基于网络药理学和实验验证探讨蛭龙活血通瘀胶囊抗高血压心肌纤维化作用机制

目的:通过网络药理学联合实验验证探讨蛭龙活血通瘀胶囊抗高血压心肌纤维化可能的作用靶点和机制。方法:使用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和中药分子机制的生物信息学分析工具(BATMAN-TCM)筛选蛭龙活血通瘀胶囊中药的成分和靶点,并使用UniProt数据库将靶点Naporafenib价格标准化;从GeneCards数据库获得心肌纤维化疾病靶点,疾病靶点和药物靶点的交集靶点通过Venny网站获得,交集靶点通过STRING数据库获得蛋白互作关系Immediate-early gene(PPI),使用Cytoscape3.72软件对PPI进行分析筛选获得核心靶点,通过R软件对核心靶点进行核心靶点的基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。实验部分,将72GSK1120212 molecular weight只C57BL6J小鼠,随机分为正常对照组,模型对照组,蛭龙活血通瘀胶囊6.24 g/kg组,以及福辛普利钠2.6×10~(-3 )g/kg组,每组12只,全部小鼠皮下植入Alzet渗透压泵,正常对照组输注生理盐水,其余组输注1.46 mg/kg Ang II持续28 d造高血压心肌纤维化模型,造模手术后,灌胃给药,同时每周测血压,根据收缩压达是否达到150 mmHg及马松染色(Masson)结果评估造模。28 d结束后,行HE染色和Masson染色评估心肌细胞状态和纤维化情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)验证预测的关键靶点。结果:网络药理学分析得到蛭龙活血通瘀胶囊含有45种成分,共有靶点154个,以前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、白介素10(IL10)、细胞间粘附分子1(ICAM1)为关键靶点;GO富集有1 782条,KEGG富集有85条,以IL-17信号通路、AGE-RAGE信号通路、JAK-STAT信号通路、PI3K-AKT信号通路、TNF信号通路为关键通路。实验部分,输注Ang II的小鼠收缩压均上升到150 mmHg及Masson显示心肌胶原纤维蓝染明显,表明造模成功。与正常对照组比较,模型对照组心肌排列紊乱,心肌细胞肥大,心肌胶原纤维蓝染区域增多,心肌组织Cox2、ICAM1 mRNA及蛋白表达显著上调(P < 0.01),IL-10 mRNA及蛋白表达显著下调(P < 0.01);与模型对照组比较,各药物治疗组的心肌排列紊乱及心肌肥大呈不同程度好转,心肌胶原纤维蓝染区域明显减少(P < 0.01),心肌组织Cox-2、ICAM1 mRNA及蛋白均明显下调(P < 0.05或P< 0.01),IL-10 mRNA及蛋白显著上调(P < 0.01)。结论:蛭龙活血通瘀胶囊可能通过以PTGS2、IL-10、ICAM1为代表的交集靶点和以PI3K-AKT等通路为代表的多通路,起到协同抗高血压心肌纤维化的作用。