卵巢透明细胞癌(Ovarian Clear Cell Carcinoma,OCCC)发病率位居所有卵巢癌组织学亚型的第2位,仅次于卵巢高级别浆液性癌。OCCC因分子生物学特征独特、对一线铂类化疗药物不敏感、晚期患者远期预后较其他亚型卵巢癌更差,被视为最棘手的癌症之一,且目前尚未发表获得专家共识的OCCC化疗指南。银莲花素A(Raddeanin A,RA)是从多被银莲花的根茎中分离得到的一种齐墩果烷型三萜皂苷。在多种癌症中,RA已被证明可以抑制癌细胞生长并促进凋亡,如宫颈癌、乳腺癌、肝癌、胃癌和非小细胞肺癌等。此外,RA还可以提高胆管癌、前列腺癌对化疗药物的敏感性,逆转耐药绒毛膜癌的耐药性。因此,我们有理由猜测,RA可以作为治疗OCCC的潜在药物。然而,既往研究表明RA在体内半衰期短、生物利用度低,且皂苷类药物已被证实有导致体重降低、毛发脱落、肝脏损伤等潜在生物毒性。脂质体(Liposome)是最早兴起的纳米材料之一,能有效延长药物在体内的半衰期、提高药物稳定性、降低药物的生物毒性,且可以利用肿瘤组织的增强渗透和滞留效应实现药物的被动靶向。聚乙二醇(Polyethylene Glycol,PEG)无毒、无抗原性及免疫原性,能让脂质体结构更稳定且不易被网状内皮系统捕获。因此,聚乙二醇脂质体又被称为长循环脂质体、隐形脂质体。目前已有数十种聚乙二醇脂质体药物经批准应用于临床治疗。故本研究选择聚乙二醇脂质体包裹RA以改善其应用缺陷。本课题利用薄膜分散法构建长循环脂质体银莲花素A(RA-PEG-LPs),并对其表征进行鉴定。随后选用人OCCC细胞系ES-2,构建裸鼠皮下移植瘤模型,研究RA和RA-PEG-LPs在体内外的抑瘤作用,并对其生物安全性进行评价。结果如下:1、RA-PEG-LPs的制备与表征以RA为模型药物、以氢化大豆磷脂和胆merit medical endotek固醇为膜材料、以DSPE-PEG_(2000)为修饰材料,用薄膜分散法合成RA-PEG-LPs。RA-PEG-LPs的水合粒径为173.5±15.3 nm,在p H 7.4的PBS中粒径稳定。其在p H6.8、p H7.4的PBS中均有缓释作用,72h释放量可分别达到59.2±5.5%、39.7±1.9%。2、RA和RA-PEG-LPs体外抑瘤作用的评价选用ES-2为模型细胞,通过细胞内吞定量实验证明随着时间增加ES-2细胞在不断摄取RA-PEG-LPs。细胞毒性实验证明RA和RA-PEG-LPs以时间和剂量依赖的方式抑制ES-2细胞生长。细胞凋亡实验证明RA和RA-PEG-LPs以时间和剂量依赖的方式促进ES-2细胞凋亡。WB结果提示RA和RA-PEG-LPs上调ES-2细胞中Bax和Grim19蛋白的表达,下调Bcl-2和Stat3蛋白的表达。3、RA和RA-PEG-LPs体内抑瘤作用的评价利用雌性BALB/c裸鼠构建ES-2皮下移植瘤模型。与对照组相比,RA和RA-PEG-LPs均可抑制肿瘤生长,且RA-PEG-LPs抑瘤效果更明显。肿瘤组织HE染色及TUNEL染色证明RA和www.selleck.cn/products/CP-690550RA-PEG-LPs均可促进肿瘤细胞凋亡,且RA-PEG-LPs促凋亡效果更明显。WB结果提示RA和RA-PEG-LPs上调肿瘤组织中Bax和Grim19蛋白的表达,下调Bcl-2和Stat3蛋白的表达。4、RA和RA-PEG-LPs生物安全性的评价RA组裸鼠体重相比对照组及RA-PEG-LPs组显著下降。RA组血清肝功指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰基转移酶)相比对照组及RA-PEG-LPs组显著升高,提示RA存在肝脏毒性。RA组肝脏组织HE染色出现显著细胞水肿、细胞核固缩及溶解,马松染色出现显著肝脏纤维化;而对照组、RA-PEG-LPs组血液生化指标及组PF-02341066小鼠织器官染色均未出现明显病理改变。上述结果说明RA-PEG-LPs可有效缓解RA的药物毒副作用。综上所述,本课题选用的RA模型药物在体内外均可有效治疗OCCC。制备的RA-PEG-LPs粒径大小合适、性质稳定,体内抑瘤效果优于RA,更重要的是,RA-PEG-LPs可以有效缓解RA给生物体带来的体重减轻、肝脏损伤的毒副作用。