研究目的:胃癌(GC)是最常见的癌症相关死亡原因之一。在GC中,KRAS突变的发生率约为16%,这种突变会导致KRAS蛋白质的异常激活,从而促进GC的发生和进展。目前尚未发现有效的针对KRAS突变GC的治疗方法。KRAS突变过度激活了 MAPK信号通路,导致细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)和细胞周期进程的异常调节,引起GC的增殖和细胞周期紊乱。MEK抑制剂直接靶向MAPK通路,抑制RAS突变引起的异常信号INCB018424分子式传导,从而达到治疗癌症的效果。靶向CDK4/6治疗GC主要通过抑制细胞周期激酶发挥作用,它通过阻断细胞周期从G1期到S期的转变,进而抑制癌细胞的生长和增殖。联合使用MEK抑制剂(Trametinib)和CDK4/6抑制剂(Palbociclib)在抑制KRAS突变的结肠癌生长方面产生了显著的协同作用。我们的研究证明了 MEK抑制剂能够增强CDK4/6抑制剂在KRAS突变GC的作用,通过抑制RB蛋白磷酸化以及其介medicinal and edible plants导的其它蛋白靶标的表达导致细胞周期阻滞,包括抑制G1/S期转变和促进细胞凋亡,从而抑制KRAS突变GC的发展。明确靶向MEK和CDK4/6诱导KRAS突变GC细胞周期阻滞的分子机制,将为KRAS突变GC的精准治疗提供理论基础。研究方法:1.采用克隆形成实验和细胞划痕实验观察MEK抑制剂和CDK4/6抑制剂对KRAS突变GC细胞增殖的影响。2.联合转录组测序和蛋白质谱技术筛选KRAS突变GC细胞差异表达基因和蛋白,进一步探索MEK抑制剂和CDK4/6抑制剂联合治疗组显著富集通路。3.进行流式细胞术检测药物对KRAS突变GC细胞周期的影响,进行流式细胞术和TUNEL实验以检测药物对KRAS突变GC细胞凋亡影响。4.采用蛋白质印迹分析检测RB、磷酸化RB、β-catenin、磷酸化β-catenin、Axin2、Cyclin D1、BCL2、BAX、P53蛋白的表达。采用免疫荧光实验对β-catenin、磷酸化RB蛋白染色定位。研究结果:1.MEK抑制剂和CDK4/6抑制剂联合使用可以显著抑制KRAS突变GC细胞的增殖。2.结合转录组AG-221 molecular weight测序和蛋白质谱分析发现MEK抑制剂增强CDK4/6抑制剂对细胞周期信号通路的抑制。3.MEK抑制剂和CDK4/6抑制剂联合使用可以显著降低磷酸化RB、Cyclin D1、BCL2、β-catenin、Axin2和P53的表达水平,显著增加p-β-catenin、BAX、P21蛋白的表…