目的卤乙酰胺(Haloacetamides,HAcAms)是饮用水中发现的一类含氮的新非受控消毒副产物(Disinfection by-products,DBPs),因其细胞毒性和遗传毒性极强,且远超受控的三卤甲烷类和卤乙酸类DBPs而备受关注。前期研究表明水中某些HAcAms-DBPs是极强的氧化应激原,可诱导肝细胞损伤增强肝毒性。因氧化应激是非酒精性脂肪肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)发生发展的重要影响因素,因此,探析现实暴露水平的HAcAms-DBPs混合暴露是否能引起NAFLD的主要表型及其可能机制,对认识HAcAms-DBPs在NAFLD中的作用有重要的公共卫生学意义。材料和方法本研究以上海市某自来水厂出厂水中HAcAms-DBPs现实暴露组份和浓度为基础,以人源性肝LO-2细胞为模型,研究现实暴露水平1、10、100和1000倍的HAcAms-DBPs模拟混配对LO-2细胞的毒性、铁死亡状况、氧化应激反应特征、脂质代谢与沉积及与重要机体防御核因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid2-related factor 2,NRF2)和过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)通路影响。利用CRISPR/Cas9技术分别构建NRF2稳定沉默(NRF2 knock-down,NRF2-KD)和PPARγ稳定沉默(PPARy knock-down,PPARγ-KD)的LO-2细胞,研究HAcAms-DBPs混合暴露引起肝细胞损伤和脂质沉积的作用基Hepatic decompensation础与环节。结果上海某selleck SB203580自来水厂出厂水中检出溴乙酰胺、氯碘乙酰胺、氯乙酰胺、溴碘乙酰胺、溴氯乙酰胺和溴二氯乙酰胺6种HAcAms-DBPs,总浓度为13.05μg/L。1-100倍现实暴露水平的HAcAms-DBPs对LO-2细胞无明显的细胞毒性,但100倍现实暴露浓度HAcAms-DBPs可引起LO-2细胞谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)分泌增加,诱导LO-2细胞活性氧(ROS)和脂质过氧化物(LPO)生成,激活NRF2通路介导的氧化应此网站激反应和PPARγ表达。100倍现实暴露水平的HAcAms-DBPs可引起LO-2细胞脂质沉积和甘油三酯含量显著升高(P<0.05),增加细胞脂质从头合成通路中ATP柠檬酸裂解酶(ACL)等蛋白表达水平;而HAcAms-DBPs未能引起NRF2-KD和PPARγ-KD的LO-2细胞中脂质沉积,但对PPARy-KD的LO-2细胞中脂质从头合成通路的激活效应减弱。100倍现实暴露水平的HAcAms-DBPs可显著升高LO-2细胞内铁离子水平(P<0.05),并降低铁死亡标志蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)表达,引起细胞铁死亡,且HAcAms-DBPs低剂量混合暴露加剧了NRF2-KD细胞的铁死亡。结论 HAcAms-DBPs可经激活NRF2/PPARγ通路引起肝细胞脂质沉积和甘油三酯聚集,通过诱导铁死亡加剧肝损伤。因此,HAcAms-DBPs是NAFLD的重要风险因子。未来应进一步观察HAcAms-DBPs暴露对人群NAFLD影响。