目的:1、探索PP2A-56α和c-MYC在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)亲本株细胞和耐药株细胞中的表达;2、探究PP2A-B56α激活剂(DT-061)对利妥昔单抗耐药的DLBCL细胞的细胞活力及凋亡的影响;3、研究DT-061在利妥昔单抗耐药的DLBCL细胞中对PP2A-B56α/AKT/GSK-3β/c-MYC信号通路的作用及影响。方法:1、课题前期已使用“浓度梯度加药法”成功构建对利妥昔单抗耐药的2株DLBCL细胞株(OCI-LY8、OCI-LY18),采用CCK-8法和流式细胞术等实验测定其耐药性。2、用浓度梯度(1、5、10、15、20μg/ml)的DT-061分别处理两个DLBCL耐药株细胞,然后在24h、48h、72h后应用细胞毒性试验检测利妥昔单对耐药株细胞的CDC效应。3、用半抑制浓度的DT-061和利妥昔单抗耐药的DLBCL耐药株共培养,然后48h后采用CCK-8法和流式细胞术测定耐药细胞株的细胞活力和凋亡率。4、先用Western Blot检测在DLBCL耐药株细胞和亲本株细胞中PP2A和c-MYC蛋白的表达,然后用半抑制浓度的DT-061与DLBCL耐药株细胞共培养48h后提取细胞蛋白,用Western Blot等方法检测PP2A-B56α、AKT、GSK-3β以及c-MYC蛋白的表达水平变化,从而研究DT-061对AKT/GSK-3β/c-MYC信号通路的影响以及对利妥昔单抗耐药的拮抗效应及分子机制。结果:1、用不同浓度(0、2、10、50、100μg/ml)利妥昔单抗处理DLBCL亲本株细胞和耐药株细胞后,相较于耐药株细胞,亲本株细胞的细胞活力降低的更加明显,而且降低趋势均呈浓度依赖性;细胞的凋亡比率明显增加,趋势也呈现利妥昔单抗浓度依赖性,且与对照组相比结果均具有统计学意义(P<0.05)。2、用不同浓度(1、5、10、15、20μg/ml)的DT-061处理DLBCL耐药株细胞24h、48h和72h,细胞活力下降具有浓度依赖性和时间依赖性的特征,且结果具有统计学意义(P<0.05)。3、半抑制浓度的DT-061处理DLBCL耐药株细胞,耐药株细胞的细胞活力明显下降,细胞凋亡率明显增高。4、用Western Blot实验分别检测DLBCL亲本株细胞和耐药株细胞中PP2A-B56α和c-MYC的表达情况,相较于亲本株细胞,耐药株细胞中PP2A-B56α的表达明显下降,c-MYC的表达明Eastern Mediterranean显升高。5、半抑制浓度的DT-061处理DLBCL耐药株细胞,采用Western Blot实验检测PPR428小鼠2A-B56α、AKT、GSK-3β以及c-MYC蛋白表达,相较于对照组,在DT-061处理后的耐药株细胞中,PP2A-B56α的表达明显升高,AKT的表达明显下降,GSK-3β的表达明显增高,c-MYC的表达明显下降,且结果均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1、PP2A-B56α在对利妥昔单抗耐药的DLBCL细胞株中的表达明显下降,c-MYC的STM2457体外表达明显上升。2、DT-061能够降低对利妥昔单抗耐药的DLBCL细胞株的细胞活力,并诱导耐药株细胞的凋亡。3、DT-061可以通过激活PP2AB56α使得耐药株细胞中的AKT蛋白表达下降,GSK-3β蛋白的活性增强,加速cMYC蛋白的降解,抵抗利妥昔单抗的耐药性,从而影响利妥昔单抗耐药的DLBCL的发展进程。