目的：构建表达结核分枝杆菌EsxV/W融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌（MS），分析重组MS的表型及对巨噬细胞功能的影响。方法：原核表达获取EsxV/W融合蛋白，纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体；电击转化法构建重组菌株MS-EsxV/W及CL 318952分子量空载菌株MS-vec，使用制备的多克隆抗体检测融合蛋白在MS中的表达；分析表达EsxV/W融合蛋白的重组MS的菌落形态、生物膜及生长速率；菌落计数法检DS-3201核磁测重组MS在溶菌酶、孔雀绿、低pH、SDS、H2O2、NaNO2等不同环境条件下的存活能力，分析EsxV/W融合蛋白对MS表型的影响；重组MS侵染ANA-1巨噬细胞，Griess法检测ANA-1细胞NO的释放量，酶联免疫吸附实验检测ANA-1细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的释放量，菌落计数法检测重组MS在ANA-1细胞内的存活能力。结果：成功构建能表达EsxV/W融合蛋白的重组菌株MS-EsxV/W，表达EsxV/W融合蛋白对MS的菌落形态、生物膜形成及生长速率无显著影响；表达EsxV/W融合蛋白不改变MS对溶菌酶、孔雀绿与acute otitis media低pH的耐受力，但可降低对SDS的耐受力，增强对H2O2与NaNO2的耐受力；侵染ANA-1细胞一定时间后，与MS-vec比较，MS-EsxV/W侵染的ANA-1细胞NO、TNF-α、IL-6释放量明显增加，且MS-EsxV/W的细胞内存活能力高于MS-vec。结论：EsxV/W融合蛋白可改变MS的表型并调控ANA-1巨噬细胞的免疫应答反应，有助于后续对esxV/W基因功能的探究。