炎症是动物应对EPZ-6438分子量感染的正常保护性反应。然而,一旦炎症反应不受控制,则可能引起financing of medical infrastructure动物产生自身免疫或自身炎症性疾病。肿瘤坏死因子α(Tumour necrosis factor-alpha,TNF-α)是一种促炎细胞因子,与多种炎症性疾病相关,例如犬猫类风湿关节炎、炎症性肠病和骨关节炎等。TNF-α等炎性因子引起的炎症反应导致动物机体损伤,造成运动障碍,严重者可危及生命。因此,靶向TNF-α是这些疾病的有效治疗策略,目前TNF-α抑制剂在治疗人自身免疫性疾病方面取得了巨大成功,但缺乏针对TNF-α的兽用治疗研究。巨噬细胞在健康动物体内发挥调节炎症平衡、清除外来异物和维持稳态等作用;在过度炎症刺HDAC抑制剂激下,巨噬细胞发生M1促炎类极化,产生过量的TNF-α,促进炎症细胞因子释放,加速炎症疾病进程,发挥着“双刃剑”作用。当巨噬细胞上表达的受体酪氨酸激酶(Mer TK)与凋亡细胞表面外翻的磷脂酰丝氨酸结合时,Mer TK能够促进巨噬细胞吞噬作用并且诱导细胞向M2抑炎类极化。因此,针对巨噬细胞的功能进行改造,利用Mer TK增强巨噬细胞的吞噬和抑炎能力,加速TNF-α清除,降低其促进炎症能力,具有较高的治疗应用潜力。本研究创新地提出并验证嵌合抗原受体改造巨噬细胞(Chimeric antigen receptor macrophage,CAR-M)用以清除TNF-α,抑制炎症微环境,治疗炎症性疾病的治疗策略。主要研究内容和结果如下:设计嵌合抗原受体蛋白并对巨噬细胞进行重编程构建。将酪氨酸激酶受体Mer TK的胞外抗原结合域(~(19)Gly-~(275)Asn),替换为与TNF-α特异性结合受体,构建了新型的可以识别TNF-α的抑炎性嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor,CAR)。将CAR表达质粒负载于感染巨噬细胞的慢病毒中,使嵌合抗原受体在巨噬细胞细胞膜上完整表达,将巨噬细胞重编程改造为CAR-M。通过进一步研究发现,当CAR-M与TNF-α结合后,激活了胞内Rho A、Rac1和Cdc42吞噬相关信号通路,通过肌动蛋白聚集和肌球蛋白收缩调整细胞骨架,介导了CAR-M对TNF-α的吞噬。CAR-M通过抑制NF-κB信号通路的方式抑制内源性TNF-α受体吞噬TNF-α时引起的炎症因子释放,抑制炎症反应;同时,CAR-M在吞噬TNF-α时可激活SOCS1/3信号通路,抑制细胞因子受体的信号激活,降低细胞因子受体结合炎性细胞因子后的正向反馈效应。进一步利用LPS刺激的条件培养基处理发现,CAR-M能够抑制上清中炎性细胞因子水平,改善细胞炎症微环境。综上所述,本研究利用嵌合抗原受体重编程巨噬细胞,开发构建了靶向TNF-α的新型细胞治疗策略,成功抑制过度炎症的发生发展,为动物炎症性相关疾病的治疗提供了新方法。