CCS(Copper chaperone for superoxide dismutase)和COX17(Cytochrome c oxidase copper chaperone 17)蛋白是两种常见的铜(Cu)伴侣蛋白,在Cu稳态调控中具有重要作用。为深入研究黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco Cu稳态调控机制,从黄颡鱼cDNA中克隆获得了810和192 bp的ccs (Pfccs)和cox17 (Pfcox17)基因编码序列,并成功构建了pET32a(+)-Pfccs和pET32a(+)-Pfcox17重组表达载体;转化重组质粒到E. coli Rosetta (DE3)感受态细胞中,以IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)作为诱导剂诱导表达,通过SDS-PAGE鉴定重组蛋白表达,发现PfCCS蛋白主要在沉淀中表达, PfCOX17蛋白主要在上清中表达;分别采用包涵体和亲和层析纯化的方法得到了纯度较高的重组PfCCS和PfCOX17蛋白;以纯化得到的PfCCS和PfCOX17蛋白免疫Balb/C小鼠三次,制备多克隆抗体。通过Western Blot鉴定了PfCCSCobimetinib半抑制浓度和PfCOX17抗血清可以分别特异性识别重组PfCCSCDK抑制剂和PfCOX17蛋白,也可以分别特异性识别黄颡鱼内源性CCS和COX17蛋白。通过Western Blot对黄颡鱼CCS和COX17蛋白在鳃、心脏和肝脏中的分布情况进行检测,发现黄颡鱼CCS和COX17蛋白在肝脏中具有较高的表达水平, CCS蛋白在鳃中的表达水平最低,而COX17蛋白在鳃和心脏中的表达水平都很低。综上所述,本研究成功制备了黄颡鱼CCS和COX17蛋白的多克隆抗体,为深pacemaker-associated infection入研究CCS和COX17蛋白在Cu转运中的作用以及黄颡鱼Cu稳态调控机制奠定基础。