常胆管上皮细胞。2)敲除USP3表达可显著抑制胆管癌细胞的增殖能力和侵袭与迁移能力。3)敲除USP3后,肿瘤代谢中的糖酵解途径发生了显著改变,胆管癌细胞的葡萄糖摄取显著降低。此外,胆管癌细胞中的乳酸浓度和ATP浓度亦显著降低。因此,降低USP3的表达水平可以显著降低肿瘤细胞的糖酵解能力,GLUT1、HK2、PDM2和LDHA靶基因的表达下调。4)裸鼠成瘤实验,与对照组相比,USP3基因敲除后癌细胞的增殖能力显著降低,皮下成瘤实验显示肿瘤体积和肿瘤重量均显著减少。实验组的增殖相关指数Ki67、PCNA、GLUT1、HK2、PKM2和LDHA显著降低。5)USP3过度表达,MYC的泛素化水平显著增加,而USP3敲低或过度表达后MYC m RNA没有显著变化。USP3显著激活了Wnt/MYC信号通路的活性,促进了Cyclin D1、c-Myc、VEGF和Survivin的m RNA表达。6)敲除MYC或添加MYC抑制剂逆转了USP3过表达诱导的胆管癌细胞增殖和侵袭性转移。,USP3的过表达可以促进细胞内葡萄糖摄取和乳酸生成,并促进细胞内糖酵解,该过程可以通过敲除MYC或添加抑制剂来逆转。类似地,观察到细胞内产生的ATP也有相同的趋势,其主要代谢相关靶基因GLUT1、HK2、PKM2和LDHA的m RNA水平在USP3过表达后IACS-010759上调,而在MYC敲除或添加抑制剂后下调。结论:USP3高表达的胆管癌患者预后较差,降低USP3表达可显著抑制肿瘤细胞的增殖能力和侵袭与迁移能力。敲除USP3基因后,胆管癌细胞的葡萄糖摄取显著降低,表明USP3促进肿瘤细胞的糖酵解,提高能量生产,上调肿瘤内代谢GLUT1、HK2、PDM2和LDHA靶基因的表达,从而促进肿瘤生长。