目的:本实验通过建立单侧输尿管梗阻(Unilateral ureteral occlusion,UUO)大鼠模型,观察萆薢分清颗粒对UUO大鼠24h尿蛋白定量、尿微量白蛋白/肌酐比值(ACR)、血清肌酐、血清尿素氮、血清IL-6浓度、肾脏病理以及肾组织PI3K、NF-κB表达的变化,从分子生物学角度探讨萆薢分清颗粒对UUO大鼠肾纤维化的影响及其作用机制,为萆薢分清颗粒应用于临床治疗肾纤维化提供实验依据。方法:选取60只SPF级SD雄性大鼠,适应性喂养1周后,随机分为6组,空白组(10只)、模型组(10只)、氯沙坦组(10只)、萆薢分清颗粒高剂量组(10只)、萆薢分清颗粒中剂量组(10只)、萆薢分清颗粒低剂量组(10只)。除空白组外,其余5组均采用左侧输尿管结扎法建立肾纤维化模型。于术后次日开始灌胃给药,萆薢分清颗粒高、中、低剂量组及氯沙坦组给予对应的药物灌胃,空白组、造模组均按1m L/100g体质量蒸馏水灌胃,治疗4周,治疗期间观察大鼠一般状态,4周后使用提尾采尿法收集大鼠随机尿液,用于检测ACR;将大鼠放入代谢笼内,自由饮水,禁食,收集24小时尿液,用于24小时尿蛋白定量检测;经腹主动脉取血,用于检测尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)生化指标以及IL-6浓度;并留取肾脏标本,采用HE、Masson染色方法观察肾脏组织病理变化;免疫组化法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PI3K、NF-κB在UUO大鼠肾脏中的表达,用ELISA方法检测血清炎性因子IL-6浓度。结果:1.大鼠一般状态:与空白组相比,各造模组大鼠逐渐出现精神差,活动减少,摄食量减少,毛发逐渐变干枯并伴有脱落等表现,其中,模型组大鼠最为显著。药物干预4周后,各治疗组大鼠一般状态较模型组均有不同程度的改善。2.24h尿蛋白定量:与空白组相比,模型组、萆薢分清颗粒各治疗组与氯沙坦组大鼠24h尿蛋白定量均有不同程度的升高(P<0.05);与模型组相比,萆薢分清颗粒高、中剂量组与氯沙坦组24h尿蛋白定量水平均有不同程度的降低(P<0.05);而模型组与萆薢分清颗粒低剂量组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。3.ACR水平:与空白组相比,模型组ACR值明显升高(P<0.05);萆薢分清颗粒高、中剂量组和氯沙坦组与模型组相比,ACR值均有不同程度的下降(P<0.05);而萆薢分清颗粒低剂量组与模型组相比(P>0.05),差异无统计学意义。4.生化指标:与空白组相比,模型组与各治疗组Scr、BUN均明显升高(P<0.05);各治疗组分别与模型组比较,Scr、BUN水平均有不同程度下降(P<0.05),与萆薢分清颗粒高剂量组相比,中、低剂量组Scr、BUN水平较高(P<0.05),表明随着萆薢分清颗粒药物浓度的升高,降低Scr、BUN的效果越好,保护肾功能的作用越强。5.HE、Masson染色后各组大鼠肾组织病理变化HE染色后病理结果示:空白组肾组织结构完整,染色清晰,肾小球正常,肾小管清晰可见;与空白组相比,模型组肾小管萎缩,结构破坏严重并伴有空泡变性,间质纤维细胞增生并可见大量炎性细胞,肾小球结构破坏固缩;与模型组相比较,各治疗组损伤相对减轻,氯沙坦组和高剂量组效果最好,中剂量组肾小球结构破坏较严重,肾小管结构紊乱,可见少量炎性细胞,低剂量组治疗效果较差,除无空泡变性外与模型组无明显差异。Masso更多n染色后病理结果示:在光学显微镜下分析样本,红色为肌纤维,蓝色为胶原纤维,胶原纤维代表纤维化的程度,可以观察到空白组中蓝色胶原纤维表达较少,表明空白组纤维化较少,而模型组中有较多蓝色胶原纤维表达,表明模型组中纤维化较严重,药物治疗组均有不同程度的蓝色着色占比逐渐降低,且萆薢分清颗粒治疗组随着药物剂量的增加,蓝色着色占比也逐渐降低,表明纤维化程度亦在逐渐减轻。6.免疫组化结果示:与空白组相比,模型组与各药物干预组PI3K、NF-κB表达均明显升高(P<0.05);与模型组相比,各药物治疗组PI3K、NF-κB表达均明显下降(P<0.05),且萆薢分清颗粒高剂量组PI3K、NF-κB表达显著低于中、低剂量组(P<0.05)。7.Western blot检测结果示:与空白组相比,模型组与各药物干预组大鼠PI3K、NF-κB表达强度升高(P<0.05);与模型组相比,各药物干预组PI3K、NF-κB表达强度均降低(P<0.05);且萆薢分清颗粒高剂量组PI3K、NF-κB表达显著低于中药中、低剂量组(P<0.05)。8.ELISA结果示:与空白组相比,模型组与各药物干预组大鼠血清中的IL-6浓度均出现不同程度升高(P<0.05);与模型组相比,各药物干预组的IL-6浓度均出现不同程度下降(P<0.05);且萆薢分清颗粒高剂量组的IL-6浓度显著低于萆薢分清颗粒中、低剂量组(P<0.05)。结论:1.萆薢分清颗粒能够改善UUO大鼠一般状态,降低血清肌酐及血清尿素regeneration medicine氮水平,减少尿蛋白排泄量、保护肾功能,减轻肾脏病理损害。2.萆薢分清颗粒通点击此处过下调UUO大鼠肾组织中PI3K、NF-κB表达,降低血清IL-6浓度,可以显著减轻肾组织损伤,炎性细胞浸润,从而减缓肾脏纤维化进程。