本研究以槲皮素为研究对象,利用鼠伤寒沙门氏菌LPS诱导SPF鸡胚建立十二指肠和心脏炎症反应模型,旨在探讨槲皮素对LPS诱导鸡胚十二指肠和心脏炎症反应、自噬和程序性细胞死亡的保护效应,为禽类养殖中抗生素的替代品提供参考数据。为了避免环境脂多糖(LPS)和肠道菌群产生的LPS暴露,选择SPF鸡胚,将鸡胚随机分为对照组、PBS组、PBS+乙醇组、LPS诱导组(125、500或1000 ng LPS/鸡胚),槲皮素组(槲皮素浓度为40 nmo L/鸡胚),槲皮素预处理组Ⅰ(125 ng LPS/鸡胚+槲皮素浓度为40 nmo L/鸡胚),槲皮素预处理组Ⅱ(500 ng LPS/鸡胚+槲皮素浓度为40nmo L/鸡胚)。鸡胚在15日胚龄通过尿囊腔注射上述溶液;在19日胚龄,采集鸡胚的十二指肠和心脏,应用组织病理学(HE染色)检查十二指肠和心脏的炎症反应变化,应用RT-q PCR测定炎症细胞因子、紧密连接、自噬和程序性细胞死亡相关因子的m RNA表达,应用免疫组化和蛋白印迹方法测定炎症细胞因子、紧密连接自噬和程序性细胞死亡相关因子的蛋白表达。结果显示如下:1、与PBS组相比,十二指肠黏膜受到LPS诱导后,淋巴集结出现炎症细胞浸润,心脏受到LPS诱导后出现异嗜性粒细胞浸润,出现炎性反应;与LPS组相比,槲皮素预处理组缓解了炎症反应。与LPS组相比Smoothened Agonist说明书,槲皮素预处理组降低了LPS诱导十二指肠和心脏炎症相关因子的m RNA表达(TLR4、NF-κB1、IFNγ、IL-1β、IL-6、IL-8、p38、MMP3和MMP9);减弱了十二指肠的绒毛、隐窝和固有层的TLR4、MMP3和MMP9蛋白的定位表达,同时LPS诱导十二指肠后TLR4、IL-1β、MMP3和MMP9的蛋白表达也显著减少;显著降低心肌纤维TLR4和MMP9蛋白的定位表达,心脏TLR4、IFNγ、MMP3和MMP9的蛋白表达显著减少。与LPS组相比,槲皮素预处理组提高了LPS诱导十二指肠mucin 2的m RNA表达,降低了Claudin 1、Occludin和ZO-1的m RNA表达;同时显著降低Claudin 1和Occludin的蛋白表达;降低了LPS诱导十二指肠的绒毛、隐窝、固有层和内环外纵肌层的Claudin 1和ZO-1蛋白的定位表达。与LPS组相比,槲皮素预处理组降低心肌纤维Claudin 1和ZO-1的m RNA表达,减弱Claudin 1免疫组化蛋白表达。可见,槲皮素改善了LPS诱导十二指肠和心脏的TLR4/NF-κB1/p38信号通路,减弱炎症因子风暴,降低细胞外基质的裂解,改善十二指肠和心脏细胞的通透性。2、与LPS组相比,槲皮素预处理组降低了LPS诱导十二指肠自噬相关的m RNA表达(LKB1、PEPT1、PPARα、SGLT1、AMPKα1、AMPKα2、Beclin-1、ATG5、ATG7、LC3A和LC3B);减弱了其绒毛、隐窝、固有层和内环外纵肌层的AMPKα2、ATG5和LC3-Ⅱ蛋白的定位表达。与LPS组相比,槲皮素预处理组降低了心脏的APOA4、PPARα、SGLT1、AMPKα1、AMPKα2、Beclin-1、ATG5、ATG7和LC3B的m RNA表达;减弱了AMPKα2和LC3-Ⅱ蛋白的定位表达;降低AMPKα1、LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ的蛋白表达。可见,槲皮素改善了LPS诱导的十二指肠和心脏的能量缺乏,缓解了LPS诱导的十二指肠和心脏的自噬。3、与LPS组相比,槲皮素预处理组降低了LPS诱导十二指肠和心脏的程序性细胞死亡基因(TNFα、Fas、Bcl-2、CASP1、CASP3、CASP12和RIPK1)的m RNA表达,减弱了十二指肠的绒毛、隐窝、固有层、肠肌神经丛、淋巴集结和内环外纵肌层的CASP1和CASP3蛋白的定位表达intravaginal microbiota,减少了十二指肠CASP1和CASP3的蛋白表达;减弱了心肌CASP1和CASP3蛋白的定位表达,降低了Galunisertib体内心肌CASP1和CASP3的蛋白表达。可见,槲皮素缓解了LPS诱导十二指肠和心脏的细胞焦亡和细胞凋亡信号通路。综上所述,这些数据显示槲皮素能够缓解LPS诱导十二指肠和心脏炎症反应,降低自噬和缓解程序性细胞死亡。