背景真菌性角膜炎(Fungal keratitis,FK)是一类严重的角膜感染性疾病,当发生真菌感染时,C型凝集素受体可以参与识别真菌病原体,并介导宿主产生免疫反应。但树突状细胞相关性C型凝集素-2(Dendritic cell-associated C-type lectin-2,Dectin-2)受体介导角膜组织参与免疫应答的作ABT-199体外用机制尚不清楚。目的探究C型凝集素受体中Dectin-2受体在真菌性角膜炎中的表达,以及Dectin-2受体对真菌感染性角膜炎免疫调控的机制,了解Dectin-2受体在角膜组织识别和防御真菌方面的作用。方法选取50只清洁级、C57BL/6健康小鼠,雌性、6-8周龄,体重在1Torin 1半抑制浓度5-22g之间,经裂隙灯显微镜检查眼部角膜组织均未发现结构和功能的病变。将小鼠随机分为三组:真菌性角膜炎组、损伤对照组、空白对照组。其中取40只用于建立真菌性角膜炎组和损伤对照组的模型;10只用于空白对照组,不予任何处理。取右眼作为白色念珠菌实验组,左眼作为损伤对照组。采取角膜划痕法建立小鼠白色念珠菌感染角膜炎的模型。损伤对照组仅使用29G针头损伤小鼠角膜,施以等剂量的生理盐水。建模1d、2d、3d、5d后于裂隙灯显微镜下观察并拍照记录小鼠角膜感染真菌后变化情况。依据上述时间处死小鼠,取各组角膜组织用于后续的实验中。其中取空白对照组1只(2眼)用于苏木精—伊红染色进行病理学观察,1只(2眼)用于免疫组化法检测小鼠角膜组织中Dectin-2受体的表达;真菌性角膜炎组和损伤对照组每次取1只(1眼)用于HE染色进行病理学观察,每次取1只(1眼)用于免疫组化法检测小鼠角膜组织中Dectin-2受体的表达,每次取4只(4眼)用于Real-time PCR和Western blot,分别检测角膜组织Dectin-2受体、IL-1β、CARD9的mRNA及蛋白表达情况。结果1.小鼠真菌感染模型的形态学及HE染色结果小鼠采取角膜划痕法可成功建立白色念珠菌感染的角膜炎模型。裂隙灯显微镜观察结果显示空白对照组角膜结构完整、无水肿。损伤对照组角膜在第一天有轻微水肿,后续时间可逐渐恢复至正常。真菌性角膜炎组角膜可观察到角膜出现白色溃疡灶、边界欠清晰、角膜病灶区透明度降低、毛玻璃样浑浊等现象,后期感染逐渐缓解,角膜透明度恢复。病理学结果显示空白对照组和损伤对照组角膜结构完整、无水肿与炎症细胞浸润的现象,真菌性角膜炎组可见溃疡处角膜上皮前弹力层缺失,基质层有中性粒细胞浸润。2.Real-time PCR结果空白对照组检测不到Dectin-2受体和CARD9mRNA表达,IL-1βmRNA相对表达量较低;损伤对照组和真菌性角膜炎组均有Dectin-2受体、IL-1β、CARD9mRNA的表达。不同时间点,损伤对照组Dectin-2受体、IL-1β、CARD9mRNA的相对表达量无明显变化;在真菌性角膜炎组Dectin-2受体mRNA的表达量明显上升,在3d达到高峰,各时间点与损伤对照组相比具有统计学意义(p<0.05)。在真菌性角膜炎组中IL-1β、CARD9 mRNA表达同样升高,在3d到达高峰,随时间推移逐渐降低,各时间点与损伤对照组相比差距具有统计学意义(p<0.05)。3.Western blot结果不同时间点与损伤对照组相比,真菌性角膜炎组Dectin-2受体、IL-1β、CARD9蛋白表达medicinal and edible plants量明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05)。4.免疫组化结果Dectin-2受体在空白对照组基本不表达,真菌性角膜炎组Dectin-2受体主要表达在角膜上皮。结论Dectin-2受体在白色念珠菌刺激后可引起表达上调,Dectin-2受体的表达量可能和炎症反应的应答程度密切关联。Dectin-2受体作为模式识别受体可能参与小鼠真菌性角膜炎的固有免疫反应。IL-1β存在于正常小鼠角膜组织中,且在白色念珠菌刺激后表达上调,可能参与真菌性角膜炎角膜组织炎症反应。CARD9在白色念珠菌刺激后表达上调,可能参与真菌性角膜炎角膜组织炎症反应。