动物源性食品中四环素类药物与氨基糖苷类药物的残留会对人类健康带来潜在危害。本论文旨在制备出四环素类与氨基糖苷类药物的受体,以其为识别元件,建立新型的检测方法,对这两类兽药在动物源性食品中的残留进行检测。首先,本研究合成了一种四环素的光亲和标记-活性导向蛋白谱探针,从耐四环素的大肠杆菌中捕获到了一种天然TetR蛋白。分子对接结果表明,该蛋白与10种四环素类药物(TCs)的结合能在7.58-8.56 kcal/mol之间,它们之间主要通过疏水作用力连接,药物分子主要结合位点在四环素母环上。表面等离子共振实验(SPR)表明,该蛋白与10种TCs的绝对亲和系数在17.672-25.110之间。以该天然TetR蛋白为识别元件建立了一种直接竞争化学发光法,用于检测牛奶中的10种TCs。结果显示,该方法对10种TCs的IC50值为0.084-0.32 ng/mL,检测限为0.002-0.009 ng/mL,在空白牛奶样品中的添加回收率为68.4%-91.3%。然后,研究者对上述天然TetR蛋白进行了定点突变,将139位组氨酸突变为色氨酸。分子对接结果购买VP-16表明,TetR单点突变体与10种TCs的结合能在7.13-9.26 kcal/mol之间,它们之间主要通过疏水作用力与Pi-Pi键连接,药物分子主要结合位点在四环素母环上。SPR结果表明,TetR单点突变体与10种TCs的绝对亲和力在23.941-33.327之间。以该TetR单点突变体为识别元件建立了一种荧光偏振法,用于检测牛奶中的10种TCs。结果显示,10种TCs的IC50值为15.5-55.2 ng/mL,检测限为0.4-1.5 ng/mL,在空白牛奶样品中的添加回收率为71.5%-95.4%。当上述天然TetR蛋白的135位丝氨酸突变为苯丙氨酸,142位亮氨酸突变为赖氨酸时,受体的稳定性有明显提升。分子对接结果表明,TetR双点突变体与10种TCs的结合能在8.03-9.64 kcal/mol之间,它们之间主要通过疏水作用力与氢键连接,药物分子主要结合位点在四环素母环上。以TetR双点突变体为识别元件建立了一种半均相竞争荧光法,用于检测牛奶中10种TCs。结果显示,对10种TCs的IC50值为9.3-21.1 ng/mL,检测限为0.32-0.94 ng/mL,在空白牛奶样品中的添加回收率为74.9%-92.64%。另外,本研究表达了赖氨酸芽孢杆菌的核糖体S12蛋白(RPSL12)。分子对接结果表明,RPSL12与10种氨基糖苷类药物(AGs)的结合能在5.15-5.84 kcal/mol之间,它们之间主要通过疏水作用力连接。SPR结果表明,RPSL12与10种AGs的绝对亲和力在11.aviation medicine358-26.102之间。以该RPSL12为识别元件建立了一种荧光偏振法,用于检测猪肉样品的10种AGs。结果显示,对10种AGs的IC50值为47.6-72.2 ng/g,检测限为2.1-12.1 ng/g,在空白的猪肉样品中的添加回收率为74.5-97.6%。然后,研究者将大肠杆菌的RPSL12基因与海肾荧光素酶的基因连接,表达出了一种RPSL12-Rluc融合蛋白。分子对接结果表明,该RPSL12与7种AGs的结合能在5.44-6.32 kcal/moL之间,它们之间主要通过疏水作用力连接。SPR结果表明,RPSL12-Rluc与10种AGs的绝对亲和力在12.502-25.235之间。以该RPSL1 2-Rluc融合蛋白为识别元件,建立了一种间接竞争生物发光法,用于检测猪肉样品中7种AGs。结果显示,对7种AGs的IC50值为43.6-75.5 ng/g,检测限为0.51-1.1 ng/g,在空白的猪肉样品中的添加回收率为73.8%-96.2%。最后,研究者将大肠杆菌的RPSL12基因与大肠杆菌的TetR基因连接,表达了 RPSL12-TetR融合受体。以其为识别元件,建立了一种二重化学发光法和一种二重荧光法,用于检测猪肉样品中10种TCs和10种AGs。结果显示,二重化学发光法对 10 种 TCs 的 IC50 值为 0.0287-0.0427 ng/g,检测限为 0.0016-0.0064 ng/g,在空白猪肉样品中的添加回收率为71%-92%;对10种AGs的IC50值为3.8-17 ng/g,检测限为0.21-1.8 ng/g,在空白猪肉样品中的添加回收率为70.3%-92%。二重荧光法对10种TCs的IC50值为35.7-54.7ng/g,检测限为2.7-6.4 ng/g,在空白猪肉样品中的添加回收率为68.7%-91%;对10种AGs的IC50值为26-106.3 ng/g,检测限为1.4-10.2 ng/g,在空白猪肉样品中的添加回收率为71.3%-90%。综上所述,本论文以受体为识别元件建立了 7种针对BMN 673小鼠AGs与TCs的检测方法。结果表明,这些方法可以对AGs和TCs进行多残留快速检测,对保障动物源性食品安全、维护消费者身体健康具有重要意义。