塞拉菌素通过促进自噬体积累抑制人结肠癌细胞增殖的研究

目的 研究塞拉菌素(Selamectin,Sela)对人结肠癌细胞SW480自噬的影响及蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在其中的调控作用。方法 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测Sela对SW480细胞的半抑制浓度IC50;克隆形成方法检测Sela对SW480细胞的长期增殖能力抑制作用;Sela与不同死亡抑制剂联合处理、Sela与自噬抑制剂联合处理作用于SW480细胞,MTT法检测Sela对SW480细胞活力的影响;pEGFP-LC3质粒及pmCherry-EGFP-LC3串联质粒转染SW480细胞,荧光显微镜观察检测Sela诱导下自噬体和自噬溶酶体的形成情况。蛋白免疫印迹法测定自噬相关蛋白LC3、p62以及Akt/mTOR通路相关蛋白的表达情况。结果 与对照组相比,Sela处理后SW480细胞活力明显下降,且成浓度依赖性,IC50为18.3 μmol/L;克隆形成实验结果表明,与对照组相比,Sela处理对SW480细胞增殖具有长效抑制作用,差异有统计学意义(P<0.001);随着Sela作用浓度的升高,SW480细胞内的LC3-II和p62含量均逐渐上升,自噬体不断累积及自噬溶酶体形成减少;自噬抑制剂Wortmanin与Sela联合处理,减少了LC3-II的转换,明显恢复了Sela对SW480细胞的生长抑制作用;而HCQ则增加GSKJ4了SW480细胞内LC3-II的累积,明显加剧了SeMedicago truncatulala对SW480细胞的生长抑制。Sela作用后,SW480细胞中p-Akt,p-mTOR以及下游p-p70S6k的蛋白表达量明显下调。结论 Sela具有抑制结肠癌S更多W480细胞的作用,其潜在作用机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路从而诱发SW480细胞内自噬体的积累有关。