目的:(1)初探不同剂量四氯化碳联合甲状腺素建立小鼠肝阴虚模型。(2)基于四氯化碳联合甲状腺素的小鼠肝阴虚模型,探讨不同剂量鳖血柴胡对肝阴虚小鼠的影响。(3)基于血清代谢组学和肝脏代谢组学,探讨鳖血柴胡对肝阴虚小鼠的代谢物和代谢途径。(4)优化超声辅助法提取鳖血柴胡挥发油工艺。(5)探究十个批次鳖血柴胡挥发性成分的差异。方法:(1)四氯化碳联合甲状腺素的小鼠肝阴虚模型的建立采用四氯化碳橄榄油溶液联合甲状腺片混悬液制备肝阴虚模型,设置20%MCC950小鼠、10%、5%三种剂量四氯化碳橄榄油溶液每周两次腹腔注射,每天灌胃甲状腺片混悬液,造模时间2周,观察小鼠体重、饮水量等一般状态;检测小鼠血清和肝脏的肝功能指标和阴虚证指标;观察小鼠肝组织病理学变化,确定四氯化碳最佳剂量。(2)不同剂量鳖血柴胡对肝阴虚小鼠的药效学研究制备肝阴虚模型小鼠,给予给药组小鼠不同剂量鳖血柴胡水煎液,检测小鼠血清和肝脏的肝功能、抗氧化、抗炎等生化指标,观察肝组织病理切片。评价柴胡经鳖血炮制后对肝阴虚小鼠的治疗效果。(3)从血清代谢组学和肝脏代谢组学selleckchem角度探讨鳖血柴胡治疗肝阴虚小鼠的研究从生物小分子层面分析鳖血柴胡治疗小鼠肝阴虚的作用。通过对空白组、模型组和给药鳖血柴胡组的血清差异代谢物、肝脏差异代谢物进行多元统计分析,鉴定出潜在生物标记物,进行代谢通路富集分析。(4)鳖血柴胡挥发油超声辅助提取工艺研究采用超声辅助提取鳖血柴胡挥发油,以鳖血柴胡挥发油得油率为评价指标。通过单因素和Box-Behnken响应面法设计对液料比、超声时间、超声温度三个因素进行考察,以期获得鳖血柴胡挥发油的最佳超声提取工艺。(5)基于气质联用技术分析不同批次的鳖血柴胡挥发性成分将山西、陕西、甘肃、内蒙、山东、河北产地的十批柴胡进行鳖血炮制,使用气质联用技术分析十批鳖血柴胡的挥发性成分,运用面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果:(1)与空白组小鼠相比,模型1、2、3组小鼠血清和肝脏指标中ALT、c AMP、TNF-α升高,AST、c AMP、c AMP/c GMP、IL-6显著升高(P<0.05),IL-10降低,c GMP、SOD显著降低(P<0.05)。病理切片中脂肪空泡数量模型3组>模型2组>模型1组,炎性细胞浸润程度模型3组>模型2组和模型1组。(2)与模型组小鼠相比,阳性药组、高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠的血清中ALT、AST、c AMP、c AMP/c GMP、IL-6、TNF-α降低,c GMP、IL-10升高,肝组织中MDA降低,SOD、TP升高。各给药组AST、c GMP显著升高(P<0.05),IL-6显著降低(P<0.05),高、低剂量组ALT显著降低(P<0.05),高、中剂量组IL-10显著升高(P<0.05),中、低剂量组TNF-α显著降低(P<0.05),高、中剂量组c AMP/c GMP显著降低,高、中剂量组SOD显著升高(P<0.05),阳性药组、中、低剂量组的MDA显著降低(P<0.05),中剂量组、低剂量组HYP显著降低(P<0.05),高剂量组TP显著降低(P<0.05)。各给药组均有不同程度的纤维化趋势和不同数量的脂肪空泡。高剂量组和阳性药组的细胞排列比中剂量组、低剂量组紊乱,同时出现炎性细胞浸润。高剂量组和低剂量组的脂肪空泡数量多于中剂量组与阳性药组。(3)空白组和模型组共鉴定出252个血清差异代谢物和229个肝脏差异代谢物,模型Child immunisation组与给药鳖血柴胡组共鉴定出240个血清差异代谢物和122个肝脏差异代谢物。KEGG通路富集结果分析,空白组与模型组血清差异代谢物富集到的代谢通路有核苷酸代谢、嘌呤代谢、类固醇激素生物合成、嘧啶代谢等代谢通路,肝脏代谢物富集到的代谢通路有核苷酸代谢、类固醇激素生物合成、初级胆汁酸生物合成、花生四烯酸代谢等代谢等代谢通路。给药后,有20个血清差异代谢物、14个肝脏差异代谢物经鳖血柴胡治疗后趋向正常水平,并对其进行KEGG通路富集结果显示,给药鳖血柴胡后,通过调控二氢维生素K1从而影响泛醌和其他萜类-醌生物合成和辅因子的生物合成中的维生素K生物合成途径。通过调控葫芦巴碱从而影响烟酸和烟酰胺代谢,通过调控5’-磷酸胸腺从而影响嘧啶脱氧核糖核苷酸生物合成。(4)超声温度、液料比和超声时间的交互作用、超声时间和超声温度的交互作用对鳖血柴胡挥发油得率有显著性影响(P<0.05),液料比、超声时间、液料比和超声温度的交互作用对鳖血柴胡挥发油得率的影响不显著,最终确定液料比25:1,超声时间15min,超声温度53℃为最佳提取工艺。对最佳工艺进行试验验证,得到挥发油平均得油率为3.78%(RSD为0.48%),与理论预测值3.79%无显著差异.(5)十个批次的鳖血柴胡总共检测出55种挥发性成分,山西、甘肃1、甘肃2、陕西1、陕西2、陕西3、内蒙1、内蒙2、山东、河北批次的样品分别检测到23、22、29、20、20、16、25、40、22、14种,其鳖血柴胡挥发性成分分别占总检出物的41.81%、40%、52.72%、36.36%、29.09%、45.45%、72.72%、40%、25.45%。其中,环己基甲基硅烷和苯乙醛是前9个样本的共有成分,环己基甲基硅烷的相对百分含量在12%～35%之间,山西批次的样本环己基甲基硅烷含量最高,苯乙醛的相对百分含量在0.6%～1.6之间,陕西2批次的样本苯乙醛含量最高,S10批次的鳖血柴胡未检测到这两个成分。结论:四氯化碳联合甲状腺素所造的肝阴虚小鼠模型可靠;不同剂量的鳖血柴胡水煎液对小鼠肝阴虚均有一定的治疗作用,主要是通过影响维生素K生物合成途径、烟酸和烟酰胺代谢、嘧啶脱氧核糖核苷酸生物合成等代谢途径从而起到治疗作用;超声辅助法可适用提取鳖血柴胡挥发油,且具有设备简单、操作方便等优点;十个批次鳖血柴胡挥发性成分的组成和含量存在差异。