目的鹅膏毒肽(amanitin,AMA)是全世界范围内蘑菇中毒致死的主要因素,其毒理机制的不完善,导致现有治疗策略缺乏有效性。临床研究结果表明,AMA对心脏、肝脏、肾脏、胃肠道、血液系统及神经系统等器官均有不同程度的损伤。本研究旨在利用多种人源细胞系探索AMA对不同靶器官毒性差异的机制。材料与方法以不同浓度梯度的α、β、γ-AMA(0.3,1,3,10,30,100μmol·L~(-1))处理7种人源细胞,分别为人肝癌细胞HepG2、人脐静脉内皮细胞HUVEC、人神经母细胞瘤SH-SY5Y、人胃癌细胞BGC-823、人心肌细胞AC16、人结直肠癌细胞HCT-8和人非小细胞肺癌细胞A549。采用CCK-8法确定AMA在不同细胞系中的IC50;并通过光镜观察细胞死亡形态,应用不同细胞死亡通路关键效应分子的抑制剂MK-2206体外,以明确AMA诱导的细胞死亡方式;应用免疫荧光和免疫印迹法(Western Blot)检测介Intein mediated purification导AMA摄取的有机阴离子转运多肽(OATP1B3)和Na+-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)的表达水平。结果 CCK-8结果显示,α-AMA对HepG2、HUVEC、SH-SY5Y、BGC-823等毒性敏感细胞系的IC50分别为8μmol·L~(-1)、6μmol·L~(-1)、9μmol·L~(-1)、8μmol·L~(-1);对AC16、HCT-8、A549等毒性不敏感细胞系的IC50均大于100μmol·L~(-1)。光镜结果显示,α-AMA处理后细胞发生皱缩,形成凋亡小体,且泛caspase抑制剂Z-VAD-FMK(50μmol·L~(-1))能逆转α-AMA细胞毒性,提示AMA导致细胞的死亡方式可能为凋亡。免疫荧光分析及Western Blot结果显示,敏感细胞系OATP1B3Emricasan说明书和NTCP的蛋白表达水平显著高于不敏感细胞系。结论 AMA对不同细胞系的毒性存在显著差异,其机制可能与OATP1B3和NTCP的表达水平不同相关。