目的:本研究拟通过建立哮喘动物模型,探讨1,25二羟基维生素D3对NLRP3炎症小体活性及其下游炎症因子的影响。方法:选取24只SPF级别Balb/c雌性小鼠,体重为20±2g,随机分为3组:正常对照组(NC组)、哮喘组(OVA组)、1,25二羟基维生素D3干预组(OVA+VD3组),每组8只小鼠。将首次腹腔注射致敏规定为造模第1天,致敏阶段,OVA组和OVA+VD3组均以0.2ml卵清蛋白混合液(50μg卵清蛋白+4mg氢氧化铝凝胶)为致敏剂,于第1、8、15天腹腔注射致敏,而NC组小鼠腹腔注射等量生理盐水;激发阶段,即第22-28天,OVA组及OVA+VD3组小鼠每天予以1次1%卵清蛋白雾化30min,NC组小鼠同等时间雾化等量的生理盐水1次,并且OVA+VD3组在每次雾化激发前30mECOG Eastern cooperative oncology groupin腹腔注射4μg/kg的1,25二羟基维生素D3混合液,OVA组及NC组每次雾化前同等时间腹腔注射等量生理盐水。末次激发12小时后处死小鼠进行取材。HE染色及PAS染色观察各组小鼠肺组织病理变化。免疫组织化学染色观察小鼠肺组织中NLRP3、Caspase-1蛋白表达及部位,同时用Western blot法检测各组小鼠肺组织NLRP3、Caspase-1蛋白的表达水平。ELISA法检测各组小鼠肺泡灌洗液中炎症因子IL-18、IL-1β的释放。分析NLRP3和Caspase-1表达的相关性,并分析两者与肺泡灌洗液中炎症因子IL-18、IL-1β水平的相关性。结果:1.行为学观察:致敏阶段,各组小鼠饮食、活动行为、毛色及体重无明显变化;激发阶段,OVA组小鼠出现呼吸频率增快、烦躁不安、直立弓背挠鼻及点头样呼吸等表现,雾化结束1h后上述表现可缓解,随着激发次数的增多,小鼠在雾化激发后逐渐出现毛色暗淡发黄、精神萎靡等表现;OVA+VD3组小鼠也有上述表现但程度较轻,雾化结束30min内逐渐缓解;NC组小鼠雾化开始时3min内出现活动增加,但很快恢复正常,多次雾化后毛发、饮食及活动未受到明显影响。2.肺组织病理变化:OVA组小鼠肺组织HE染色观察可见支气管管腔狭窄、气道上皮细胞排列紊乱、明显的炎性细胞浸润(其中多为嗜酸性粒细胞);PAS染色观察到气道粘液分泌增多、杯状细胞增生明显;OVA+VD3组小鼠肺组织气管结构相对完整,炎性细胞浸润程度较OVA组减轻,嗜酸性粒细胞减少,粘液分泌及杯状细胞增生等病理变化程度较轻;NC组小鼠肺组织支气管管壁结构完整,上皮细胞排列整齐,未观察到粘液分泌、杯状细胞增生等病理变化。3.NLRP3、Caspase-1蛋白表达情况:免疫组化染色观察到在小鼠肺组织中,NLRP3、Caspase-1蛋白沉积于气道管腔及肺泡腔的内侧壁,主要表达于细胞质,蛋白阳性表达呈棕黄色,从阳性表达面积来看,OVA组NLRP3及CaspaseLapatinib molecular weight-1蛋白表达最高,OVA+VD3组肺组织NLRP3及Caspase-1蛋白表达次之,NC组NLRP3及Caspase-1蛋白表达最低。进一步用Western blot检测发现OVA组NLRP3及Caspase-1蛋白表达水平高于NC组,差异具有统计学意义(P值<0.01),OVA+VD3组表达较OVA组降低,差异具有统计学意义(P值<0.05)。4.炎症因子IL-18、IL-1β水平:OVA组小鼠肺泡灌洗液中IL-18(131.25±7.26ng/L)、IL-1β(114.25±4.45ng/L)水平高于NC组(92.85±7.27ng/L,65.43±4.33ng/L),差异均具有统计学意义(P值均<0.05);与OVA组比较,OVA+VD3组小鼠肺泡灌洗液IL-18(116.02±5.66ng/L)、IL-1β(84.29±4.38ng/L)水平较低,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。5.相关性分析:经Person相关性检验分析,各组小鼠肺组织中NLRP3蛋白表达水平与Caspase-1蛋白表达水平呈正相关(r=0.9088,P值<0.001);NLR P3蛋白表达水平与肺泡灌洗液中IL-18(r=0.8585,P值<0.001)、IL-1β(r=0.9428,P值<0.001)水平呈正相关;Caspase-1蛋白表达水平亦与肺泡灌洗液中IL-18(r=0.8422,P值<0.001)、IL-1β(rJNJ-42756493分子式=0.8964,P值<0.001)水平呈正相关。结论:1.在哮喘小鼠模型中可发生NLRP3炎症小体激活,促进气道炎症因子IL-1β和IL-18的释放增加,促进气道炎性反应,导致气道结构受损。2.1,25二羟基维生素D3可以通过抑制NLRP3炎症小体活化所介导的炎症级联反应,减轻气道炎症,改善小鼠哮喘症状。